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        讓大腸桿菌告訴你溶氧濃度

        2018-06-14 02:49:34黃楠
        科學(xué)24小時(shí) 2018年6期
        關(guān)鍵詞:生物學(xué)比賽實(shí)驗(yàn)

        黃楠

        生物學(xué)歷史悠久,而基因工程作為它的一個(gè)分支在近幾十年才有了蓬勃的發(fā)展?;蚬こ痰男路种А铣缮飳W(xué),作為一個(gè)名不見(jiàn)經(jīng)傳的“年輕小將”,卻毫不遜色于兩位“老前輩”。這一分支,有著自己的特色和長(zhǎng)處。其不同之處就在于“合成”二字,它把一個(gè)個(gè)有一定功能的DNA片段“拼接”成一個(gè)有具體功用的基因或序列,再送入所選擇的生物體中,以實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)藥品、燃料、布料、染料,檢測(cè)土壤重金屬離子、酒精濃度等諸多功用。

        前所未有,獨(dú)領(lǐng)風(fēng)騷

        說(shuō)起合成生物學(xué),就不得不提到一個(gè)國(guó)際比賽——iGEM,它的中文全稱是“國(guó)際遺傳工程機(jī)器大賽”。這是一個(gè)隨著合成生物學(xué)的產(chǎn)生而形成的比賽,也正是因?yàn)橛辛怂?,合成生物學(xué)才得以飛速發(fā)展。

        自2005年起,iGEM由麻省理工學(xué)院(MIT)的校內(nèi)比賽轉(zhuǎn)而成為國(guó)際競(jìng)賽。它不但推動(dòng)了合成生物學(xué)領(lǐng)域“3A標(biāo)準(zhǔn)”的建立(包括質(zhì)粒骨架及所含酶切位點(diǎn)、基因序列的標(biāo)準(zhǔn)格式等等),而且還吸引了大批生物科技公司的參與和上億美元的風(fēng)投。除此之外,這項(xiàng)比賽本身也很有特色。它不像其他比賽一樣非要決出一個(gè)高下優(yōu)劣,反而更像是一個(gè)學(xué)術(shù)交流會(huì),或者說(shuō)是展覽大會(huì)。每支參賽隊(duì)伍拿出自己的“安卓”、“蘋(píng)果”——各種生物體,向別人展示自己開(kāi)發(fā)的“APP”——合成的基因。這使得該比賽既具有競(jìng)爭(zhēng)性,又極大地保留了科學(xué)實(shí)驗(yàn)特有的樂(lè)趣,充分展示出參賽者對(duì)自然科學(xué)的熱情。

        麻雀雖小,五臟俱全

        細(xì)菌,單細(xì)胞生物,結(jié)構(gòu)十分簡(jiǎn)單,且體積小、繁殖快。作為原核生物,它和真核生物最大的區(qū)別就是它沒(méi)有成型的細(xì)胞核,自己的DNA外沒(méi)有核膜的保護(hù),這也就為我們把合成好的DNA送入細(xì)菌提供了便利。要將我們合成的DNA成為它DNA的一部分,就和在白紙上畫(huà)畫(huà)一樣輕松。

        也正是出于這些原因,合成生物學(xué)乃至基因工程在挑選生物體載體的時(shí)候,常常需要在萬(wàn)千細(xì)菌中挑選出最為合適的一種。而大腸桿菌作為基因工程中常用的工程菌,最大的優(yōu)勢(shì)在于它已經(jīng)被人們研究得相當(dāng)透徹。形形色色具有微妙差異的大腸桿菌,基本能滿足一般的實(shí)驗(yàn)需要。作為最廣為人知的細(xì)菌,大腸桿菌廣泛分布于人類或動(dòng)物的腸道中。你在看這篇文章的時(shí)候,你體內(nèi)就有上億個(gè)大腸桿菌在你的腸胃里勤懇地生產(chǎn)維生素K2,幫你抵御外來(lái)的致病微生物呢!

        合成生物學(xué)也常常要將大腸桿菌作為實(shí)驗(yàn)載體。在去年我們參加iGEM大賽的項(xiàng)目中,也把大腸桿菌作為實(shí)驗(yàn)的載體。我們所設(shè)計(jì)的便攜式水質(zhì)檢測(cè)設(shè)備,就是讓大腸桿菌去檢測(cè)水中溶解氧、氮、磷的濃度,并通過(guò)諸如顏色、熒光變化等方式來(lái)表現(xiàn)水中元素的類型及其含量,以達(dá)到評(píng)估水質(zhì)優(yōu)劣的目的。

        合抱之木,生于毫末

        萬(wàn)事總是開(kāi)頭難,一開(kāi)始我們就遇到了一個(gè)棘手的問(wèn)題:怎么讓大腸桿菌知道水里面含有多少溶解氧、氮、磷元素呢?要知道,雖說(shuō)“合成”這一步就如搭樂(lè)高積木一樣簡(jiǎn)單,但也要先有積木啊,否則就是巧婦難為無(wú)米之炊!萬(wàn)幸的是,iGEM官網(wǎng)給我們提供了一個(gè)包含成千上萬(wàn)段DNA序列的注冊(cè)庫(kù)。在那里,要找到我們所需要的“積木”就容易得多了。果然,不出一周,我們就在注冊(cè)庫(kù)里找到了3種啟動(dòng)子——Pvgb、PyeaR和PphoB,它們分別能感受溶解氧濃度、氮氧化物濃度和胞外磷酸濃度。

        有了這3個(gè)啟動(dòng)子,我們就有了實(shí)驗(yàn)最需要的“控制開(kāi)關(guān)”。那么,接下來(lái)只需要一些報(bào)告基因作為“燈泡”,就能讓大腸桿菌把氧濃度等情況反映出來(lái)了。我們最先想到的,自然是顏色鮮艷、帶有熒光且十分常用的熒光蛋白,這些部件也存在于注冊(cè)庫(kù)中。為了區(qū)分不同的水體質(zhì)量指標(biāo),我們選用了3種不同的熒光蛋白——綠色熒光蛋白(GFP)、藍(lán)色熒光蛋白(BFP)和紅色熒光蛋白(RFP)。

        至此,我們實(shí)驗(yàn)所需要的生物載體和基因片段都找到了,至于如何將這些DNA連接起來(lái),那就要合成生物學(xué)的絕活了。還記得前文提到過(guò)的樂(lè)高積木嗎?每一塊樂(lè)高都有頂端凸齒和底端凹齒,凸齒只能和凹齒結(jié)合,反之則無(wú)法連接。我們所找到的部件也是一樣,幾乎每一個(gè)部件都保存在一個(gè)質(zhì)粒骨架上面。在目的基因的前端和后端,各有一個(gè)特殊的酶切位點(diǎn)——XbaⅠ和SpeⅠ。這兩個(gè)酶切位點(diǎn)可謂天造地設(shè)的一對(duì),因?yàn)樗鼈兪峭裁?,識(shí)別序列只有微小差異,酶切產(chǎn)生的粘性末端可以互補(bǔ)。也正是因?yàn)檫@個(gè)微小差異,它們又像是天生的冤家,一旦它們切出來(lái)的粘性末端結(jié)合,新生成的序列就既不是XbaⅠ的識(shí)別位點(diǎn),也不是SpeⅠ的識(shí)別位點(diǎn)。這樣說(shuō)來(lái),只要我們?cè)敢?,每次都可以進(jìn)行粘性末端的組合操作,就像搭樂(lè)高積木一樣反復(fù)無(wú)窮。

        知之非艱,行之惟艱

        當(dāng)然,在這一過(guò)程中我們也遇到了不少困難,所用到的實(shí)驗(yàn)器材都是我們從未接觸過(guò)的,挑戰(zhàn)性極高。

        和微生物打交道,最頭疼的就是“看不到、摸不著”。每次做實(shí)驗(yàn)就像是雙手伸進(jìn)黑匣子里去摸鉆石一樣,在實(shí)驗(yàn)結(jié)果出來(lái)之前,你根本不知道自己摸到的是鉆石還是石頭。你知道自己在期待什么,但最終或許什么都沒(méi)有。這就是實(shí)驗(yàn)的美妙之處。得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果那一刻的喜悅,足以抵消之前繁復(fù)實(shí)驗(yàn)時(shí)的所有疲憊。

        此外,最令人頭疼的問(wèn)題就是準(zhǔn)備時(shí)間緊張。去年5月組隊(duì),11月參賽,實(shí)際上真正可供我們利用的大塊時(shí)間只有暑假。印象最深的,就是在暑假快結(jié)束的時(shí)候,我們還剩兩個(gè)關(guān)鍵的部件沒(méi)有連接成功。重復(fù)的實(shí)驗(yàn)已經(jīng)做了三四次了,即便從頭再做也依然沒(méi)有起色。這些實(shí)驗(yàn)的周期雖然不長(zhǎng),但是至少也要兩天一循環(huán)。可想而知,那段時(shí)間對(duì)于我們而言是多么煎熬!因此,這里也要多謝郭婷博士的引領(lǐng),徐程、朱旭芬、張銘教授的指導(dǎo),金文濤老師、友隊(duì)隊(duì)員們以及學(xué)長(zhǎng)、學(xué)姐們的幫助,他們以自己的經(jīng)驗(yàn)為我們鋪路,替我們省下了不少寶貴的時(shí)間。有了這些助力,我們才少走了一些彎路,更快地得到了結(jié)果。

        為了便于向公眾介紹我們的項(xiàng)目,讓更多的人了解合成生物學(xué),我們還做了一系列科普小視頻,介紹了從PCR技術(shù)、酶切到質(zhì)粒與生物積塊等等簡(jiǎn)單有趣的科學(xué)知識(shí)。付出才會(huì)有回報(bào)。除了在實(shí)驗(yàn)中學(xué)習(xí)到的技能與技巧,我們還在進(jìn)行社會(huì)實(shí)踐的同時(shí),收獲了一份從社會(huì)調(diào)查、開(kāi)題、實(shí)驗(yàn)、結(jié)題到交流的經(jīng)歷,非常的難能可貴!

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