孫心 姜宇 梁宛楠/哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司

小鵝瘟（Goose parvovius，GP），是由鵝細(xì)小病毒（Goose parvovius，GPV）引起雛鵝急性腸炎及肝、腎、心實(shí)質(zhì)臟器炎癥，病原性強(qiáng)，死亡率高，該病主要感染1月齡以內(nèi)的雛鵝，雛番鴨也很易感染，可經(jīng)呼吸道和消化道感染，并能經(jīng)卵垂直傳播，發(fā)病率和死亡率可高達(dá)90%～100%，對(duì)養(yǎng)鵝業(yè)危害嚴(yán)重。為了有效的防控該病的發(fā)生，通過(guò)現(xiàn)地分離的病毒接種于鵝胚后，收獲培養(yǎng)物，經(jīng)滅活劑滅活后制成免疫原，接種健康產(chǎn)蛋母雞，收集雞卵，提取卵黃抗體，并加入適當(dāng)防腐劑制成小鵝瘟病毒卵黃抗體。卵黃抗體（immunoglobulin of yolk ；IgY）是禽類(lèi)經(jīng)特定抗原免疫后，在卵黃中所產(chǎn)生的相應(yīng)特異性抗體。IgY是一種天然存在、無(wú)殘留、無(wú)毒副作用的免疫球蛋白，是抗生素的替代品。目前卵黃抗體廣泛應(yīng)用于一些疾病的緊急預(yù)防和治療。本研究將試制的3批小鵝瘟病毒卵黃抗體，置室溫和2℃～8℃冰箱內(nèi)保存，間隔不同時(shí)間測(cè)定抗體的物理性狀檢查，并檢測(cè)卵黃抗體的效價(jià)及對(duì)雛鵝攻毒的保護(hù)效力，從而確定有效的保存時(shí)間，為提高本病的治療和緊急預(yù)防提供依據(jù)。

一、材料和方法

1.供試驗(yàn)的疫苗。3批小鵝瘟病毒卵黃抗體為本實(shí)驗(yàn)自行研制，批 號(hào) 為 201601、201602、201603，瓊擴(kuò)效價(jià)≥1∶16，卵黃抗體原液效價(jià)為1∶128。

2.試驗(yàn)方法。將研制的3批小鵝瘟病毒卵黃抗體，分別置于室溫和2℃～8℃保存，分別在6、12、18、24個(gè)月取出做物理性狀檢查，并檢測(cè)卵黃抗體的效價(jià)及對(duì)雛鵝攻毒的保護(hù)效力。

3.研究指標(biāo)。（1）物理性狀檢驗(yàn)：按現(xiàn)行《中國(guó)獸藥典》附錄進(jìn)行檢驗(yàn)，應(yīng)呈略帶白色澄明液體，久置后有少量白色沉淀；（2）無(wú)菌檢驗(yàn)：按現(xiàn)行《中國(guó)獸藥典》附錄進(jìn)行檢驗(yàn)，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)；（3）抗體效價(jià)測(cè)定按瓊擴(kuò)試驗(yàn)方法進(jìn)行，卵黃抗體的瓊擴(kuò)效價(jià)應(yīng)≥1∶16；（4）制定指標(biāo)按下述標(biāo)準(zhǔn)判定保存的抗體是否合格。

合格：卵黃抗體性狀，達(dá)到《質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》的要求；抗體無(wú)菌生長(zhǎng)；瓊擴(kuò)試驗(yàn)測(cè)定抗體效價(jià)不降低。雛鵝保護(hù)試驗(yàn)時(shí)應(yīng)達(dá)80%以上的保護(hù)率；不合格：達(dá)不到上述標(biāo)準(zhǔn)的抗體判為不合格。

二、結(jié)果評(píng)估

1.結(jié)果判定。分別記錄每次檢測(cè)的所有數(shù)據(jù)，就可以得出抗體經(jīng)保存后的物理性狀及抗體效價(jià)的變化情況。

2.試驗(yàn)的有效性。試驗(yàn)測(cè)定了3批抗體的保存期，保存后于不同時(shí)間測(cè)定抗體的瓊擴(kuò)效價(jià)，充分保證試驗(yàn)結(jié)果的可靠性，本試驗(yàn)可以認(rèn)為有效。

表1 室溫保存的效價(jià)測(cè)定結(jié)果

三、結(jié)果

1.物理性狀檢查結(jié)。于室溫和2℃～8℃保存的卵黃抗體，分別在保存后的6、12、18和24個(gè)月，對(duì)保存的卵黃抗體做了物理性狀檢查，其結(jié)果基本一致。外觀呈略帶白色澄明液體，瓶底部有少許白色沉淀。

2.無(wú)菌檢驗(yàn)結(jié)。按現(xiàn)行《中國(guó)獸藥典》附錄進(jìn)行檢驗(yàn)，無(wú)菌生長(zhǎng)。

3.支原體檢驗(yàn)結(jié)果。按現(xiàn)行《中國(guó)獸藥典》附錄進(jìn)行檢驗(yàn)，無(wú)支原體生長(zhǎng)。

4.外源病毒檢驗(yàn)結(jié)果。按現(xiàn)行《中國(guó)獸藥典》附錄進(jìn)行檢驗(yàn)，無(wú)外源病毒污染。。

5.卵黃抗體效價(jià)測(cè)定結(jié)果。取3批卵黃抗體置室溫（25℃）及2℃～8℃條件下作不同保存時(shí)間測(cè)定，測(cè)定時(shí)，各取3瓶保存的抗體混合后，作瓊擴(kuò)試驗(yàn)，記錄保存前后的效價(jià)變化情況，結(jié)果見(jiàn)表1、2。

從表1，2可以看出，卵黃抗體經(jīng)2℃～8℃保存，效價(jià)未降低，進(jìn)一步的保存時(shí)間正在測(cè)定之中。在室溫保存時(shí)，個(gè)別批次保存9個(gè)月后瓊擴(kuò)效價(jià)降低。

6.雛鵝的攻毒試驗(yàn)結(jié)果。制備的抗體經(jīng)一定時(shí)間保存后，除以瓊擴(kuò)試驗(yàn)測(cè)定抗體效價(jià)的變化情況以外，在保存后的不同時(shí)間，將抗體接種雛鵝，測(cè)定攻毒后的雛鵝保護(hù)率，結(jié)果見(jiàn)表3。

四、結(jié)論

將制備的小鵝瘟病毒卵黃抗體置室溫及2℃～8℃保存，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間保存后測(cè)定，保存抗體的物理性狀良好，符合現(xiàn)行《中國(guó)獸藥典》標(biāo)準(zhǔn)。另外，在室溫保存6個(gè)月或2℃～8℃保存24個(gè)月后，瓊擴(kuò)效價(jià)不降低。但個(gè)別批次的卵黃抗體，于室溫保存9個(gè)月后，效價(jià)降低。將保存的小鵝瘟病毒卵黃抗體注射雛鵝后再攻擊小鵝瘟強(qiáng)毒，結(jié)果室溫保存6個(gè)月及2℃～8℃保存6、12、18、24個(gè)月的抗體注射雛鵝后，全部獲得保護(hù)，對(duì)照8/10以上死亡，證明提取的卵黃抗體具有良好的穩(wěn)定性，可在2℃～8℃保存24個(gè)月。

表2 2℃～8℃保存的效價(jià)測(cè)定結(jié)果

表3 雛鵝攻毒結(jié)果

參考文獻(xiàn)（略）