黃婧溪 李忠良* 臧旭鵬 余小華 張 濤 左建軍** 馮定遠(yuǎn)**
(1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院,廣州 510642;2.贏創(chuàng)德固賽(中國)投資有限公司,北京 100600)
麥類飼糧中含有木聚糖等非淀粉多糖(non-starch polysaccharides,NSP),其抗?fàn)I養(yǎng)功能一直受到人們的關(guān)注。在動物飼糧中添加木聚糖酶等非淀粉多糖酶,可破壞植物細(xì)胞壁,提高飼糧中淀粉和蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)的利用率[1];降低消化道食糜黏度,減少疾病的發(fā)生[2];減緩非淀粉多糖對動物腸道黏膜的損傷,改善黏膜形態(tài)[3]。此外,麥類飼糧中含有大量的淀粉,其部分水解產(chǎn)物包括麥芽糖、麥芽三糖和極限糊精等不能直接被腸道吸收,必須由黏膜二糖酶水解成單糖后才能被吸收利用[4]。而飼糧中的碳水化合物含量直接影響小腸黏膜二糖酶水解反應(yīng),使二糖酶具有很強(qiáng)的適應(yīng)性。
目前有關(guān)單一木聚糖酶和含有木聚糖酶的復(fù)合酶對肉雞腸道黏膜形態(tài)影響的研究得到的結(jié)論[5-6]不盡相同,其原因是影響酶制劑作用效果的因素很多,從而表現(xiàn)不同的生產(chǎn)效應(yīng)。針對該問題,馮定遠(yuǎn)[7]提出了組合酶的概念,所謂組合酶是指利用酶催化的協(xié)同作用,在催化水解同一底物的不同來源和特性的酶中選擇具有互補(bǔ)性的2種或2種以上酶配合而成的酶制劑。
綜上,本試驗(yàn)擬研究不同來源木聚糖酶及其組合對肉雞腸道黏膜形態(tài)與二糖酶活性及其基因表達(dá)的影響,從而探討組合型木聚糖酶與肉雞腸道黏膜形態(tài)及碳水化合物消化的關(guān)系。
將1 560只1日齡且體重[(38±2) g]相近的健康新興黃羽肉公雞隨機(jī)分為4組,每組6個重復(fù),每個重復(fù)65只。Ⅰ組(對照組)飼喂低能量低蛋白質(zhì)的小麥-豆粕型基礎(chǔ)飼糧,試驗(yàn)組(Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組)分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加4 000 U/kg的黑曲霉來源單一木聚糖酶1#、康氏木霉來源單一木聚糖酶2#和組合型木聚糖酶(木聚糖酶1#∶木聚糖酶2#=1∶1)?;A(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗(yàn)期63 d。試驗(yàn)期間肉仔雞自由采食,充足飲水。
分別于21、42、63日齡,在每組的每個重復(fù)隨機(jī)選取2只肉雞,頸動脈放血屠宰,宰前不禁食。分別采取十二指腸中段、空腸中段組織樣品。用磷酸鹽緩沖液(PBS)緩慢的沖洗掉食糜,剪成1 cm左右的小段置于固定液中固定。然后沿縱向剖開腸道,用4 ℃預(yù)冷的PBS沖洗,吸水紙吸干。分別刮取十二指腸中段、空腸中段黏膜樣品置液氮速凍,-80 ℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>
1.3.1 腸道黏膜形態(tài)測定
制作腸道石蠟切片,經(jīng)蘇木精-伊紅染色后,參照Frankel等[8]的方法用顯微鏡和形態(tài)學(xué)圖像分析系統(tǒng)測量腸道黏膜絨毛高度(villous height,VH)及與之相連的隱窩深度(crypt depth,CD)、絨毛寬度(villous width,VW),并計(jì)算絨毛高度/隱窩深度(V/C)值。各指標(biāo)測定3次,取平均值作為測定數(shù)據(jù)。
表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))
續(xù)表1項(xiàng)目 Items1~21日齡1 to 21 days of age22~42日齡22 to 42 days of age43~63日齡43 to 63 days of age有效磷 AP0.450.410.38賴氨酸 Lys1.090.940.85蛋氨酸 Met0.580.470.40蛋氨酸+半胱氨酸 Met+Cys0.910.770.67蘇氨酸 Thr0.780.690.68色氨酸Trp0.210.180.16
1)1~21日齡、22~42日齡和43~63日齡的預(yù)混料分別使用溫氏食品集團(tuán)黃羽肉小雞、肉中雞和肉大雞預(yù)混料The premixes of 1 to 21, 22 to 42 and 43 to 63 days of age used the premixes of yellow-feather chickens, young broilers and adult broilers of Wens Food Group, respectively。每千克黃羽肉小雞預(yù)混料提供Provided the following per kg of premix of yellow-feathered chickens:蛋氨酸 Met 120 g,Cu 1 000 mg,F(xiàn)e 8 000 mg,Mn 8 000 mg,Zn 5 000 mg,I 35 mg,Se 25 mg,VA 1 500 000 IU,VD 300 000 IU,VE 4 000 mg,VK 300 mg,VB1300 mg,VB6700 mg,VB123 mg,膽堿 choline 61 000 mg,葉酸 folic acid 150 mg,煙酸 niacin 5 000 mg,泛酸 pantothenic acid 2 000 mg,生物素 biotin 15 mg,促生長劑 growth promoting agent 500 mg,防霉劑 anti-mildew agent 2 000 mg;每千克黃羽肉中雞預(yù)混料提供Provided the following per kg of premix of yellow-feather young broilers:蛋氨酸 Met 110 g,Cu 880 mg,F(xiàn)e 5 500 mg,Mn 6 600 mg,Zn 4 400 mg,I 38.5 mg,Se 16.5 mg,VA 1 320 000 IU,VD 330 000 IU,VE 3 300 mg,VK 220 mg,VB1220 mg,VB6550 mg,VB123.3 mg,膽堿 choline 56 000 mg,葉酸 folic acid 110 mg,煙酸 niacin 4 400 mg,泛酸 pantothenic acid 1 650 mg,生物素 biotin 13.2 mg,防霉劑 anti-mildew agent 2 000 mg;每千克黃羽肉大雞預(yù)混料提供Provided the following per kg of premix of yellow-feather adult broilers:蛋氨酸 Met 80 g,Cu 800 mg,F(xiàn)e 5 000 mg,Mn 6 000 mg,Zn 4 000 mg,I 35 mg,Se 25 mg,VA 1 000 000 IU,VD 200 000 IU,VE 3 000 mg,VK 200 mg,VB1200 mg,VB6500 mg,VB122 mg,膽堿 choline 41 000 mg,葉酸 folic acid 50 mg,煙酸 niacin 3 500 mg,泛酸 pantothenic acid 1 500 mg,生物素 biotin 10 mg,防霉劑 anti-mildew agent 2 000 mg。
2)營養(yǎng)水平均為計(jì)算值。All nutrient levels were measured values.
絨毛高度:從絨毛頂端至隱窩開口處的垂直距離。
絨毛寬度:絨毛最寬處的距離。
隱窩深度:從隱窩開口至隱窩基部的垂直距離。
1.3.2 腸道黏膜生化指標(biāo)測定
稱取0.5 g左右的腸道黏膜,加入4 mL 0.1 mol/L pH為6.8的順丁烯二酸緩沖液,冰浴勻漿,4 ℃放置過夜,然后在4 ℃下3 000 r/min離心10 min,取上清液用于測定腸道黏膜葡萄糖含量和二糖酶活性。
二糖酶活性(U/g)=Xn/30a。
式中:X為反應(yīng)所釋放的葡萄糖(μmol/L);a為二糖中葡萄糖釋放量,麥芽糖為2,蔗糖和乳糖為1;n為樣品稀釋倍數(shù);30為反應(yīng)時間(min)。
1.3.3 腸道黏膜二糖酶mRNA表達(dá)豐度測定
1.3.3.1 總RNA的提取及引物設(shè)計(jì)
參照Trizol RNA抽提試劑盒(北京天根生物科技有限公司)說明書抽提腸道黏膜總RNA并采用核酸蛋白測定儀(GERMAN BiopHotometer 6131,Eppendorf公司,德國)測定總RNA的濃度和純度,通過瓊脂糖凝膠電泳檢測總RNA的完整性。經(jīng)過DNase-Ⅰ處理之后,按M-MLV試劑(Promega公司,美國)說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。反應(yīng)結(jié)束后所獲得的反應(yīng)液即為合成的cDNA模板,-30 ℃保存?zhèn)溆?。采用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)雞蔗糖酶-異麥芽糖酶(sucrase-isomaltase,SI)、麥芽糖酶-葡萄糖淀粉酶(maltase-glucoamylase,MGA)基因和內(nèi)標(biāo)基因β-肌動蛋白(β-actin)的上、下游引物。引物由上海生工生物工程有限公司合成,引物參數(shù)如表2所示。
1.3.3.2 二糖酶基因mRNA表達(dá)豐度的測定
采用實(shí)時熒光定量PCR方法測定二糖酶基因mRNA表達(dá)豐度。反應(yīng)條件為:95 ℃ 1 min,(95 ℃ 15 s,58 ℃ 15 s,72 ℃ 15 s)×40個循環(huán),(95 ℃ 1 min,58 ℃ 30 s,95 ℃ 30 s)×1個循環(huán)。反應(yīng)體系見表3。目的基因mRNA表達(dá)豐度用2-ΔCt法進(jìn)行計(jì)算。
ΔCt=(目的基因Ct-內(nèi)標(biāo)基因Ct);
mRNA表達(dá)豐度=2-ΔCt。
表2 引物參數(shù)
表3 實(shí)時熒光定量PCR反應(yīng)體系
數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,對肉雞不同日齡不同腸段黏膜形態(tài)指標(biāo)、黏膜生化指標(biāo)以及二糖酶基因mRNA表達(dá)豐度分別進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA),并采用LSD法進(jìn)行多重比較。P<0.01視為差異極顯著,P<0.05視為差異顯著,結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。
由表4可知,21日齡時,十二指腸絨毛寬度表現(xiàn)為Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ組極顯著大于Ⅱ組(P<0.01),Ⅳ組顯著大于Ⅰ組(P<0.05);十二指腸隱窩深度表現(xiàn)為Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組極顯著低于Ⅰ組(P<0.01);十二指腸V/C值表現(xiàn)為Ⅲ組極顯著大于Ⅰ組(P<0.01),Ⅱ和Ⅳ組顯著大于Ⅰ組(P<0.05)。21日齡時,空腸絨毛高度表現(xiàn)為Ⅳ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05);空腸隱窩深度表現(xiàn)為Ⅳ組顯著低于Ⅰ組(P<0.05);空腸V/C值表現(xiàn)為Ⅱ和Ⅳ組極顯著大于Ⅰ組(P<0.01),Ⅳ組顯著大于Ⅲ組(P<0.05)。
42日齡時,十二指腸隱窩深度表現(xiàn)為Ⅱ和Ⅳ組極顯著低于Ⅰ組(P<0.01),顯著低于Ⅲ組(P<0.05);十二指腸V/C值表現(xiàn)為Ⅳ組極顯著大于Ⅰ組(P<0.01),顯著大于Ⅱ和Ⅲ組(P<0.05)。42日齡時,空腸絨毛高度表現(xiàn)為Ⅳ組極顯著高于Ⅰ組(P<0.01),Ⅳ組顯著高于Ⅱ組(P<0.05),Ⅲ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05);空腸隱窩深度表現(xiàn)為Ⅳ組顯著低于Ⅰ和Ⅲ組(P<0.05);空腸V/C值表現(xiàn)為Ⅳ組極顯著大于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組(P<0.01),Ⅲ組顯著大于Ⅰ組(P<0.05),Ⅲ組極顯著大于Ⅱ組(P<0.01)。
63日齡時,肉雞十二指腸和空腸絨毛高度、絨毛寬度和V/C值各組間差異均不顯著(P>0.05)。十二指腸隱窩深度各組間差異不顯著(P>0.05),而空腸隱窩深度則表現(xiàn)為Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組極顯著低于Ⅰ組(P<0.01)。
2.2.1 不同來源木聚糖酶及其組合對肉雞腸道黏膜葡萄糖含量的影響
由表5可知,21日齡時,肉雞十二指腸中葡萄糖含量各組間差異不顯著(P>0.05);空腸中葡萄糖含量Ⅲ和Ⅳ組均極顯著高于Ⅰ和Ⅱ組(P<0.01),其中Ⅲ組最高,Ⅰ組最低。42日齡時,十二指腸中葡萄糖含量各組間差異不顯著(P>0.05);空腸中葡萄糖含量Ⅳ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。63日齡時,十二指腸中葡萄糖含量各組間差異不顯著(P>0.05);空腸中葡萄糖含量Ⅱ組極顯著高于Ⅰ組(P<0.01),Ⅲ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。
表4 不同來源木聚糖酶及其組合對肉雞腸道黏膜形態(tài)的影響
同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)無字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05),相鄰字母表示差異顯著(P<0.05),相間字母表示差異極顯著(P<0.01)。下表同。
In the same row, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with adjacent letter superscripts mean significant difference (P<0.05), and with alternate letter superscripts mean significant difference (P<0.01). The same as below.
2.2.2 不同來源木聚糖酶及其組合對肉雞腸道黏膜麥芽糖酶活性的影響
由表6可知,21日齡時,麥芽糖酶活性在十二指腸中表現(xiàn)為Ⅳ組極顯著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組(P<0.01),Ⅲ組極顯著高于Ⅰ組(P<0.01),Ⅱ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05);在空腸中表現(xiàn)為Ⅳ組極顯著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組(P<0.01),Ⅱ組極顯著高于Ⅰ組(P<0.01)。42日齡時,麥芽糖酶活性在十二指腸中表現(xiàn)為Ⅱ和Ⅳ組極顯著高于Ⅰ組(P<0.01),Ⅳ組顯著高于Ⅲ組(P<0.05);在空腸中表現(xiàn)為各組間差異不顯著(P>0.05)。63日齡時,麥芽糖酶活性在十二指腸中表現(xiàn)為Ⅲ和Ⅳ組極顯著高于Ⅱ組(P<0.01),Ⅳ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05);在空腸中表現(xiàn)為各組間差異不顯著(P>0.05)。
表5 21、42、63日齡十二指腸和空腸黏膜葡萄糖含量
表6 21、42、63日齡十二指腸和空腸黏膜麥芽糖酶活性
2.2.3 不同來源木聚糖酶及其組合對肉雞腸道黏膜蔗糖酶活性的影響
由表7可知,21日齡時,蔗糖酶活性在十二指腸中表現(xiàn)為Ⅳ組極顯著高于Ⅰ組(P<0.01),Ⅳ組顯著高于Ⅲ組(P<0.05);在空腸中表現(xiàn)為Ⅳ組極顯著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組(P<0.01),Ⅲ組極顯著高于Ⅰ組(P<0.01),Ⅱ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。42
日齡時,蔗糖酶活性在十二指腸中表現(xiàn)為Ⅳ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05);在空腸中表現(xiàn)為Ⅳ組極顯著高于Ⅰ和Ⅱ組(P<0.01),Ⅳ組顯著高于Ⅲ組(P<0.05),Ⅲ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。63日齡時,蔗糖酶活性在十二指腸和空腸均表現(xiàn)為各組間差異不顯著(P>0.05)。
表7 21、42、63日齡十二指腸和空腸黏膜蔗糖酶活性
2.3.1 不同來源木聚糖酶及其組合對肉雞腸道黏膜MGAmRNA表達(dá)豐度的影響
由表8可知,21日齡時,MGAmRNA表達(dá)豐度在十二指腸中表現(xiàn)為Ⅳ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05);在空腸中表現(xiàn)為Ⅱ組極顯著高于Ⅰ組(P<0.01),Ⅲ和Ⅳ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。42日齡時,MGAmRNA表達(dá)豐度在十二指腸中表現(xiàn)為Ⅲ和Ⅳ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05);在空腸中表現(xiàn)為Ⅳ組極顯著高于Ⅰ和Ⅱ組(P<0.01)。63日齡時,MGAmRNA表達(dá)豐度在十二指腸和空腸中均表現(xiàn)為各組間差異不顯著(P>0.05)。
表8 不同來源木聚糖酶及其組合對肉雞腸道黏膜MGA mRNA表達(dá)豐度的影響
2.3.2 不同來源木聚糖酶及其組合對肉雞腸道黏膜SImRNA表達(dá)豐度的影響
由表9可知,21日齡時,SImRNA表達(dá)豐度在十二指腸中表現(xiàn)為Ⅳ組極顯著高于Ⅰ組(P<0.01),Ⅱ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05);在空腸中表現(xiàn)為各組間差異不顯著(P>0.05)。42日齡時,SImRNA表達(dá)豐度在十二指腸中表現(xiàn)為Ⅱ和Ⅳ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05);在空腸中表現(xiàn)為Ⅲ和Ⅳ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。63日齡時,SImRNA表達(dá)豐度在十二指腸中表現(xiàn)為Ⅳ組顯著高于Ⅱ組(P<0.05);在空腸中表現(xiàn)為各組間差異不顯著(P>0.05)。
表9 不同來源木聚糖酶及其組合對肉雞腸道黏膜SI mRNA表達(dá)豐度的影響
小腸絨毛形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化關(guān)系到小腸功能的發(fā)揮,也決定了其對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力。腸道絨毛上皮細(xì)胞主要發(fā)揮吸收功能,隱窩上皮細(xì)胞主要發(fā)揮分泌功能,腸道凈吸收取決于腸道黏膜V/C值的高低。腸道黏膜V/C值上升,則黏膜功能改善,消化吸收功能增強(qiáng),生長發(fā)育加快[9]。
小麥飼糧中的非淀粉多糖能夠影響動物腸道黏膜形態(tài)[10]。研究表明,木聚糖酶的添加能夠不同程度的影響動物腸道黏膜絨毛高度、隱窩深度以及V/C值[11-13]。而Yang等[14]報道,小麥飼糧添加木聚糖酶并沒有顯著提高肉仔雞空腸絨毛高度,但是降低了空腸隱窩深度。本試驗(yàn)中,在小麥-豆粕型飼糧中添加木聚糖酶能夠不同程度地增加小雞和中雞十二指腸和空腸絨毛高度和V/C值,且不同程度地降低小雞(21日齡)和中雞(42日齡)十二指腸和空腸黏膜隱窩深度,與前人報道基本一致。
在本試驗(yàn)中,木聚糖酶對小雞(21日齡)、中雞(42日齡)和大雞(63日齡)的不同腸段絨毛高度、絨毛寬度和隱窩深度的影響效果不同,其原因可能與動物所處的生理階段不同以及酶制劑本身的因素有關(guān)。
上皮細(xì)胞不斷從絨毛頂端衰亡脫落的過程,實(shí)質(zhì)上是二糖酶及其他低聚糖酶的分泌釋放過程。淀粉進(jìn)入小腸后,首先經(jīng)過胰淀粉酶作用產(chǎn)生α-糊精、麥芽丙糖和麥芽糖等二糖,隨后在刷狀緣表面二糖酶等作用下產(chǎn)生直接被腸絨毛吸收的單糖。因此,腸道黏膜葡萄糖含量能夠在一定程度上反映碳水化合物在黏膜上的消化能力,也能間接反映出二糖酶的性。木聚糖酶可能通過影響食糜黏性達(dá)到減小相對不動水層厚度,從而影響腸道黏膜二糖酶活性和葡萄糖含量。
麥類飼糧中含有可溶性非淀粉多糖,能夠影響動物腸道黏膜二糖酶活性[15]。非哺乳動物腸道黏膜中的二糖酶主要以麥芽糖酶和蔗糖酶為主。許梓榮等[16]報道,飼喂添加非淀粉多糖酶飼糧的仔豬空腸黏膜麥芽糖酶和蔗糖酶活性較飼喂不添加非淀粉多糖酶飼糧的仔豬分別提高了38.46%和40.00%。本試驗(yàn)中,木聚糖酶在小雞和中雞階段很大程度上提高了腸道黏膜中蔗糖酶和麥芽糖酶的活性,與上述報道結(jié)果一致。木聚糖酶對腸道黏膜二糖酶活性產(chǎn)生影響的機(jī)制可能是:1)降解小麥飼糧中阿拉伯木聚糖,為二糖酶提供更多的作用底物;2)降低水溶性非淀粉多糖黏性,從而降低小腸食糜的黏度,使得麥芽糖、蔗糖等二糖更容易到達(dá)水解位點(diǎn),促進(jìn)二糖的水解。
動物腸道黏膜中二糖酶基因mRNA表達(dá)豐度隨著動物發(fā)育而變化。翁梅倩等[17]報道,新生兔乳糖根皮苷水解酶(lactase-phlorizin hydrolase,LPH)和SImRNA在各腸段都有表達(dá),完全斷乳15 d后其表達(dá)明顯增強(qiáng)。但Yadgary等[18]有不同的報道,胚胎中11~21日齡的小雞SImRNA表達(dá)豐度未隨著日齡的增長而顯著增加。本試驗(yàn)測定了肉雞3個生長階段腸道黏膜中MGA和SImRNA的表達(dá)豐度,但未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)一的規(guī)律。動物飼糧組成、激素等均能影響腸道黏膜二糖酶基因的表達(dá)。Mochizuki等[19]報道,小鼠飼喂高淀粉低脂肪飼糧后空腸麥芽糖酶和葡萄糖淀粉酶的活性升高。本試驗(yàn)在小麥-豆粕型飼糧中添加木聚糖酶,在小雞和中雞階段不同程度地增強(qiáng)了腸道黏膜中MGA和SImRNA的表達(dá)豐度。
組合酶是指利用酶催化的協(xié)同作用,在催化水解同一底物的不同來源和特性的酶中選擇具有互補(bǔ)性的2種或2種以上酶配合而成的酶制劑[7]。本試驗(yàn)挑選7種不同來源的單一木聚糖酶,分別測定其酶學(xué)特性,再根據(jù)性質(zhì)的不同,挑選出具有互補(bǔ)性的單一木聚糖酶1#和單一木聚糖酶2#,進(jìn)行不同比例的組合。然后在模擬肉雞胃腸道環(huán)境的情況下,根據(jù)木聚糖酶的酶活特性進(jìn)行篩選,選出具有互補(bǔ)效果最佳的模型。隨著非常規(guī)飼料原料的大量使用,高效的組合酶將更有優(yōu)勢[20]。因此,今后飼料酶制劑的發(fā)展方向,應(yīng)該是研發(fā)和使用更多的組合酶或組合型復(fù)合酶產(chǎn)品。
肉雞在前(1~21日齡)、中期(22~42日齡)階段時,木聚糖酶的添加能夠改善腸道黏膜形態(tài),促進(jìn)二糖酶的分泌及其基因的表達(dá);在活性相同的情況下,2個單一木聚糖酶的作用效果相近,而組合酶的作用效果則優(yōu)于單酶,表現(xiàn)出高效催化的組合效應(yīng)。
致謝:
衷心感謝廣東溫氏食品集團(tuán)試驗(yàn)雞場在動物飼養(yǎng)試驗(yàn)方面提供的便利和幫助。
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