林月素 容穗華 周海玲 張鳳英

(1.廣東省中醫(yī)院 藥學(xué)部，廣東 廣州 510120；2.英德市人民醫(yī)院，廣東 英德 513000)

慢性濕疹是皮膚常見病之一，其發(fā)病因素復(fù)雜，是頑固之癥[1]。慢性濕疹的主要臨床表現(xiàn)為：劇烈瘙癢、皮膚苔蘚，且病程長反復(fù)發(fā)作，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[2，3]。有研究發(fā)現(xiàn)[4]，慢性濕疹的發(fā)病跟炎癥因子也有關(guān)。因此，尋找一種長足有效的方法治療慢性濕疹是亟待解決的問題。桑龍止癢丸由何首烏、白芍、丹皮、地龍、水牛角、全蝎、桑枝、白鮮皮、皂角刺、漏蘆、路路通共12味藥組成，具有通絡(luò)祛風(fēng)、養(yǎng)血活血，寧心安神增強(qiáng)止癢之功效[5]。因此本課題將研究桑龍止癢丸對慢性濕疹的療效，為臨床使用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

8周齡SPF級昆明小鼠，雄性，體重18-22g，由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK(粵)2016-0013。

1.2 儀器

BS-210S電子天平(北京Sartorious公司)；CU600電熱恒溫水箱(上海-恒科技有限公司)；MEGAFUGE2.0R低溫高速離心機(jī)(德國HERMLE公司)；Bio-RAD 550全波長酶標(biāo)儀(美國伯樂公司)；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市醫(yī)療儀器廠)。

1.3 試劑

桑龍止癢丸由制何首烏、白芍、丹皮、地龍、水牛角、全蝎、桑枝、白鮮皮、皂角刺、漏蘆、路路通共12味藥配制成，由廣東省中醫(yī)院制劑室提供。白細(xì)胞介素-2(IL-2)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、干擾素(IFN-)ELISA試劑盒均為美國R&D公司產(chǎn)品。

1.4 實驗分組

40只小鼠，隨機(jī)分為空白對照組、模型對照組、桑龍止癢丸中劑量組、桑龍止癢丸高劑量組，每組10只。飼養(yǎng)于(232)℃的動物房內(nèi)，室內(nèi)保持晝夜節(jié)律，自由攝食飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后進(jìn)行實驗。

1.5 動物造模以及給藥

實驗時進(jìn)行腹部剃毛，面積約為2.5cm×2.5cm，除空白對照組外，其余組的小鼠在剃毛處涂抹7% DNCB的乙醇溶液100μL涂于腹部致敏，5d后，小鼠左耳廓均勻涂布0.5% DNCB的乙醇溶液25μL，每隔3d激發(fā)1次，共激發(fā)4次。觀察小鼠，若出現(xiàn)皮膚干燥、粗糙、增厚及躁動不安的行為時即為造模成功。

末次刺激后1d后進(jìn)行給藥，桑龍止癢丸中、高劑量組小鼠分別為500mg/kg、1000mg/kg，共給藥20天，每天一次。末次給藥后將小鼠處死，對各項指標(biāo)進(jìn)行檢測。

1.6 指標(biāo)檢測

分別對小鼠治療前后的紅斑、水腫、抓痕按照“1.7評分標(biāo)準(zhǔn)”進(jìn)行評分。每次激發(fā)并給藥24h 后，觀察搔抓指數(shù)，即為10min內(nèi)小鼠搔抓耳部次數(shù)。在治療結(jié)束后取血，待血自然凝固后以3000g離心10min，取血清-80℃保存。按照ELISA試劑盒說明書，測定血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-含量，隨后頸椎脫臼法處死小鼠，對各組小鼠左右耳進(jìn)行稱重，并對皮炎耳腫脹程度進(jìn)行比較。

1.7 評分標(biāo)準(zhǔn)

小鼠皮損療效評定根據(jù)EASI評分法，以紅斑、水腫、抓痕治療前后的總積分變化來判斷療效，最后記總分。每部分分為0～3分4個等級，具體評分標(biāo)準(zhǔn)如下：紅斑：無癥狀0分，輕微1分，中度2分，重度3分；紅腫：無癥狀0分，輕微1分，中度2分，重度3分；抓痕：無0分，有1分。綜合評分為紅斑、水腫、抓痕的總和。

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 桑龍止癢丸對小鼠慢性濕疹皮損作用的影響

小鼠造模后，出現(xiàn)濕疹樣反應(yīng)，表現(xiàn)為不同程度的彌漫性紅斑、水腫以及抓痕樣結(jié)痂，邊界模糊，部分有滲液滲出。對治療組小鼠進(jìn)行給藥后，各給藥組耳部紅斑顏色變淡，水腫減輕，抓痕和血痂減少，評分較模型組下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)，見表1。

表1 桑龍止癢丸對小鼠慢性濕疹皮損作用的影響(n=10，±s)

注：與正常對照組比較，##P<0.01；與模型對照組比較，**P<0.01。

2.2 桑龍止癢丸對小鼠慢性濕疹腫脹度的影響

與正常對照組相比，小鼠涂抹DNCB并且反復(fù)刺激可造成小鼠右耳部明顯腫脹，厚度比左耳增加，給予桑龍止癢丸治療之后，發(fā)現(xiàn)腫脹度明顯得到改善，表明了桑龍止癢丸可以改善小鼠慢性濕疹耳部發(fā)生的腫脹，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)，見表2。

表2 桑龍止癢丸對小鼠慢性濕疹耳腫脹度的影響(n=10，±s)

注：與正常對照組比較，##P<0.01，#P<0.05；與模型對照組比較，**P<0.01。

2.3 桑龍止癢丸對小鼠慢性濕疹耳重量差的影響

與正常對照組相比，模型對照組小鼠右耳明顯腫脹，重量比左耳明顯增加，桑龍止癢丸中、高劑量組能改善右耳腫脹情況，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)，見表3。

表3 桑龍止癢丸對小鼠慢性濕疹耳重量差的影響(n=10，±s)

注：與正常對照組比較，##P<0.01；與模型對照組比較，*P<0.05。

2.4 桑龍止癢丸對小鼠慢性濕疹搔抓指數(shù)的影響

濕疹的重要特征是瘙癢癥狀，搔抓指數(shù)是指10min內(nèi)搔抓耳部的次數(shù)，以小鼠后爪對耳部及其鄰近部位的一次或連續(xù)多次搔抓，后爪落地或添吃代表本次搔抓結(jié)束，前肢的活動以及后爪對面部、腹部等處的搔抓則不做統(tǒng)計。與模型組比較，給予桑龍止癢丸治療之后，小鼠的搔抓指數(shù)明顯降低，表明桑龍止癢丸具有一定的改善濕疹瘙癢作用，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)，見表4。

表4 桑龍止癢丸對小鼠慢性濕疹搔抓指數(shù)的影響(n=10，±s)

注：與正常對照對照組比較，##P<0.01；與模型對照組比較，**P<0.01。

2.5 桑龍止癢丸對小鼠血清中IL-2、IFN-、IL-4、IL-6含量的影響

表5 桑龍止癢丸對小鼠慢性濕疹炎癥因子的影響(n=10，±s)

注：與正常對照對照組比較，##P<0.01；與模型對照組比較，**P<0.01，*P<0.05。

3 討論

慢性濕疹是一種發(fā)病機(jī)制復(fù)雜的慢性炎癥皮膚病[6]，多為正氣虧虛、脾失健運(yùn)、陰血不足，外有風(fēng)燥、濕濁、熱毒之邪及飲食不節(jié)所導(dǎo)致的[7]。故在治療上應(yīng)健脾化濕、養(yǎng)血祛風(fēng)止癢。關(guān)于濕疹的發(fā)病機(jī)制主要是正常皮膚屏障功能受到破壞，表現(xiàn)為苔蘚化、擦傷、色斑等，且會導(dǎo)致耳腫脹，導(dǎo)致相關(guān)的炎癥反應(yīng)。

桑龍止癢丸處方中，桑枝在《本草撮要》中記載“桑枝，得于槐枝、柳枝、桃枝洗遍身癢”，是桑枝在皮膚瘙癢中的應(yīng)用，其具有祛風(fēng)通絡(luò)功效與地龍的清熱通絡(luò)息風(fēng)相得益彰。白芍養(yǎng)血斂陰、瀉肝補(bǔ)脾，丹皮活血散瘀、清熱涼血，漏蘆清熱解毒通絡(luò)等等，諸藥配伍，具有通絡(luò)祛風(fēng)、養(yǎng)血活血、寧心止癢之效。

本研究中，使用DNCB造成小鼠慢性濕疹模型，發(fā)現(xiàn)桑龍止癢丸能夠明顯改善小鼠慢性濕疹皮膚損傷，而且降低耳部評分，耳腫脹、雙耳重量差以及搔抓指數(shù)，說明其抗瘙癢的作用明顯。在慢性濕疹的發(fā)病過程中其炎癥因子的含量也發(fā)生變化，桑龍止癢丸也能能降低小鼠升高的IL-2、IFN-水平，升高IL-4、IL-6水平，改善炎癥反應(yīng)，使其恢復(fù)平衡狀態(tài)。

綜上，應(yīng)用桑龍止癢丸可以改善小鼠慢性濕疹癥狀，為臨床用藥提供了科學(xué)依據(jù)。

[1]唐蘇為，謝韶瓊，宋勛，汪青良，沈芳.青鵬軟膏封包治療慢性濕疹療效觀察[J].世界臨床藥物，2016，37(01)：38-41+66.

[2]高暉，焦召華，李瑞超，徐家淳，李巖.火針聯(lián)合刺絡(luò)放血對慢性濕疹瘙癢程度影響的研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志，2015，14(05)：276-278.

[3]張麗麗，周愛民.卡泊三醇軟膏聯(lián)合氟芬那酸丁酯軟膏治療神經(jīng)性皮炎和慢性濕疹療效觀察[J].中國皮膚性病學(xué)雜志，2012，26(06)：565-566+568.

[4]王小勇，陶承軍，應(yīng)航宇，任金平，楊敏，曾武城.自制止癢濕疹合劑治療慢性濕疹療效及對血清IL-1、IL-2、IL-6水平的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志，2016，15(04)：221-224.

[5]羅文輝.桑龍止癢丸止癢作用及對瘙癢介質(zhì)影響的研究[D].湖南中醫(yī)學(xué)院，2004.

[6]嚴(yán)丹丹，黃芳，徐麗華.花參子露對小鼠慢性濕疹模型的療效研究[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2017，22(12)：1358-1363.

[7]蘇緒林，李勇華.慢性濕疹中醫(yī)用藥規(guī)律的文獻(xiàn)研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2012，18(18)：335-337.