邵佩，張昭，王琳，彭幫柱，馮武

（華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖北武漢 430070）

自由基在生命系統(tǒng)中天然存在，自由基是一種非常不穩(wěn)定的物質(zhì)，它能迅速破壞機(jī)體內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等生物大分子的反應(yīng)[1]。已有研究表明，自由基可以被多酚類化合物清除，是因?yàn)樘峁┝藲潆x子或螯合金屬離子抑制了氧化作用發(fā)生[2,3]。

獼猴桃果實(shí)汁多、肉厚，味道清香鮮美，營養(yǎng)豐富，含有糖、蛋白質(zhì)、多酚類化合物、礦物質(zhì)、氨基酸和維生素等多種營養(yǎng)物質(zhì)，被譽(yù)為“水果之王”。并因其豐富的植物營養(yǎng)成分以及強(qiáng)的抗氧化能力被認(rèn)為是極具保健價(jià)值的水果[4]。獼猴桃富含許多生物活性分子，近年來已有研究表明獼猴桃多酚具有抗氧化[5]、抑菌[6]、抗癌[7,8]、預(yù)防糖尿病[9]、抗過敏性皮炎[10]和提高免疫力[11]等作用。對野生軟棗獼猴桃的總還原能力和DPPH自由基抗氧化活性研究結(jié)果表明野生軟棗獼猴桃具有抗氧化、清除自由基的功效[12]。Park等[13]人也研究了“Hayward”、“Daeheung”、“Haenam”和“Bidan”四個(gè)品種獼猴桃的抗氧化活性，研究銅離子還原力(CUPRAC)和亞鐵還原力實(shí)驗(yàn)(FRAP)顯示四個(gè)品種獼猴桃對 Cu2+和 Fe3+具有較強(qiáng)的還原能力，對ABTS陽離子、DPPH自由基具有很好的清除能力。Fiorentino等[14]也評價(jià)了獼猴桃中植物化學(xué)物質(zhì)的抗氧化能力，結(jié)果表明它們具有很好的清除 DPPH、過氧化氫、超氧自由基的能力，以及很好的還原能力。

目前學(xué)者研究膨大劑處理對獼猴桃營養(yǎng)成分、活性物質(zhì)以及貯藏特性，關(guān)于膨大劑處理對獼猴桃多酚抗氧化活性研究未見報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)以總酚含量、總還原能力、羥基自由基、ABTS自由基、超氧自由基清除能力為考察指標(biāo)。研究不同膨大劑處理以及不同膨大劑殘留量對獼猴桃中多酚物質(zhì)和抗氧化活性的影響，以期為生產(chǎn)高質(zhì)量的獼猴桃提理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

95%乙醇、福林酚、抗壞血酸、碳酸鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、鐵氰化鉀、冰乙酸、三氯化鐵、30%雙氧水、硫酸亞鐵、水楊酸、鹽酸、鄰苯三酚、過硫酸鉀等試劑均為國產(chǎn)分析純，沒食子酸、2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)，上海源葉生物科技有限公司；Tris，美國Dow AUGUS公司；氯吡脲(CPPU)、噻苯隆(TDZ)，上海源葉生物公司。

榨汁機(jī)，飛利浦公司；KQ2200DE型超聲波清洗機(jī)，昆山市超聲儀器有限公司；AF103制冰機(jī)，意大利Scotsman公司；IG20-WS臺式離心機(jī)，長沙湘智離心機(jī)有限公司；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；BTP-8ZL00X凍干機(jī)，美國 SP公司；UV-1750型紫外-可見分光光度計(jì)，日本島津公司；恒溫水浴鍋，天津市泰斯特儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 樣品處理

對照和膨大劑處理徐香獼猴桃為陜西眉縣栽培(處理方式：在果實(shí)達(dá)到幼果細(xì)胞分裂期，即謝花后20 d，分別用10 mg/L藥液和80 mg/L藥液浸漬幼果，記為高濃度和低濃度，并按照膨大劑的處理量和膨大劑種類分別記為：CK(對照，不經(jīng)過膨大處理)、CPPU-H、CPPU-L、TDZ-H、TDZ-L)。獼猴桃采摘運(yùn)達(dá)實(shí)驗(yàn)室后，挑選出成熟度一致、大小均勻、無病蟲害及機(jī)械損傷的完整果實(shí)，將其洗凈、瀝干、去皮切塊，并于-20 ℃冰箱凍藏，備用。

1.2.2 獼猴桃多酚的提取

分別取膨大劑處理和對照組獼猴桃榨汁，取獼猴桃漿10 g，按照1:10的料液比加入70%乙醇溶液，于35 ℃，100 kW的超聲波清洗機(jī)中超聲30 min。然后置于8000 r/min離心機(jī)中離心10 min。重復(fù)離心三次并收集上清液，將其于45 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中旋蒸至一定的體積后，置于-20 ℃冷凍12 h，冷凍干燥后備用。

1.2.3 獼猴桃多酚含量的測定

參照[5]福林-酚比色法，測量多酚凍干粉中的多酚含量。以沒食子酸的質(zhì)量濃度(mg/L)為橫坐標(biāo)，以吸光值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：

結(jié)果以沒食子酸當(dāng)量(mgGAE/g表示)。

將膨大處理和對照的獼猴桃多酚凍干粉配制成濃度為5 mg/mL。吸取1.0 mL各獼猴桃多酚樣液，加入蒸餾水定容至2.0 mL，然后加入1.0 mL的福林酚溶液反應(yīng)5 min。最后加入1.0 mL 10%的碳酸鈉溶液后避光于25 ℃反應(yīng)2 h。于765 nm波長處測量吸光度值，并使用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算獼猴桃中多酚含量。換算公式如下：

式中：W-總酚的含量(mg/g)；C-沒食子酸質(zhì)量濃度(mg/L)；V-提取液體積(mL)；N-稀釋倍數(shù)；M-獼猴桃多酚樣品的取樣量(g)。

1.2.4 總還原能力的測定

參照 E.Tsantili[15]采用鐵氰化鉀還原顯色法稍作修改測定總還原能力。取1.0 mL不同濃度的膨大處理和對照組獼猴桃多酚樣液，加入0.2 mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH 6.6) 0.6 mL，然后加入1%的鐵氰化鉀溶液1.5 mL混勻后，置于50 ℃恒溫水浴鍋水浴20 min。

取出冷卻至室溫后加入10%冰醋酸溶液3.0 mL，于8000 r/min離心10 min。取上清液3.0 mL，加入5.0 mL的蒸餾水和1%的三氯化鐵溶液0.2 mL，混勻后反應(yīng)5 min，在517 nm處測量吸光值，實(shí)驗(yàn)3次平行取平均值。以相同體積的蒸餾水代替鐵氰化鉀來扣除其顏色，抗壞血酸為陽性對照來評價(jià)多酚的總還原能力。獼猴桃多酚樣品的吸光度按如下公式計(jì)算：

式中：A-某濃度獼猴桃多酚樣液的最終吸光度值；A1-不同種植方式的某濃度獼猴桃多酚的吸光度值。

1.2.5 ·OH清除能力的測定

參考文獻(xiàn)[16,17]稍作修改，加入 1.0 mL濃度為 9 mmol/L的FeSO4溶液，1.0 mL濃度為8.8 mmol/L的H2O2溶液，1.0 mL濃度為 9 mmol/L的水楊酸溶液(50%乙醇配成)以及1.0 mL不同濃度的膨大處理和對照組的獼猴桃多酚。

最后加入1.0 mL H2O2啟動反應(yīng)后置于37 ℃水浴鍋中水浴1 h。用同體積蒸餾水代替樣品液作空白組，用同體積的蒸餾水代替水楊酸溶液做對照，在510 nm波長處測量吸光度值。以抗壞血酸作陽性對照，獼猴桃多酚和抗壞血酸的羥基自由基清除率按以下公式計(jì)算：

式中：A0-獼猴桃多酚樣液用相同體積的蒸餾水代替測得的吸光度值；Ai-某濃度時(shí)獼猴桃多酚樣品測得的吸光度值；Ai0-水楊酸醇溶液用等體積的蒸餾水代替測得的吸光度值；S-羥基自由基清除率，%。

1.2.6 ABTS+·清除能力的測定

參考L.Alvarez-Jubete[18,19]的方法作出修改。ABTS工作液的配制：將 7 mmol/L的 ABTS溶液和 2.45 mmol/L的過硫酸鉀溶液1:1比例混勻，于室溫下避光過夜放置 12～16 h，用蒸餾水對其稀釋，使其吸光度值為0.70±0.02，所得為ABTS工作液。分別取不同濃度的膨大處理和對照組的獼猴桃多酚樣液200 μL，然后加入3.0 mL的ABTS工作液。室溫條件下避光反應(yīng)1 h，用同等體積的蒸餾水代替ABTS溶液作對照，然后在734 nm波長處測量吸光度值。以相同濃度的抗壞血酸作為陽性對照，獼猴桃多酚樣品和抗壞血酸的ABTS自由基清除率用如下公式計(jì)算：

式中：A0-獼猴桃多酚樣液用相同體積的蒸餾水代替測得的吸光度值；Ai-某濃度時(shí)獼猴桃多酚樣液測得的吸光度值；Ai0-ABTS溶液用等體積的蒸餾水代替測得的吸光度值。S-ABTS自由基清除率，%。

1.2.7 超氧自由基清除能力的測定

參考文獻(xiàn)[20,21]分稍作修改。分別取不同濃度的膨大處理組和對照組的獼猴桃多酚樣液200 μL，然后加入 5.7 mL濃度為 50 mmol/L的 Tris-HCl緩沖液(pH=8.2)。

室溫下混勻后加入0.1 mL濃度為6 mmol/L的鄰苯三酚溶液后開始計(jì)時(shí)5 min，每隔30 s記錄吸光度值。以相同濃度的抗壞血酸作為陽性對照，以同體積的蒸餾水做空白組，在320 nm波長處測量吸光度值。獼猴桃多酚和抗壞血酸的超氧自由基清除率按如下公式計(jì)算：

式中：?A1/?t-以蒸餾水代替獼猴桃多酚樣液，鄰苯三酚的自氧化時(shí)反應(yīng)速率；?A2/?t-加入不同濃度獼猴桃多酚樣液后鄰苯三酚自氧化反應(yīng)速率；I-超氧陰離子抑制率(%)。

1.2.8 不同膨大劑殘留量對多酚含量的影響

通過前面的研究，篩選出對獼猴桃多酚含量和抗氧化活性影響較大的膨大劑種類，研究不同膨大劑殘留量對獼猴桃總酚含量和抗氧化活性的影響。膨大劑允許殘留量數(shù)值參考《食品中農(nóng)藥最大殘留量》(GB 2763-2012)[22]對膨大劑TDZ和CPPU殘留量的標(biāo)準(zhǔn)：

表1 水果中膨大劑允許殘留量Table 1 The swelling agent in fruit allows for residual amount

從表中可以看出，國標(biāo)中限定了CPPU在獼猴桃中的殘留量，但并未限定TDZ在獼猴桃中的殘留量，則參考其他水果中TDZ最大允許殘留量。李瑞娟等[23]研究表明，0.1%氯吡脲藥后30 d，在獼猴桃中的殘留量未超過0.04 mg/kg。柴振林等[24]研究表明用藥36 d后使用濃度為20、50、100 mg/L的樣品中氯吡脲測定含量0.02 mg/kg左右，小于國家標(biāo)準(zhǔn)。本實(shí)驗(yàn)材料中膨大劑CPPU和TDZ的殘留量均小于0.05 mg/kg，符合國家標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，但是膨大劑殘留量對多酚抗氧化活性的影響未見報(bào)道。因此，以國標(biāo)中膨大劑在果實(shí)中的允許殘留量為參考，向未膨大劑處理的果實(shí)中添加膨大劑，通過添加量保證其殘留量為 0.01～0.05 mg/kg，研究不同殘留量對獼猴桃多酚含量的影響，方法參考1.2.3。

1.2.9 不同膨大劑殘留量對多酚抗氧化活性的影響

包括總還原能力、羥基自由基、ABTS自由基、超氧自由基清除能力的測定。方法參考1.2.4～1.2.7。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用 EXCEL 2010處理數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析，采用Origin 8.0進(jìn)行繪圖。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均重復(fù)3次，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，以p＜0.05表示有顯著差異具有統(tǒng)計(jì)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 膨大處理對獼猴桃多酚含量的影響

本實(shí)驗(yàn)采用一定濃度的各獼猴桃多酚樣液測定總多酚含量，不同膨大處理對獼猴桃多酚含量影響結(jié)果如表2。

從表2中可以看出，對照CK的總酚含量最高，為3.26±0.14 mg/g，膨大劑TDZ和CPPU處理都能降低獼猴桃的總酚含量，TDZ膨大處理的總酚含量最低，TDZ-H和TDZ-L的總酚含量分別為2.64±0.25和2.16±0.01 mg/g。其中CPPU-H和CPPU-L的總酚含量無顯著性差異(p＜0.05)，TDZ-H和TDZ-L的總酚含量無顯著性差異(p＜0.05)。綜上所述，膨大劑 TDZ和CPPU處理降低獼猴桃多酚含量，且TDZ處理對總酚的影響程度顯著大于CPPU處理，這可能是因?yàn)榕虼髣┨幚砗笥绊懝麑?shí)生長發(fā)育過程中內(nèi)源激素的變化和抗氧化系統(tǒng)組成的超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化物酶(POD)活性，并增大果粒和果重使膨大劑處理組的總酚含量低于對照組。本研究結(jié)果比李琛等[25]研究結(jié)果所得的獼猴桃總酚含量高，這可能與研究的種植條件和地區(qū)，原料的預(yù)處理方法等不同而存在差異。

表2 不同膨大處理的獼猴桃總酚含量Table 2 The total polyphenols content of Kiwifruit by different swelling agent treatments

2.2 膨大處理對獼猴桃多酚體外抗氧化能力研究

研究表明獼猴桃多酚有抗氧化能力，但關(guān)于膨大處理對獼猴桃多酚抗氧化活性的影響研究還未見報(bào)道。因此本實(shí)驗(yàn)以總還原能力、羥基自由基清除率、ABTS自由基清除率、超氧自由基清除率為參考指標(biāo)對高、低濃度膨大劑TDZ和CPPU處理獼猴桃多酚的抗氧化活性進(jìn)行對比分析。

2.2.1 總還原能力的測定

獼猴桃多酚總還原能力的測定可以作為抗氧化活性的重要指標(biāo)，抗氧化劑通過給自由基提供電子，將三價(jià)鐵還原為二價(jià)鐵。高的吸光值表示獼猴桃多酚具有很高的總還原能力。本實(shí)驗(yàn)以Vc作陽性對照，綜合測定并比較了不同膨大劑處理對獼猴桃多酚總還原能力的影響，結(jié)果如圖1。

從圖1中可以看出，不同膨大處理組和對照組獼猴桃多酚與Vc一樣與濃度之間均呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。在多酚濃度20～100 mg/mL范圍內(nèi)，隨著濃度升高，多酚的總還原能力顯著增加，但其總還原能力均低于Vc。在獼猴桃多酚濃度為100 mg/mL時(shí)，獼猴桃多酚的總還原能力最強(qiáng)，對照組CK吸光值達(dá)0.52左右，CPPU-H、CPPU-L、TDZ-L、TDZ-H的吸光度分別為0.48、0.46、0.43、0.39。綜上所述，表明獼猴桃多酚總還原能力大小順序?yàn)镃K＞CPPU-H＞CPPU-L＞TDZ-L＞TDZ-H。在多酚濃度較高時(shí)(60～100 mg/mL)，膨大劑TDZ和CPPU處理降低獼猴桃多酚的總還原能力，并且膨大劑TDZ處理的總還原能力顯著低于CPPU處理組(p＜0.05)。劉金串等[26]研究膨大處理可使維多利亞葡萄多酚的鐵氰化鉀還原力減弱，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似。

左線隧道掘進(jìn)后，1#承臺向左線隧道方向發(fā)生少量的位移，右側(cè)隧道開挖時(shí)1#承臺X向的位移方向與左側(cè)隧道開挖時(shí)相反，在隧道開挖結(jié)束時(shí)，1#承臺的1號、2號角點(diǎn)最大位移約只有0.09 mm，3號、4號角點(diǎn)X向最大位移只有0.08 mm。2#承臺的1號、2號角點(diǎn)X向最大位移約為-0.84 mm，3號、4號角點(diǎn)X向最大位移約為-0.79 mm。

圖1 不同膨大劑處理對獼猴桃多酚總還原能力的影響Fig.1 Effects of different swelling agent treatments on the total reducing capacity of Kiwifruit polyphenol

2.2.2 ·OH自由基清除能力的測定

·OH自由基是一種重要的活性氧，具有極強(qiáng)的得電子能力即氧化能力。抗氧化劑具有很強(qiáng)的清除羥基自由基的能力，從而抑制氧化反應(yīng)的產(chǎn)生。本文通過測定不同膨大劑處理對獼猴桃多酚·OH自由基清除能力，并對其抗氧化活性進(jìn)行比較分析，結(jié)果見圖2。

圖2 不同膨大處理對獼猴桃多酚·OH清除能力的影響Fig.2 Effects of different swelling agent treatments on the hydroxyl radical scavenging capacity of Kiwifruit polyphenol

獼猴桃多酚對羥基自由基的清除率如圖2所示，在多酚濃度5～10 mg/mL之間，隨著濃度的升高，獼猴桃多酚對羥基自由基的清除率逐漸增大；在多酚濃度為15～25 mg/mL之間，多酚對羥基自由基的清除率變化較小，但其均低于同濃度下Vc羥基自由基清除率。當(dāng)獼猴桃多酚濃度為25 mg/mL時(shí)，CK的對羥基自由基清除率為95.28%，CPPU-H、CPPU-L、TDZ-H、TDZ-L對羥基自由基清除率分別為94.06%、92.77%、87.97%、81.91%。則各獼猴桃多酚清除羥基自由基能力大小為 CK＞CPPU-H＞CPPU-L＞TDZ-H＞TDZ-L，隨著多酚濃度升高膨大劑CPPU和TDZ處理顯著降低清除羥基自由基能力(p＜0.05)。綜上所述，與對照CK相比，進(jìn)一步說明膨大劑 TDZ處理顯著降低獼猴桃多酚·OH清除能力，影響多酚的抗氧化活性。

2.2.3 ABTS+·自由基清除能力的測定

多酚類化合物對ABTS自由基的清除能力受到結(jié)構(gòu)中存在的官能團(tuán)的影響[27]。不同膨大處理對獼猴桃多酚ABTS+·自由基清除能力的測定結(jié)果如圖3。

圖3 不同膨大劑處理對多酚ABTS+·清除能力的影響Fig.3 Effects of different swelling agent treatment on the ABTS+·scavenging capacity of Kiwifruit polyphenol

從圖 3可以看出，在一定濃度范圍內(nèi)，多酚ABTS+·清除能力存在量效關(guān)系。在多酚濃度 2～12 mg/mL，隨著濃度升高，多酚ABTS+·清除能力增大。在濃度大于16 mg/mL時(shí)，各獼猴桃多酚達(dá)到最大值，與 Vc的 ABTS+·清除能力無顯著性差異(p＞0.05)。在濃度為20 mg/mL時(shí)，對照CK的ABTS+·清除能力為100%，CPPU-H、CPPU-L、TDZ-H、TDZ-L的清除率也為100%左右，與對照無顯著性差異(p＞0.05)，即隨著多酚濃度升高膨大劑TDZ和CPPU處理對獼猴桃多酚 ABTS+·清除能力的影響不大。由此可見，獼猴桃多酚清除ABTS自由基的能力最強(qiáng)，能夠有效的清除自由基[28]，且膨大處理對其影響不大。

2.2.4 超氧自由基(O·)清除能力的測定

在本實(shí)驗(yàn)中采取鄰苯三酚自氧化法測定獼猴桃多酚對超氧自由基清除能力。不同膨大劑處理對超氧自由基清除能力的結(jié)果如圖4。

圖4 不同膨大劑處理對多酚超氧自由基清除能力的影響Fig.4 Effects of different swelling agent treatment on the hyperoxygen radical scavenging capacity of Kiwifruitpolyphenol

2.3 不同TDZ殘留量對獼猴桃多酚含量影響

表3 不同TDZ添加量對獼猴桃總酚含量的影響Table 3 Effects of different the amounts of TDZ addedon the total phenol content of Kiwifruit

根據(jù)前面的實(shí)驗(yàn)，膨大劑TDZ處理對獼猴桃總多酚含量的影響較大，由于國標(biāo)中未規(guī)定獼猴桃中TDZ的允許殘留量，因此本實(shí)驗(yàn)參考其他水果中TDZ最低允許殘留量，研究不同膨大劑添加濃度(0.01～0.05 mg/kg)對獼猴桃總酚含量的影響，作為允許殘留量的參考值。結(jié)果如下表3。

不同 TDZ殘留量的獼猴桃總酚含量存在顯著性的差異。對照CK的總酚含量最高3.41±0.20 mg/g，TDZ殘留量為0.05 mg/kg時(shí)總酚含量最低2.06±0.09 mg/kg。結(jié)果表明獼猴桃中TDZ濃度越高，獼猴桃多酚的總酚含量越低，并且TDZ濃度大于0.04 mg/kg時(shí)，即與對照CK相比有顯著性差異(p＜0.05)。綜上所述，膨大處理TDZ添加量高時(shí)顯著降低獼猴桃總酚含量。

2.4 不同 TDZ殘留量對獼猴桃多酚抗氧化活性的影響

圖5 不同濃度TDZ對獼猴桃多酚總還原能力的影響Fig.5 Effects of different concentration of TDZ on the total reducing capacity of Kiwifruit polyphenol

圖6 不同濃度TDZ對獼猴桃多酚·OH清除能力的影響Fig.6 Effects of different concentration of TDZ on the hydroxyl radical scavenging capacity of Kiwifruit polyphenol

由圖5可知，多酚濃度在20～100 mg/mL范圍內(nèi)，不同 TDZ殘留量獼猴桃多酚的總還原能力隨著殘留濃度的增加而增加。在多酚濃度為100 mg/mL時(shí)，各獼猴桃多酚的總還原能力達(dá)到最大值。此時(shí)，對照組CK的總還原能力為0.51，對應(yīng)0.01～0.05 mg/kg TDZ殘留量組的總還原能力分別為0.47、0.43、0.42、0.42、0.41。當(dāng)TDZ殘留量大于0.01 mg/kg時(shí)，與對照組相比處理組有顯著性差異(p＜0.05)。說明TDZ殘留量大于0.01 mg/kg，即降低獼猴桃多酚的總還原能力。

由圖6可知，多酚濃度在5～25 mg/mL范圍內(nèi)，不同 TDZ殘留量各獼猴桃多酚清除羥基自由基能力隨著多酚濃度的增加而增加。在濃度為25 mg/mL時(shí)，各獼猴桃多酚清除羥基自由基能力達(dá)到最大值。與對照CK、TDZ添加量0.01～0.05 mg/kg對羥基自由基的清除率分別為：92.61%、92.26%、91.24%、85.90%、87.85%、80.40%。當(dāng)TDZ殘留濃度大于0.02 mg/kg時(shí)，與CK相比有顯著性差異(p＜0.05)。表明TDZ殘留量大于0.02 mg/kg即可顯著降低獼猴桃多酚清除羥基自由基能力。

圖7 不同濃度TDZ對獼猴桃多酚ABTS+·清除能力的影響Fig.7 Effects of different concentration TDZ on the ABTS+· scavenging capacity of Kiwifruit polyphenol

圖8 不同濃度TDZ對多酚超氧自由基清除能力的影響Fig.8 Effects of different concentration of TDZ on the hyperoxygen radical scavenging capacity of Kiwifruit polyphenol

由圖 7可知，隨著多酚濃度從 2 mg/mL到 20 mg/mL范圍內(nèi)，ABTS自由基清除能力與濃度存在量效關(guān)系，在濃度為20 mg/mL時(shí)，對照CK對ABTS自由的清除率為 100%左右，濃度 0.01～0.03 mg/kg TDZ處理對ABTS自由基的清除率也為100%左右，TDZ濃度0.04 mg/kg和0.05 mg/kg對應(yīng)的ABTS自由基清除率為91.73%和93.88%，與對照CK相比有顯著性差異(p＜0.05)。說明TDZ殘留量大于0.03 mg/kg即可影響獼猴桃多酚對ABTS自由基的清除率。

由圖8可知，在濃度20～100 mg/mL范圍內(nèi)，對超氧自由基清除能力隨著多酚濃度增大而增大，在濃度為 100 mg/mL時(shí)，CK對超氧自由基清除率為90.70%。與對照CK對超氧自由基的清除率相比，TDZ濃度大于0.04 mg/kg時(shí)才顯著降低獼猴桃多酚對超氧自由基的清除能力。綜上所述，總體TDZ濃度對獼猴桃多酚的超氧自由基清除率影響不大。

3 結(jié)論

3.1 膨大劑是植物生長調(diào)節(jié)劑，又叫外源激素。具有生物活性，調(diào)節(jié)生長發(fā)育，與內(nèi)源生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和代謝緊密相連，是一種依據(jù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)人工合成的物質(zhì)。獼猴桃中膨大劑的主要成分為氯吡脲(CPPU)，是苯基脲類衍生物，促進(jìn)細(xì)胞分裂、分化和擴(kuò)大，促進(jìn)器官形成。近年來，苯基脲類衍生物噻苯隆(TDZ)也作為獼猴桃的膨大劑。膨大劑在水果中應(yīng)用的研究多集中在對葡萄研究方面，目前已有研究膨大劑對葡萄果實(shí)產(chǎn)量、品質(zhì)、果實(shí)大小、化學(xué)成分以及抗氧化性的影響。董秋洪等[29]研究了CPPU(苯甲脲類細(xì)胞分裂素)、赤霉素(GA)、對氯苯氧乙酸(PCPA)等膨大劑的混合使用可以促進(jìn)果實(shí)的膨大，但會降低果實(shí)品質(zhì)。郭正兵等[30]選取3種類型的膨大劑分別應(yīng)用于巨峰系列3個(gè)品種的栽培過程中，結(jié)果表明每種膨大劑均改善了 3種葡萄品種的產(chǎn)量和品質(zhì)，但存在較大的差異。張艷宜等[31]以陜西主產(chǎn)的“秦美”獼猴桃為試材，進(jìn)行采前膨大劑(CPPU)，采后 1-甲基環(huán)丙烯(1-MCP)處理和膨大劑+1-甲基環(huán)丙烯(CPPU+1-MCP)處理果實(shí)評價(jià)貨架期感官品質(zhì)，發(fā)現(xiàn)兩者對獼猴桃果實(shí)感官品質(zhì)有一定的影響，改變了獼猴桃的風(fēng)味。

3.2 近年來，有很多對膨大處理后對果實(shí)的影響相關(guān)研究，而關(guān)于膨大劑在獼猴桃中的應(yīng)用方面主要研究其對獼猴桃貨架期感官品質(zhì)、外觀、化學(xué)成分的影響，對抗氧化活性研究較少。劉金串等[32以紅地球鮮食葡萄品種為試材，對其葡萄進(jìn)行膨大處理，測定基本的理化指標(biāo)和抗氧化活性，發(fā)現(xiàn)膨大處理可增加紅地球葡萄酚類物質(zhì)含量并增強(qiáng)銅離子還原能力、鐵氰化鉀還原力，但對金屬螯合力、羥自由基清除能力影響較小，并且不同的葡萄膨大處理對其影響效果不同。本研究表明獼猴桃多酚有較好的抗氧化活性，膨大處理對獼猴桃多酚和抗氧化活性有一定的影響。總體來看，不同膨大處理可降低獼猴桃多酚含量和抗氧化活性。膨大劑TDZ處理影響大于CPPU處理，且對總酚含量、總還原能力、羥基自由基清除率、超氧自由基清除率影響比較大(總體差異顯著)，而對ABTS自由基清除率影響較小(總體差異不顯著)。對不同TDZ殘留濃度的研究結(jié)果表明：TDZ殘留量大于0.04 mg/kg即可顯著降低獼猴桃總酚含量，TDZ殘留量對總還原能力和羥基自由基清除率的影響較大，對超氧自由基清除率和ABTS自由基清除率的影響較小。

3.3 因此，隨著人們安全意識的提高，在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)全面考慮膨大處理對獼猴桃品質(zhì)的影響，讓膨大劑的使用更加合理科學(xué)，才能在確保食品安全的前提下更有針對性地指導(dǎo)獼猴桃生產(chǎn)中果實(shí)處理技術(shù)改善。

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