王躍武，郭俊英，邢煜舒，那生桑，陸景坤

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學，呼和浩特 010059)

朱日很滴丸原處方系蒙醫(yī)國醫(yī)大師蘇榮扎布老師的臨床驗方，具有清心熱、化瘀血和補心的功效，在臨床上使用多年，主治心熱、心赫依、心刺痛和心慌氣短等[1-4]。其處方由廣棗、梔子、紅花和草果等10味藥材組成。目前，該復方在臨床上使用主要以散劑為主，有味苦、服用量大、儲存和攜帶不方便以及患者順應性差等缺點。

滴丸多為舌下含服，藥物通過舌下黏膜直接吸收，進入血液循環(huán)，避免了吞服時引起的肝臟首過效應以及藥物在胃內(nèi)的降解損失，使藥物高濃度到達靶器官，迅速起效[5-6]。本研究將朱日很散劑由傳統(tǒng)劑型改革為滴丸劑。

1 儀器與試藥

1.1儀器 DWJ-SD3型實驗大滴丸機(煙臺潤龍制藥機械設備有限公司)；TAB135-s電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市江南儀器廠)；RC806溶出度測定儀(長沙捷島科學儀器有限公司)；L-2000型高效液相色譜儀(日立高新技術(shù)公司)。

1.2試藥 PEG4 000(批號FS160704211)，PEG6 000(批號FS160704311)，遼寧奧克醫(yī)藥輔料股份有限公司；二甲硅油(批號20160311)，天津市博迪化工有限公司；司盤-80(批號160501)，吐溫-80(批號160701)，四川金山制藥有限公司；卵磷脂(批號20160225)，北京索寶生物科技有限公司；梔子苷(批號110749-201610)，中國食品藥品檢定研究院。

2 方法與結(jié)果

2.1滴丸的制備方法 按照處方比例稱取廣棗等3味藥材，用10倍量體積分數(shù)為70%的乙醇加熱提取2次，每次1.5 h，提取液噴霧干燥，得組分一。按照處方比例稱取肉豆蔻和白檀香等5味藥材，用二氧化碳超臨界萃取法提取揮發(fā)油，得組分二。牛黃和冰片作為組分三直接粉末入藥。稱取適量基質(zhì)，置于燒杯中，水浴加熱融化后，依次加入組分三、乳化劑、組分二和組分一，攪拌均勻后，制備200 mg滴丸。

2.2制備工藝考察

2.2.1乳化劑種類的選擇 選取司盤-80、吐溫-80和卵磷脂3種乳化劑，用量均為4%，其他成分比例不變，開展3組實驗。稱取適量基質(zhì)PEG4 0003份，分別置于燒杯中，75 ℃水浴加熱融化后，依次加入組分三、乳化劑、組分二和組分一，攪拌均勻后，觀察滴丸藥液油水分離和沉淀析出的程度，確定乳化劑對藥液穩(wěn)定性的影響。實驗結(jié)果表明，3種乳化劑的乳化效果為：卵磷脂>吐溫-80>司盤-80，綜合考慮選用卵磷脂作為乳化劑，結(jié)果見表1。

表1乳化劑種類對藥液穩(wěn)定性的影響

Tab.1 The effect of emulsifier type on the stability of medicine liquid

種類油水分離現(xiàn)象沉淀現(xiàn)象吐溫-80明顯多司盤-80明顯多卵磷脂不明顯少

2.2.2乳化劑用量的選擇 設置5種不同比例的卵磷脂：0.5%，1.0%，2.0%，3.0%和4.0%，其他成分比例不變。按照2.2.1項下方法進行操作。實驗結(jié)果表明，卵磷脂5種用量對乳化效果的影響順序依次為：4.0%>3.0%>2.0%>1.0%>0.5%，綜合考慮選擇卵磷脂的用量為4.0%，結(jié)果見表2。

表2乳化劑用量對藥液穩(wěn)定性的影響

Tab.2 The effect of emulsifier dosage on the stability of medicine liquid

卵磷脂的用量/%油水分離現(xiàn)象沉淀情況0.5明顯多1.0明顯多2.0明顯多3.0略明顯略多4.0不明顯少

2.2.3水浴溫度的選擇 水浴加熱溫度選取70，75，80，85和90 ℃，按照2.2.1項下方法進行操作，做5組以溫度為變量的實驗。實驗結(jié)果表明，溫度對滴丸藥液穩(wěn)定性的影響為：在≤80 ℃的條件下，滴丸藥液穩(wěn)定性較好，結(jié)果見表3。

表3水浴溫度對藥液穩(wěn)定性的影響

Tab.3 The effect of heating temperature on the stability of medicine liquid

水浴溫度/℃油水分離現(xiàn)象沉淀情況70不明顯少75不明顯少80略明顯略多85明顯多90明顯多

2.2.4組分加入順序的選擇 稱取適量基質(zhì)PEG4 0002份，分別置于燒杯中，75 ℃水浴加熱融化后，依次按照順序一(組分三，卵磷脂，組分二和組分一)和順序二(組分三，組分二，卵磷脂和組分一)混合各組分，觀察滴丸藥液油水分離和沉淀析出的程度，確定加入順序?qū)λ幰悍€(wěn)定性的影響。實驗結(jié)果表明，組分加入的順序?qū)λ幰悍€(wěn)定性的影響無差別，油水分離現(xiàn)象均不明顯，沉淀較少。

2.3正交實驗優(yōu)選滴丸制備工藝

2.3.1因素水平的選擇 根據(jù)單因素實驗結(jié)果及文獻報道[7-9]，在水浴溫度、滴距、冷凝劑溫度和滴速4個參數(shù)固定的條件下，選取基質(zhì)種類、中間體與基質(zhì)比例和乳化劑的加入量3個因素作為考察因素，各因素設計3個水平，見表4。

表4正交實驗因素與水平

Tab.4 The factors and levels of the orthogonal test

水平因素A,基質(zhì)B,中間體∶基質(zhì)/g∶gC,乳化劑量/%1PEG4 0001∶132PEG 4 000∶PEG6 000=1∶11∶1.543PEG 6 0001∶25

2.3.2正交實驗結(jié)果 為減少滴丸質(zhì)量評價時的主觀誤差，將硬度、色澤和圓整度由好到差分別記為1，2和3 分，加和后的得分作為滴丸的外觀質(zhì)量標準。以溶散時限、丸質(zhì)量差異和外觀質(zhì)量為評價指標，采用L9(34)正交實驗設計，從基質(zhì)種類(A)、中間體與基質(zhì)比例(B)和乳化劑的加入量(C)3個因素考察滴丸成型工藝。正交實驗結(jié)果見表5和表6。其中，丸質(zhì)量差異和溶散時限按照《中國藥典》2015年版二部附錄項下進行操作。外觀質(zhì)量的評分為色澤、硬度和圓整度3項指標考核結(jié)果直接相加。綜合評分=(溶散時限/最大溶散時限)+(丸質(zhì)量差異變異系數(shù)/最大丸質(zhì)量差異變異系數(shù))+(外觀質(zhì)量分數(shù)/最大外觀質(zhì)量分數(shù))。綜合評分分數(shù)越低則滴丸質(zhì)量越好[10-12]。

表5正交實驗結(jié)果

Tab.5 Results of the orthogonal test

實驗號列號1(A)2(B)3(C)4(D)結(jié)果溶散時限/min丸質(zhì)量差異/%外觀質(zhì)量綜合評分11111215.692.821222195.842.131333187.762.542123206.862.552231184.931.862312207.472.773132187.382.783213194.962.293321215.452.2K17.37.97.66.8K26.96.06.87.4K37.17.46.97.1R0.41.90.90.6

表6正交實驗方差分析結(jié)果

Tab.6 Results of variance analysis of the orthogonal test

離差來源平方和自由度 均方 FP因素A0.023 5 2.000 0 0.011 8 0.4>0.05因素B0.606 7 2.000 0 0.303 3 9.2 >0.05因素C0.138 7 2.000 0 0.069 3 1.9>0.05誤差0.065 8 2.000 0 0.032 9 1.0

2.3.3成型工藝結(jié)果分析 由直觀分析可知，各因素作用大小順序為B>C>A，因綜合分數(shù)越低，滴丸質(zhì)量越好，故最佳工藝組合為A2B2C2，即PEG4 000∶PEG4 000為1∶1，中間體∶基質(zhì)為1∶1.5，乳化劑的加入量為4%；方差分析結(jié)果表明，基質(zhì)種類、基質(zhì)與中間體的比例和乳化劑的用量3個因素各水平之間對滴丸的質(zhì)量差異均無統(tǒng)計學意義。

2.4滴丸溶出度測定

2.4.1色譜條件 根據(jù)參考文獻及預實驗[13-15]，選擇梔子苷作為溶出度的考察指標，其色譜條件為：Diamonsil C18色譜柱；乙腈-水(15∶85)為流動相；流速為1.0 mL·min-1；檢測波長為238 nm；柱溫為30 ℃。

2.4.2對照品溶液的制備 精密稱取梔子苷對照品3.2 mg，置于100 mL量瓶中，用甲醇定容，得質(zhì)量濃度為32 μg·mL-1的對照品溶液。

2.4.3供試品溶液的制備 精密稱取朱日很滴丸粉末1.0 g，加入50 mL甲醇，稱定質(zhì)量，超聲處理 30 min，放置冷卻后，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，振蕩至溶液均勻，過濾。精密吸取續(xù)濾液10 mL，置于25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.4.4線性關系考察 精密吸取2.4.2項下制備的對照品溶液1，2，5，10和15 μL，按照2.4.1項下色譜條件進行測定。以梔子苷的進樣量為橫坐標(x)、梔子苷峰面積為縱坐標(y)，繪制標準曲線，得到梔子苷的回歸方程為：y=1 411.4x-660.54(r=0.999 9)。實驗結(jié)果表明，梔子苷在32.0～480.0 ng范圍內(nèi)線性關系良好。

2.4.5精密度實驗 精密吸取供試品溶液10 μL，連續(xù)進樣5次，在2.4.1項色譜條件下，測定峰面積的RSD值為0.38%，結(jié)果表明，該儀器精密度良好。

2.4.6穩(wěn)定性實驗 精密吸取同一供試品溶液，在2.4.1項色譜條件下，于 0，2，4，6，8，12和24 h分別進樣 10 μL，測定，考察其穩(wěn)定性。測得RSD值為 0.68%，結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.7重復性實驗 精密稱取6份樣品，按照2.4.1項下色譜條件測定，測得RSD值為1.52%，結(jié)果表明，該方法重復性良好。

2.4.8加樣回收率實驗 精密稱取樣品0.5 g，3份，置于具塞錐形瓶中，分別精密加入梔子苷對照品0.25 mg，再加入50 mL甲醇，稱定質(zhì)量，超聲處理 30 min，待溶液冷卻后，再稱定錐形瓶及溶液的質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，振蕩至溶液均勻。精密吸取續(xù)濾液10 mL，置于25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取10 μL，測定，計算回收率。該方法測得梔子苷的加樣回收率為101.02%，RSD值為1.61%，結(jié)果表明，該方法回收率良好。

2.4.9溶出曲線的測定 根據(jù)相關文獻[16-17]，量取蒸餾水300 mL，超聲30 min，倒入溶出儀的量杯中，加熱保持37 ℃，設置溶出儀轉(zhuǎn)速為100 r·min-1。稱取朱日很滴丸3份，每份2 g，加入到溶出儀的量杯中，記錄時間。為了避免取樣時間耽擱，出現(xiàn)誤差，3份樣品投入時間每份間隔3 min。分別在2，5，10，15，20，25，30，40和50 min時取樣10 mL，隨后補充10 mL預熱蒸餾水。將取出的樣品蒸干，殘渣中加入10 mL甲醇，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液2 mL，精密吸取10 μL，在2.4.1項色譜條件下測定峰面積，計算平均累積溶出度，以平均累積溶出度為縱坐標、溶出時間為橫坐標，得到溶出曲線，見圖1。實驗結(jié)果表明，朱日很滴丸在30 min內(nèi)可達到最大累積溶出度。

圖1朱日很滴丸累積溶出度曲線

Fig.1 The cumulative dissolution curve of Zhurihen Dropping Pills

3 討論

本課題研究開發(fā)的朱日很滴丸是對蒙醫(yī)國醫(yī)大師醫(yī)藥知識的挖掘，是蒙藥現(xiàn)代化研究的重要探索。

本實驗采用二氧化碳超臨界萃取技術(shù)提取處方中5味藥材的有效成分，得到的萃取物是半固體油脂，呈淡黃色，加熱融化后成液體油脂，與PEG混合后出現(xiàn)油水分離現(xiàn)象。為了克服這種情況，加入4%的乳化劑卵磷脂，通過高速攪拌，使PEG與油脂形成乳化物，避免油水分離，增加藥液的穩(wěn)定性。

本實驗成功制備了200 mg的滴丸。目前，滴丸制劑的丸質(zhì)量一般在70 mg以下。小滴丸存在服用粒數(shù)多、載藥量小和中藥處方適用范圍小等問題[18-19]；而大滴丸可以針對性地解決小滴丸的諸多缺點，有廣闊的發(fā)展前景。