薛 梅， 朱俊平， 葛愛民

(山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院，山東濰坊 261061)

頭孢喹肟是動(dòng)物專用的第4代頭孢菌素類抗生素，具有抗菌譜廣，抗菌活性強(qiáng)，吸收快、達(dá)峰時(shí)間短，殘留少，在肺、乳腺等組織內(nèi)達(dá)高的治療濃度等優(yōu)點(diǎn)[1-2]。國(guó)外臨床已經(jīng)廣泛用于動(dòng)物的呼吸道疾病以及奶牛乳房炎的治療[1]。近十幾年來，山東濰坊地區(qū)奶牛養(yǎng)殖業(yè)迅猛發(fā)展，奶牛乳房炎的發(fā)病率也不斷升高[3-4]，給奶牛業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。在對(duì)濰坊市奶牛乳房炎病原菌分離鑒定及抗菌藥耐藥性檢測(cè)的基礎(chǔ)上，借鑒國(guó)內(nèi)外治療奶牛乳房炎的成功經(jīng)驗(yàn)[5]，選取齊魯動(dòng)物保健品有限公司開發(fā)的新劑型硫酸頭孢喹肟乳房注入劑在濰坊地區(qū)進(jìn)行奶牛乳房炎的療效研究，對(duì)于濰坊市奶牛乳房炎的治療具有重要意義。本試驗(yàn)選取濰坊地區(qū)臨床型乳房炎病牛，應(yīng)用不同劑型頭孢喹諾進(jìn)行治療。通過臨床療效、牛奶體細(xì)胞定性檢測(cè)、乳區(qū)細(xì)菌感染率和細(xì)菌學(xué)治愈率判定其治療效果，并在用藥后檢測(cè)乳汁中頭孢喹肟含量，檢查食品安全性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 對(duì)濰坊地區(qū)發(fā)生臨床型乳房炎的病牛，選擇臨床癥狀基本相似、泌乳期的乳房炎奶牛40頭作為試驗(yàn)動(dòng)物。

1.1.2 培養(yǎng)基 普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂、營(yíng)養(yǎng)肉湯、改良艾德華瓊脂、S-S瓊脂、麥康凱瓊脂以及細(xì)菌生化微量鑒定管等，均購自浙江杭州濱和微生物試劑有限公司。綿羊血瓊脂由山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院防疫與檢疫實(shí)驗(yàn)室按郭霄峰提供的方法[6]制備。

1.1.3 試驗(yàn)藥物 硫酸頭孢喹肟乳房注入劑(泌乳期用)(75 mg/8.0 g)，由齊魯動(dòng)物保健品有限公司生產(chǎn)提供；硫酸頭孢喹肟注射劑(25 mg/支)，為中牧實(shí)業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，獸藥字(2010)220982320；頭孢喹肟標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99%，CAS登記號(hào)為118443-89-3)，上海圻明生物科技有限公司。

1.1.4 診斷試劑 LMT乳房炎診斷試劑，購自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)分組 對(duì)濰坊市臨床型乳房炎的病牛，無菌收取奶樣進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)，從病原鑒定為金黃色葡萄球菌、鏈球菌(無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、乳房鏈球菌)、大腸桿菌的病牛中[4]，參考抗菌藥物Ⅱ、Ⅲ期臨床藥效評(píng)價(jià)試驗(yàn)指導(dǎo)原則[7]，選擇乳房炎癥狀接近的40頭病牛作為試驗(yàn)動(dòng)物。將40頭病牛隨機(jī)分成2組，每組20頭。Ⅰ組為硫酸頭孢喹肟乳房注入劑局部用藥(75 mg/個(gè))治療試驗(yàn)組，Ⅱ組為硫酸頭孢喹肟注射劑肌內(nèi)注射用藥(1 mg/kg)治療對(duì)照組。2組在同樣飼養(yǎng)條件下飼養(yǎng)，日糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平完全一樣。

1.2.2 給藥方案 Ⅰ組病牛先擠凈患病乳區(qū)內(nèi)的乳汁或分泌物，用碘酊和乙醇擦試乳頭管及乳頭。托起乳房，經(jīng)乳頭管口向乳池內(nèi)插入連接有膠管的滅菌乳導(dǎo)管，膠管的另一端接注射器，將硫酸頭孢喹肟乳房注入劑(75 mg/個(gè))徐徐注入乳池內(nèi)，注入完畢抽出導(dǎo)管，用手指輕輕捻動(dòng)乳頭導(dǎo)管片刻，再以雙掌自乳頭池、乳腺池、腺泡腺管系順序輕輕向上按摩擠壓，使藥液漸次上升并盡可能擴(kuò)散到腺管腺泡[8]。間隔12 h用藥1次，連用3次。

Ⅱ組病牛肌內(nèi)注射硫酸頭孢喹肟注射劑[8]，劑量為 1 mg/kg，間隔24 h用藥1次，連用3次。試驗(yàn)期間，試驗(yàn)?zāi)膛２皇褂闷渌幬镏委煛?/p>

1.2.3 檢查指標(biāo)

1.2.3.1 臨床治療效果檢查 觀察試驗(yàn)牛給藥前和停藥后1、3、5、7、14 d的臨床表現(xiàn)，記錄發(fā)病乳區(qū)數(shù)，用藥后痊愈乳區(qū)數(shù)和好轉(zhuǎn)乳區(qū)數(shù)，計(jì)算治愈率、有效率。療效判斷標(biāo)準(zhǔn)為[9]：乳房紅腫消退，疼痛反應(yīng)消失，泌乳恢復(fù)正常，乳汁眼觀正常為痊愈；乳房紅、腫、熱、痛等癥狀基本消失或減輕，乳汁凝塊減少為有效；乳房癥狀無好轉(zhuǎn)或轉(zhuǎn)為慢性炎癥，甚至愈趨嚴(yán)重，乳汁依然異常甚至失去泌乳能力為無效。

1.2.3.2 細(xì)菌學(xué)檢查 2組奶牛分別于給藥前和停藥后1、3、5、7、14 d無菌取奶樣進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)和鑒定[4]，計(jì)算乳區(qū)細(xì)菌感染率和細(xì)菌學(xué)治愈率。作為藥物療效的判定情況之一。

1.2.3.3 牛奶體細(xì)胞定性檢測(cè) 2組奶牛分別于給藥前和停藥后1、3、5、7、14 d取奶樣采用LMT進(jìn)行牛奶體細(xì)胞定性檢測(cè)。判定標(biāo)準(zhǔn)為[10-11]：混合物均勻、流動(dòng)性好、無沉淀物，判定為陰性(-)，體細(xì)胞數(shù)為0～200 L；混合物呈液狀、有少許絮狀物或沉淀，判定為可疑(±)，體細(xì)胞數(shù)為 150～500 L；有明顯絮狀物或沉淀物、不成膠狀、有一定黏附性，判定為弱陽性(+)，體細(xì)胞數(shù)為400～1 500 L；沉淀物較多、較黏稠、有少量膠狀物，判定為陽性(++)，體細(xì)胞數(shù)為800～5 000 L；混合物的大部分或全部參與形成明顯膠狀物，判定為強(qiáng)陽性(+++)，體細(xì)胞數(shù)為5 000 L以上。

1.2.3.4 牛奶中頭孢喹肟殘留量檢測(cè) 最后一次給藥后5、7 d取奶樣，依照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 22989—2008《牛奶和奶粉中頭孢匹林、頭孢氨芐、頭孢洛寧、頭孢喹肟殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，嚴(yán)鳳等建立了動(dòng)物源性食品中頭孢喹肟的確證檢測(cè)方法[12]，賈濤檢測(cè)了牛奶中頭孢喹肟的殘留濃度[13]。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理與分析

使用SPSS 17.0軟件統(tǒng)計(jì)分析2組的顯著性差異。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 臨床治療效果

由表1可知，Ⅰ組在停藥后1、3、5、7、14 d，治愈率分別為22.58%、41.94%、64.52%、77.42%、83.87%。Ⅱ組在停藥后1、3、5、7、14 d，治愈率分別為17.24%、37.93%、55.17%、58.62%、58.62%。Ⅰ組(試驗(yàn)組)在停藥后1、3、5 d的治愈率與Ⅱ組(對(duì)照組)相比，均有顯著差異(P<0.05)；在停藥后7、14 d的治愈率Ⅰ組與Ⅱ組相比，均有顯著差異(P<0.05)。

2.2 細(xì)菌檢出結(jié)果

由表2可知，在停藥后1、3、5、7、14 d，Ⅰ組對(duì)金黃色葡萄球菌的細(xì)菌學(xué)治愈率分別為6.67%、46.67%、73.33%、86.67%、93.33%，Ⅱ組對(duì)金黃色葡萄球菌的細(xì)菌學(xué)治愈率分別為0、42.86%、64.29%、71.43%、78.57%。Ⅰ組(試驗(yàn)組)在停藥后的1、3、5、7、14 d的細(xì)菌學(xué)治愈率均高于Ⅱ組(對(duì)照組)；在停藥后1、3、5 d，Ⅰ組細(xì)菌學(xué)治愈率與Ⅱ組相比均有顯著差異(P<0.05)；在停藥后7、14 d，Ⅰ組細(xì)菌學(xué)治愈率與Ⅱ組相比均有顯著差異(P<0.05)。

表1 奶牛臨床型乳房炎的臨床治療效果

表2 給藥前后乳區(qū)金黃色葡萄球菌檢出結(jié)果

由表3可知，在停藥后1、3、5、7、14 d，Ⅰ組對(duì)鏈球菌(無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、乳房鏈球菌)的細(xì)菌學(xué)治愈率分別為5.26%、52.63%、73.68%、84.21%、89.47%，Ⅱ組對(duì)鏈球菌(無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、乳房鏈球菌)的細(xì)菌學(xué)治愈率分別為0、47.06%、64.29%、70.59%、70.59%。Ⅰ組(試驗(yàn)組)在停藥后的1、3、5、7、14 d的細(xì)菌學(xué)治愈率均高于Ⅱ組(對(duì)照組)；在停藥后1、3、5 d的細(xì)菌學(xué)治愈率，Ⅰ組與Ⅱ組相比，均差異顯著(P<0.05)；在停藥后7、14 d的細(xì)菌學(xué)治愈率，Ⅰ組與Ⅱ組相比，均差異顯著(P<0.05)。

由表4可知，在停藥后1、3、5、7、14 d，Ⅰ組對(duì)大腸桿菌的細(xì)菌學(xué)治愈率分別為25.0%、75.0%、100.0%、100.0%、100.0%，Ⅱ組對(duì)大腸桿菌的細(xì)菌學(xué)治愈率分別為12.5%、62.5%、87.5%、87.5%、87.5%。Ⅰ組(試驗(yàn)組)在停藥后的1、3、5、7、14 d的細(xì)菌學(xué)治愈率均高于Ⅱ組(對(duì)照組)；Ⅰ組與Ⅱ組相比均有極顯著差異(P<0.01)。

2.3 牛奶體細(xì)胞定性檢測(cè)結(jié)果

由表5可知，在停藥后1、3、5、7、14 d，Ⅱ組呈LMT-的乳區(qū)個(gè)數(shù)都增多，呈LMT+++的乳區(qū)消失， 呈LMT++乳區(qū)個(gè)數(shù)都減少，表明牛奶中的體細(xì)胞數(shù)均下降。

表3 給藥前后乳區(qū)鏈球菌(無乳鏈球菌、停乳

表4 給藥前后乳區(qū)大腸桿菌檢出結(jié)果

表5 給藥前后牛奶體細(xì)胞定性檢測(cè)(LMT)結(jié)果

Ⅰ組(試驗(yàn)組)在停藥后的1、3、5、7、14 d的LMT陰性率(LMT-的乳區(qū)數(shù)/治療乳區(qū)數(shù))均高于Ⅱ組(對(duì)照組)；Ⅰ組與Ⅱ組相比均差異顯著(P<0.05)。

2.4 牛奶中頭孢喹肟殘留量

由表6可知，Ⅰ組(試驗(yàn)組)、Ⅱ組(對(duì)照組)在停藥后 5 d 所取奶樣中頭孢喹肟殘留量分別為(0.416±0.182)、(0.418±0.186) μg/kg，無明顯差異，均遠(yuǎn)低于我國(guó)農(nóng)業(yè)部235號(hào)公告規(guī)定的頭孢喹肟在牛奶中的最大殘留限量 20 μg/kg。Ⅰ組與Ⅱ組在停藥后7 d所取奶樣中均未檢出頭孢喹肟。

表6 牛奶中頭孢喹肟殘留量

3 討論與結(jié)論

從治療效果(臨床療效、牛奶體細(xì)胞定性檢測(cè)、乳區(qū)細(xì)菌感染率和細(xì)菌學(xué)治愈率)看，硫酸頭孢喹肟乳房注入劑對(duì)奶牛乳房炎有很好的治療效果。

Ⅰ組(試驗(yàn)組)在停藥后的1、3、5 d的臨床治愈率、細(xì)菌學(xué)治愈率、LMT陰性率與Ⅱ組(對(duì)照組)相比，均有顯著差異(P<0.05)；在停藥后7、14 d，Ⅰ組(試驗(yàn)組)的臨床治愈率、細(xì)菌學(xué)治愈率、LMT陰性率與Ⅱ組(對(duì)照組)相比，均有顯著差異(P<0.05)。說明硫酸頭孢喹肟乳房注入劑局部用藥(75 mg/個(gè))的治療效果明顯好于硫酸頭孢喹肟注射劑肌內(nèi)注射用藥(1 mg/kg)的治療效果。

在停藥后5 d所取奶樣中頭孢喹肟殘留量遠(yuǎn)低于我國(guó)農(nóng)業(yè)部235號(hào)公告規(guī)定的頭孢喹肟在牛奶中的最大殘留限量，在停藥后7 d所取奶樣中未檢出頭孢喹肟。

硫酸頭孢喹肟乳房注入劑性能穩(wěn)定，刺激性低，通過乳導(dǎo)管注入乳區(qū)而發(fā)揮局部治療作用。藥物在乳腺中達(dá)峰時(shí)間短，濃度高，藥物作用發(fā)揮更快；藥物在血液中分布濃度少，內(nèi)臟殘留較注射用藥更少，藥物在牛奶中殘留低，符合用藥安全的規(guī)定[1-2，5，8]。

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