姚海霞，齊斌，黃友如，王立梅

（1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，吉林長春 130118）（2.常熟理工學(xué)院生物與食品工程學(xué)院，江蘇常熟 215500）

竹豆（bamboo bean）又名爬豆、飯豆和蔓豆等，屬豆科類草本植物，豇豆屬，生長在低海拔高溫高濕的熱帶和亞熱帶地區(qū)，我國主要分布在云南、山西、貴州和陜西等地區(qū)。與綠豆、小豆相比，竹豆具有抗蟲害、耐酸鋁、產(chǎn)量高、適應(yīng)力強(qiáng)等優(yōu)勢[1]，適合在干旱、高溫、土壤貧瘠地區(qū)種植。竹豆富含淀粉、蛋白質(zhì)、鈣、磷、鐵及粗纖維、維A原、維生素B1、維生素B2和維C等[2]。竹豆的營養(yǎng)質(zhì)量比許多其他豇豆屬類高，主要是由于蛋白質(zhì)和必需氨基酸含量高，且抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)如植酸磷，多酚水平、皂苷和胰蛋白酶抑制劑在竹豆中也相對(duì)低于其他豆類食物[3]。竹豆不僅營養(yǎng)豐富，而且還具有“利水、除濕和排血膿，消腫解毒”的功效，對(duì)治療水腫、腳氣、黃疸、便血和癰腫等病有明顯作用[4]。竹豆還具有抗氧化力和抗糖尿病潛力，它對(duì)α-葡萄糖苷酶具有抑制活性，可以抑制晚期糖基化終產(chǎn)物的形成，在食品保健與醫(yī)藥領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景[5]。

然而，竹豆作為一種夏季高產(chǎn)綠肥，其副產(chǎn)物竹豆籽粒一直被用作飼料，造成植物蛋白資源的巨大浪費(fèi)。目前，國內(nèi)外對(duì)竹豆的農(nóng)藝性狀[6]、栽培措施[7]和種質(zhì)資源多樣性[8]等均有報(bào)道，但關(guān)于竹豆蛋白的研究報(bào)道幾乎沒有。同時(shí)，植物清蛋白的研究大多集中在蕓豆[9]、綠豆[10]、米糠[11]和菜籽粕[12]等農(nóng)作物，圍繞提取工藝、功能性質(zhì)研究展開，關(guān)于清蛋白的性質(zhì)及二級(jí)結(jié)構(gòu)研究甚少，因此充分了解竹豆清蛋白的性質(zhì)及結(jié)構(gòu)，對(duì)其在食品中的開發(fā)應(yīng)用具有重要意義。

本文通過闡明竹豆清蛋白的氨基酸組成、亞基分子量分布情況，研究不同pH下的熱學(xué)性質(zhì)，采用傅里葉紅外對(duì)其二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征，為竹豆清蛋白的功能特性研究及其應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

竹豆：購于云南昆明蘭姐特產(chǎn)店；聚丙烯酰胺凝膠快速配制試劑盒：碧云天生物技術(shù)研究所；其他試劑均為分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

磁力加熱攪拌器：蘇州賽恩斯 IKA儀器有限公司；高速冷凍離心機(jī)：CR22GⅡ，日本HITACHI公司；紫外可見分光光度計(jì)：UVmini-1240，日本SHIMADZU公司；冷凍干燥機(jī)：Alpha 1-2 LD plus，德國CHRIST公司；pH計(jì)：Seven Easy S20K，瑞士METTLER TOLEDO 公司；分析天平：XS105DualRange，瑞士METTLER TOLEDO公司；電泳儀：Mini-PROTEAN Tetra，美國Bio-Rad伯樂公司；綜合熱分析儀：TAQ2000，美國TA公司；傅里葉紅外光譜儀：NICOLET IS10，美國熱電Thermo公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 竹豆清蛋白的制備

根據(jù)Osborne分級(jí)提取工藝[13]，取100 g脫脂竹豆于2 L燒杯中，按料液比1:10加入600 mL去離子水，置于恒溫磁力加熱攪拌器中，45 ℃攪拌浸提1 h，離心（10000 r/min、4 ℃、20 min）取上清液，沉淀再按料液比1:10重復(fù)浸提1次，合并兩次上清液。用1 mol/L HCl將其pH調(diào)至等電點(diǎn)4.0處，靜置30 min離心（10000 r/min、4 ℃、20 min），所得沉淀用適量去離子水溶解，用1 mol/L NaOH回調(diào)pH至7.0，4 ℃下透析48 h，冷凍干燥后得竹豆清蛋白。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，結(jié)果取平均值，采用凱氏定氮法測得竹豆清蛋白的純度為88.75%（干基）。

1.2.2 竹豆清蛋白的氨基酸組成

采用酸水解法測17種氨基酸，步驟如下：準(zhǔn)確稱取100 mg的樣品（精確到0.0001 g），置于水解管中，加8 mL的6.0 mol/L鹽酸。充氮?dú)? min后旋緊膠塞。將水解管封口于120 ℃烘箱中水解22 h，再加4.8 mL 10M NaOH中和，用蒸餾水定容至50 mL。過濾后離心（10000 r/min、4 ℃、15 min），取上清測樣。采用堿水解法測色氨酸，稱取相同重量樣品，加 8 mL 5 mol/L NaOH水解，再加6.7 mL 6 mol/L HCL中和，其他步驟同上。

色譜條件：Agilent Hypersil ODS柱（5 μm，4.0 mm×250 mm）；流動(dòng)相A：27.6 mmol/L醋酸鈉-三乙胺-四氫呋喃體積比為（500:0.11:2.5），流動(dòng)相B：80.9 mmol/L醋酸鈉-甲醇-乙腈體積比為（1:2:2）；流速為1 mL/min；柱溫：40 ℃；紫外檢測器（VWD）檢測波長為338 nm，以外標(biāo)法進(jìn)行定量。

1.2.3 竹豆清蛋白的SDS-PAGE電泳

準(zhǔn)確稱取清蛋白10 mg，溶于2 mL水中，35 ℃下超聲提取15 min，離心（4000 r/min，15 min）取上清。取80 μL上清液，加入20 μL上樣緩沖液（Sample Loading Buffer×5），再加入2 μL的巰基乙醇，沸水浴下進(jìn)行5～10 min，使其充分變性。冷卻至室溫后再離心（12000 r/min，5 min），取10 μL上清液上樣。采用晶彩生物的蛋白電泳凝膠制備試劑盒進(jìn)行制膠，進(jìn)行不連續(xù)垂直電泳，濃縮膠采用60 V、30 min，分離膠采用100 V、1.5 h。待溴酚藍(lán)條帶移動(dòng)到距離分離膠下邊緣1 cm左右時(shí)關(guān)閉電源，結(jié)束電泳，凝膠進(jìn)行考馬斯亮藍(lán)G-250染色，脫色后拍照保存。

1.2.4 竹豆清蛋白的熱變性

取10 mg左右的竹豆清蛋白，溶于100 μL 0.01 mol/L的不同pH的磷酸緩沖液中，充分混勻。準(zhǔn)確稱取10 mg左右的樣品于鋁盤中，密封鋁盤，以空鋁盤作參比，采用氮?dú)?，?0 ℃加熱至120 ℃，升溫速率為5 ℃/min，試驗(yàn)重復(fù)三次。記錄曲線峰值點(diǎn)溫度，即蛋白變性溫度Td，采用儀器自帶分析軟件計(jì)算吸熱曲線形成峰的面積，即焓變值ΔH。

1.2.5 竹豆清蛋白的FT-IR測定

采用溴化鉀壓片法：在暖燈下，取1 mg竹豆清白與100 mg KBr混勻研磨，充分干燥除去水分，均勻壓制成片，采用omnic軟件進(jìn)行樣品采集。光譜掃描范圍為400～4000 cm-1，分辨率為4 cm-1。

圖譜處理：取1700～1600 cm-1的酰胺Ⅰ帶圖譜，用PeakFit v4.12軟件進(jìn)行分析。對(duì)曲線依次進(jìn)行平滑、基線校正、Gaussian去卷積、二階導(dǎo)數(shù)擬合數(shù)據(jù)處理。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)結(jié)果采用Origin 8.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)圖像處理，SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 竹豆清蛋白的氨基酸組成

表1 竹豆清蛋白的氨基酸組成分析Table 1 Amino acid composition of bamboo bean albumin

由表1可知，竹豆清蛋白氨基酸含量豐富，種類齊全，含有18種人體所需氨基酸及8種人體必需氨基酸，富含谷氨酸、天門冬氨酸、亮氨酸和賴氨酸，是一種具有開發(fā)食用前景的植物蛋白資源。其中，谷氨酸含量最高，占18.35%；天門冬氨酸次之，占11.73%；半胱氨酸的含量最少，僅有0.11%。非極性氨基酸（即纈氨酸、脯氨酸、丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸和蛋氨酸和色氨酸）占38.98%；不帶電荷的極性氨基酸（即甘氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、酪氨酸，天冬酰胺和谷氨酰胺除外）含量占13.90%；帶正電荷的極性氨基酸（即賴氨酸、精氨酸和組氨酸）含量占16.93%；帶負(fù)電荷的極性氨基酸（即天冬氨酸與谷氨酸）含量占30.08%；必需氨基酸（即蘇氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸和色氨酸）含量占39.96%；

而所必需的半必需氨基酸（即精氨酸、組氨酸）含量占9.48%。根據(jù)表1數(shù)據(jù)，能夠計(jì)算出必需氨基酸/氨基酸總量（E/T）為39.96%，必需氨基酸/非必需氨基酸（E/N）的值為66.55%。這與FAO/WHO[14]提出的必需氨基酸占總氨基酸的比值為40%、必需氨基酸與非必需氨基酸的比值為60%以上的參考蛋白模式相符，說明竹豆清蛋白屬于一種優(yōu)質(zhì)的植物蛋白。

2.2 竹豆清蛋白的SDS-PAGE分析

圖1 竹豆清蛋白的SDS-PAGE還原電泳Fig.1 SDS-PAGE profile of bamboo bean albumin

竹豆清蛋白的SDS-PAGE電泳圖如圖1所示，通過Image Lab軟件，將蛋白質(zhì)Marker的分子量對(duì)數(shù)與條帶相對(duì)遷移率作標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=-2.4*x+2.88，R2=0.9833（y為條帶相對(duì)遷移率，x為分子量對(duì)數(shù)）。將竹豆清蛋白條帶相對(duì)遷移率帶入上式，計(jì)算其主要亞基分子量。

如表2所示，竹豆清蛋白含有9個(gè)亞基條帶，分別為113.3 ku、103.5 ku、94.6 ku、49.6 ku、35.3 ku、32.3 ku、27.6 ku、24.0 ku、19.7 ku。其中最主要亞基分布在 49.6 ku和 27.6 ku，分別占總量的 61.1%和20.6%，這與李永武提取的綠豆清蛋白[10]亞基分子量分布相似。

表2 SDS-PAGE竹豆清蛋白分子量分布表Table 2 Molecular weight distribution table of bamboo bean albumin obtained by SDS-PAGE

2.3 竹豆清蛋白的熱穩(wěn)定性分析

蛋白天然結(jié)構(gòu)的改變及變性過程常伴隨著焓變，常采用差示熱量掃描（DSC）來進(jìn)行監(jiān)控。在DSC譜圖中，最大峰對(duì)應(yīng)的溫度即變性溫度（Td），代表蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性[15]。由圖1和表3可知，竹豆清蛋白的變性溫度（Td）從高到低依次對(duì)應(yīng) pH：7＞5＞9，在pH=7.0時(shí)最高，達(dá)到100.6 ℃，熱穩(wěn)定性最強(qiáng)。這是因?yàn)楫?dāng)pH在5～7時(shí)，接近蛋白原生環(huán)境，蛋白所帶凈電荷少，靜電排斥力相當(dāng)?shù)?，其天然結(jié)構(gòu)未被破壞，蛋白較穩(wěn)定。而在pH=9時(shí)，大量凈電荷誘導(dǎo)，靜電排斥力增加，導(dǎo)致蛋白質(zhì)展開，發(fā)生部分變性，熱穩(wěn)定性降低。

圖2 pH對(duì)竹豆清蛋白熱變性的影響Fig.2 Effect of pH on thermal denaturation of bamboo bean albumin

表3 pH對(duì)竹豆清蛋白Td和ΔH的影響Table 3 Effect of pH on Td and ΔH of bamboo bean albumin

變性焓(ΔH)即樣品發(fā)生轉(zhuǎn)變前后吸熱峰的峰面積，反映蛋白質(zhì)分子的疏水性或親水性，同時(shí)也表征蛋白質(zhì)分子的聚集程度（反應(yīng)有序結(jié)構(gòu)比例）。它是蛋白質(zhì)變性過程中熱能變化的指標(biāo)值，主要反映在分子間氫鍵的斷裂和疏水作用，氫鍵斷裂吸熱，破壞疏水作用放熱[15]。由表3可知，竹豆清蛋白的變性焓(ΔH)從高到低依次對(duì)應(yīng)pH：5＞7＞9，說明變性焓(ΔH)隨pH的升高而降低，這與黎衛(wèi)[16]等對(duì)芡實(shí)谷蛋白熱學(xué)性質(zhì)的研究結(jié)果相符。pH=5.0時(shí)，變性焓(ΔH)達(dá)到最大，為3.40 J/g，表明此時(shí)蛋白有序結(jié)構(gòu)比例最高[17]。這歸功于在這種pH下，蛋白靜電斥力較小，疏水基團(tuán)埋藏在蛋白質(zhì)內(nèi)部，疏水作用較小，蛋白結(jié)構(gòu)緊湊有序，熱變性時(shí)需吸收更多熱能，焓變值較大。而在pH=9.0時(shí)，較強(qiáng)的靜電斥力使蛋白分子伸展，疏水基團(tuán)大量暴露，疏水作用增大，蛋白結(jié)構(gòu)從有序向無序結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變，發(fā)生部分變性，熱變性吸收的熱能減少，焓變值變小。總的來說，竹豆清蛋白在等電點(diǎn)附近及中性環(huán)境下，蛋白結(jié)構(gòu)有序緊湊，熱穩(wěn)定性更好，而在堿性條件下，蛋白易發(fā)生變性，無序結(jié)構(gòu)增多，熱穩(wěn)定性較差。

2.4 竹豆清蛋白的紅外光譜分析

圖3 竹豆清蛋白的紅外光譜圖Fig.3 Infrared spectrogram of bamboo bean albumin

由圖3可知，在3414 cm-1有強(qiáng)而寬的吸收峰，可能是蛋白質(zhì) N-H的反對(duì)稱伸縮振動(dòng)或者是醇羧基的O-H伸縮振動(dòng)；2961 cm-1處有吸收，是烷烴CH3的反對(duì)稱伸縮振動(dòng)。蛋白質(zhì)的肽鏈段屬于腫酰胺，當(dāng)?shù)鞍锥?jí)結(jié)構(gòu)以α螺旋為主時(shí)，C=O伸縮振動(dòng)頻率在1651 cm-1，以β折疊為主時(shí)，位于1637 cm-1左右，1641 cm-1處的吸收峰表明固態(tài)狀態(tài)下竹豆清蛋白的有序結(jié)構(gòu)以β折疊為主，這也與紅外擬合結(jié)果相一致[18]。1543 cm-1處的吸收可能源于 NH4+的不對(duì)稱變角振動(dòng)或者腫酰胺Ⅱ的C-N-H彎曲振動(dòng)；1444 cm-1處的峰形尖而窄，可能是NH3+的對(duì)稱變角引起的，1401 cm-1的吸收峰可能是氨基酸化合物特征基團(tuán)COO引起的對(duì)稱伸縮導(dǎo)致；1239 cm-1處的吸收峰可能是清蛋白C-N的伸縮振動(dòng)或C=N=N的對(duì)稱伸縮振動(dòng)；1076 cm-1的吸收峰可能是竹豆清蛋白中的直鏈C-C伸縮振動(dòng)或者雜質(zhì)糖類C-OH、C-O-C基團(tuán)的振動(dòng)引起的。617 cm-1處的吸收峰為雜質(zhì)峰，可能是磷酸鹽或硫酸鹽類引起的不對(duì)稱變角振動(dòng)。

蛋白質(zhì)紅外光譜圖上的特征吸收主要分為三組：1700～1600 cm-1、1580～1500 cm-1以及 1340～1220 cm-1，分別對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)的酰胺Ⅰ帶（C=O伸縮振動(dòng)）、酰胺Ⅱ帶（C-N伸縮振動(dòng)和N-H變形）、酰胺Ⅲ帶（C-N伸縮振動(dòng)）。

酰胺Ⅰ帶的吸收峰一般能反應(yīng)蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)，同時(shí)酰胺Ⅰ帶的譜峰指認(rèn)目前已經(jīng)比較成熟，其對(duì)應(yīng)關(guān)系如下：β折疊（1610～1640 cm-1），無規(guī)卷曲（1640～1650 cm-1），α螺旋(1650～1658 cm-1)，β轉(zhuǎn)角（1660～1700 cm-1）[19,20]。

本實(shí)驗(yàn)采用 KBr壓片法，在圖譜處理中，采用Savitsk-Golay函數(shù)平滑后，進(jìn)行二階導(dǎo)數(shù)和傅里葉去卷積，采用Gausse函數(shù)對(duì)譜圖進(jìn)行擬合，多次擬合使殘差最小。

圖4 竹豆清蛋白酰胺Ⅰ帶曲線擬合結(jié)果Fig.4 The curve fitting results of amideⅠband from bamboo bean albumin

如圖4所示，根據(jù)各子峰的積分面積與波譜對(duì)應(yīng)的二級(jí)結(jié)構(gòu)關(guān)系，計(jì)算出二級(jí)結(jié)構(gòu)的相對(duì)百分含量。

表4 傅里葉紅外(FT-IR)下竹豆清蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)含量Table 4 Secondary structure content of bamboo bean albumin determined by Fourier transform infrared spectroscopy(FT-IR)

如表4所示，可知竹豆清蛋白中β轉(zhuǎn)角(33.59%)所占比例最高，其次是β折疊(31.38%)，α螺旋(17.97%)和無規(guī)卷曲(17.07%)。其中α螺旋、β折疊、β轉(zhuǎn)角占蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)的80%以上，無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)較少，因此可認(rèn)為竹豆清蛋白是一個(gè)高度有序且穩(wěn)定的蛋白質(zhì)[21]。這與蓮子清蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)含量：β轉(zhuǎn)角36.96%，β折疊33.88%，α螺旋20.39%和無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)8.77%相似[22]。通過FT-IR可知，該制備工藝下竹豆清蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)以β折疊和β轉(zhuǎn)角為主，具有較少的α螺旋和無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)，是一個(gè)高度有序且穩(wěn)定的蛋白質(zhì)。

3 結(jié)論

竹豆清蛋白富含18種氨基酸，且人體必需氨基酸種類齊全、組成平衡，富含谷氨酸、天門冬氨酸、亮氨酸和賴氨酸，是一種具有開發(fā)食用前景的植物蛋白資源。竹豆清蛋白含有9個(gè)亞基，分子量分布較廣，主要集中在49.6 ku和27.6 ku處。pH對(duì)竹豆清蛋白熱學(xué)性質(zhì)影響顯著，其變性溫度（Td）在pH=7.0時(shí)最高，可達(dá)到100.6 ℃，熱穩(wěn)定最高；變性焓ΔH在pH=5.0時(shí)最大，表明此時(shí)有序結(jié)構(gòu)比例最高。傅立葉紅外結(jié)果顯示，竹豆清蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)以β折疊和β轉(zhuǎn)角為主，具有較少的α螺旋和無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)。通過研究竹豆清蛋白的理化性質(zhì)及二級(jí)結(jié)構(gòu)，可為其功能性質(zhì)的研究與應(yīng)用開發(fā)提供理論依據(jù)，對(duì)其在食品生產(chǎn)加工、藥物生產(chǎn)或其他工業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用具有重要參考價(jià)值。

[1]王麗俠,程須珍,王素華.中國飯豆種質(zhì)資源遺傳多樣性及核心種質(zhì)構(gòu)建[J].植物遺傳資源學(xué)報(bào),2014,15(2):242-247 WANG Li-xia, CHENG Xu-zhen, WANG Su-hua. Genetic diversity analysis and a core collection construction of rice bean(Vigna umbellata) in China [J]. Journal of Plant Genetic Resources, 2014, 15(2): 242-247

[2]Shamshad Begum S, Musharati Begum J, Annapurna M L.Utilization of rice bean products in the daily diet [J]. Dairying Foods and Home Sciences, 2004, 23(2): 137-142

[3]Katoch R. Morpho-physiological and nutritional characterization of rice bean (Vignaumbellata) [J]. Acta Agronomica Hungarica, 2015, 59(2): 125-136

[4]姜松仁.夏季飲用紅豆粥可利水消腫[J].求醫(yī)問藥,2008,8:39 JIANG Song-ren. Summer drinking red bean porridge is available for water swelling [J]. Medicine, 2008, 8: 39

[5]Yao Y, Cheng X Z, Wang L X, et al. Major phenolic compounds, antioxidant capacity and antidiabetic potential of rice bean (Vigna umbellataL.) in China [J]. International Journal of Molecular Sciences, 2012, 13(3): 2707-2716

[6]程須珍,王述民.中國食用豆類品種志[M].北京:中國農(nóng)業(yè)科技出版社,2009 CHENG Xu-zhen, WANG Shu-min. Chinese edible legumes[M]. Beijing: China Agricultural Science and Technology Press, 2009

[7]Katoch R. Effect of NPK enrichment on growth, yield and quality traits in rice bean (Vigna umbellata) [J]. Acta Agronomica Hungarica, 2011, 59(4): 317-324

[8]Pol K M, Thakur D R, Awari V R. Correlation studies on various morpho-physiological characters with grain yield in rice-bean {Vigna umbeillata Thumb (Ohwi and Ohashi)} [J].Agricultural Science Digest, 2003, 23(4): 267-269

[9]陳曉萌,王常青,訾艷,等.2種紅蕓豆蛋白的提取及組分分析[J].食品科學(xué),2015,36(2):149-154 CHEN Xiao-meng, WANG Chang-qing, ZI Yan, et al.Extraction and analysis of proteins from red kidney beans from different growing regions [J]. Food Science, 2015, 36(2):149-154

[10]李永武.綠豆清蛋白的提取及功能性質(zhì)和理化性質(zhì)研究[D].大慶:黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué),2014 LI Yong-wu. Study on the extraction, functional properties and physicochemical properties of mung bean albumin [D].Daqing: August First Land Reclamation University, 2014

[11]吳偉,蔡勇建,林親錄,等.米糠貯藏時(shí)間對(duì)米糠清蛋白功能性質(zhì)的影響[J].中國油脂,2015,40(10):15-19 WU Wei, CAI Yong-jian, LIN Qin-lu, et al. Effect of storage time on the functional properties of rice bran albumin [J].Chinese Oils and Fats, 2015, 40(10): 15-19

[12]趙蓓,王承明,張沙沙.菜籽粕中清蛋白的超聲輔助提取及氨基酸組成研究[J].中國糧油學(xué)報(bào),2015,10:32-36 ZHAO Bei, WANG Cheng-ming, ZHANG Sha-sha.Ultrasound-assisted extraction and amino acid composition of napin from rapeseed meal [J]. Journal of the Chinese Cereals and Oils Association, 2015, 10: 32-36

[13]Osborne T B. The vegetable proteins [M]. London:Longmans Green and Co, 1924

[14]Kennedy B M. Amino acid content of foods and biological data on proteins [J]. FAO Nutritional Studies,1970, 24(5): 5-6[15]Li S, Wei Y, Fang Y, et al. DSC study on the thermal properties of soybean protein isolates/corn starch mixture [J].Journal of Thermal Analysis & Calorimetry, 2014, 115(2):1633-1638

[16]黎衛(wèi),毛健,齊斌.芡實(shí)谷蛋白的結(jié)構(gòu)及熱力學(xué)性質(zhì)研究[J].現(xiàn)代食品科技,2015,10:129-133 LI Wei, MAO Jian, Qi Bin. Structure and thermal properties of glutelin from euryale ferox seeds [J]. Modern Food Science and Technology, 2015, 10: 129-133

[17]黃友如,王教飛,朱東興,等.芋艿分離蛋白的理化性質(zhì)[J].食品科學(xué),2016,37(15):45-48 HUANG You-ru, WANG Jiao-fei, ZHU Dong-xing, et al.Physicochemical characterization of taro protein isolates [J].Food Science, 2016, 37(15): 45-48

[18]翁詩甫.傅里葉變換紅外光譜分析[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010 WEN Shi-fu. Analysis of fourier transform infrared spectroscopy [M]. Beijing: Chemical Industry Press, 2010

[19]Zhang Q H, Huang X Q, MiaoY L, et al. Study on secondary structure of meat protein by FT-IR [J]. Food &FermentationIndustries, 2015,41(10): 247-251

[20]Long G, Ji Y, Pan H, et al. Characterization of thermal denaturation structure and morphology of soy glycinin by FT-IR and SEM [J]. International Journal of Food Properties,2015, 18(4): 763-774

[21]Choi S, Ma C. Structural characterization of globulin from common buckwheat (Fagopyrum esculentum Moench) using circular dichroism and Raman spectroscopy [J]. Food Chemistry, 2007, 102(1): 150-160

[22]蔡聯(lián)輝,曾虹燕,蔡西玲,等.蓮子蛋白組分二級(jí)結(jié)構(gòu)的研究[J].光譜學(xué)與光譜分析,2011,31(9):2394-2398 CAI Lian-hui, ZENG Hong-yan, CAI Xi-ling, et al. Second structure of the protein factions from lotus seeds [J].Spectroscopy and Spectral Analysis, 2011, 31(9): 2394-2398