董維余群力徐也

1 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，蘭州，730050；2 蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，蘭州，730050

隨著科技的發(fā)展人們對(duì)綠色食品的要求越來(lái)越高，而一些商家為了經(jīng)濟(jì)利益，使農(nóng)作物快速生長(zhǎng)，便在農(nóng)產(chǎn)品中添加各種農(nóng)藥，從而嚴(yán)重危害人們身體健康。有機(jī)磷農(nóng)藥屬于有機(jī)磷酸類化合物，種類繁多，藥效較高，用途廣泛，而且容易分解，是農(nóng)藥中極其重要的一類化合物[1]。但有機(jī)磷農(nóng)藥的不合理使用及濫用會(huì)使農(nóng)作物生長(zhǎng)受到抑制或破壞[2]。有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)入土壤后，不但降低土壤肥力，破壞土壤結(jié)構(gòu)，而且還會(huì)使其再次轉(zhuǎn)移到組織內(nèi)部,導(dǎo)致有機(jī)磷農(nóng)藥殘留升高[3]。為此，我國(guó)投入大量資金、人力和物力，一方面加強(qiáng)無(wú)公害綠色農(nóng)藥的研制開(kāi)發(fā)和應(yīng)用；另一方面制定嚴(yán)格的農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)來(lái)控制食品的質(zhì)量，使食品的安全性得到提高。因此，需要加強(qiáng)對(duì)靈敏、快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便且環(huán)保的有機(jī)磷農(nóng)藥檢測(cè)方法的研究，對(duì)保護(hù)生態(tài)環(huán)境和人類健康有著重要意義。

1. 材料與方法

1.1 試劑與儀器

面粉（超市隨機(jī)抽取），甲基嘧啶磷標(biāo)準(zhǔn)品，乙腈（分析純，天津市光復(fù)精密化工研究所），甲醇（分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司），丙酮（分析純，色譜純，白銀良友化學(xué)試劑有限公司），氯化鈉（分析純，天津市百世化工有限公司）。

氮吹儀（Lab Tech MV5），新型旋渦混合器（德國(guó)ZKA VORTEX），氣相色譜儀（帶有雙火焰光度檢測(cè)器[4]，島津GC-2010plus），電子天平（JINNUO TD5012）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 甲基嘧啶磷標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

將甲基嘧啶磷標(biāo)準(zhǔn)品配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0.2、0.5、1.0、2.0、5.0μg/mL的甲基嘧啶磷標(biāo)準(zhǔn)溶液。進(jìn)樣 1μL，進(jìn)行氣相色譜測(cè)定，以保留時(shí)間定性，以峰面積對(duì)應(yīng)濃度分別制作甲基嘧啶磷農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2 提取

每種試樣稱取三份25.00g于150mL錐形瓶中，分別加入50.0 mL乙腈，丙酮，甲醇，在旋渦混合器上震蕩2min，使其充分混勻，靜置片刻后，用濾紙過(guò)濾，濾液收集到含有5～7g氯化鈉的100mL具塞比色管中，收集濾液大約40～50mL，蓋上塞子，劇烈震蕩1min，在室溫下靜置30 min，使有機(jī)相與水相分層（GB/T 5009.20-2003）。

1.2.3 凈化

從具塞比色管中分別吸取兩份20 mL有機(jī)層于刻度離心管中，將離心管置于氮吹儀中，在50 ℃下氮吹至近干，用丙酮定容至1mL，于漩渦混合器上劇烈震蕩，使其充分混勻。分別移入兩個(gè)2mL自動(dòng)進(jìn)樣器微量瓶中，供色譜測(cè)定。若定容后的樣品溶液過(guò)于渾濁，應(yīng)用0.45μm濾膜過(guò)濾后再進(jìn)行測(cè)定。

1.2.4 測(cè)定

取樣品提取物在經(jīng)優(yōu)化可行的色譜條件下進(jìn)行檢測(cè)，以保留時(shí)間定性，峰面積定量，用外標(biāo)法計(jì)算樣品中各種農(nóng)藥的濃度。（1）定性分析

雙柱測(cè)得樣品溶液中未知組分的保留時(shí)間分別與凈化后的樣品溶液在同一色譜柱上的保留時(shí)間相比較，如果獲得的樣品溶液中某組分的兩組保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中某一農(nóng)藥的兩組保留時(shí)間相差都在0.05min內(nèi)的可認(rèn)定為該農(nóng)藥。

（2）定量分析

試樣中被測(cè)農(nóng)藥殘留量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，單位以毫克每千克（mg/kg）表示，按下面公式計(jì)算。

式中：

ρ－標(biāo)準(zhǔn)溶液中農(nóng)藥的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升（mg/L）；

A－樣品溶液中被測(cè)農(nóng)藥的峰面積；

As－農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)農(nóng)藥的峰面積；

V1－提取溶劑總體積，單位為毫升（mL）；

V2－吸取出用于檢測(cè)的提取溶液的體積，單位為毫升（mL）；

V3－樣品溶液定容體積，單位為毫升（mL）；

m－試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。

計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字，當(dāng)結(jié)果大于1mg/kg時(shí)保留三位有效數(shù)字。1.2.5 試樣加標(biāo)處理

分別采用乙腈、甲醇、丙酮進(jìn)行提取，試樣提取液（加入甲基嘧啶磷標(biāo)準(zhǔn)品）→凈化→測(cè)定→分析。1.2.6 色譜條件

預(yù)柱：1.0m，0.53nm內(nèi)徑，脫活石英毛細(xì)管柱[5]。

兩根色譜柱，分別為：A柱：50%聚苯基甲基硅氧烷柱，30m×0.53mm×1.0μm；B柱：100%聚甲基硅氧烷柱，30m×0.53mm×1.50μm。進(jìn)樣口溫度：220℃，檢測(cè)器溫度：250℃；柱溫：150℃（保持2min）→ 250℃（保持12min）。載氣：氮?dú)?，純度?9.999%，流速為10mL/min；燃?xì)猓簹錃?，純度?9.999%，流速為75mL/min；助燃?xì)猓嚎諝?，流速?00mL/min。1.2.7 分析方式

由自動(dòng)進(jìn)樣器分別吸取1.0μL標(biāo)準(zhǔn)混合溶液和凈化后的樣品溶液注入色譜儀中，以雙柱保留時(shí)間定性，以A柱獲得的樣品溶液峰面積與標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積比較定量。

2. 結(jié)果與分析

2.1 甲基嘧啶磷標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

將甲基嘧啶磷標(biāo)準(zhǔn)樣品在確定好的色譜條件下進(jìn)樣，以標(biāo)準(zhǔn)樣品質(zhì)量濃度作為橫坐標(biāo)，相應(yīng)濃度下的色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，甲基嘧啶磷標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=10000000x-1000000，R2=0.99875?？芍谆奏ち自谫|(zhì)量濃度為0.2～5.0 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.2 三種溶劑對(duì)特制一等面粉中農(nóng)殘?zhí)崛〉膶?duì)比

2.2.1 乙腈提取

圖1 1通道乙腈提取-特制一等粉

圖2 2通道乙腈提取-特制一等粉

由圖1，2可看出，乙腈提取特制一等粉中甲基嘧啶磷，1，2通道分別在15.5分鐘和19.4分鐘左右均沒(méi)有積峰出現(xiàn)，并且定量結(jié)果顯示甲基嘧啶磷的濃度為0μg/mL，因此沒(méi)有甲基嘧啶磷檢測(cè)出。而圖1，2在噪音信號(hào)的影響下分別在4.647分鐘，14.756分鐘，16.034分鐘出現(xiàn)極小的積峰，或特制一等粉中含有其他殘留的化合物。另外，圖2的色譜圖不平滑，有不規(guī)則的鋸齒狀，可能是由于儀器漏氣或載氣壓力不穩(wěn)定等原因。

2.2.2 甲醇提取

圖3 1通道甲醇提取-特制一等粉

圖4 2通道甲醇提取-特制一等粉

由圖3，圖4及定量結(jié)果得出，甲醇提取特制一等粉中甲基嘧啶磷時(shí)，兩個(gè)通道均未檢出甲基嘧啶磷，在噪音信號(hào)的影響下兩個(gè)譜圖中均有極小的色譜峰出現(xiàn)，且2通道譜圖出現(xiàn)小鋸齒狀，可能是由于儀器漏氣或柱子不干凈。

2.2.3 丙酮提取

圖5 1通道丙酮提取-特制一等粉

圖6 2通道丙酮提取-特制一等粉

由圖5，6可看出，丙酮提取特制一等粉中甲基嘧啶磷時(shí)，1，2通道分別在15.5分鐘和19.4分鐘均未出現(xiàn)積峰，并且定量結(jié)果顯示甲基嘧啶磷濃度為0μg/mL，因此沒(méi)有甲基嘧啶磷檢測(cè)出。兩幅色譜譜圖中均出現(xiàn)了小鋸齒狀，可能是由于儀器氣密性較差或者載氣壓力不穩(wěn)定。

通過(guò)用乙腈、甲醇、丙酮提取特制一等粉中甲基嘧啶磷均未檢出，則說(shuō)明該面粉中甲基嘧啶磷含量極少或不存在，可安全食用。

3. 結(jié)論

分別用乙腈、甲醇、丙酮三種溶劑對(duì)特制一等粉中甲基嘧啶磷進(jìn)行提取，結(jié)果表明檢測(cè)出甲基嘧啶磷的含量均為0μg/mL，說(shuō)明小麥從生長(zhǎng)在生長(zhǎng)過(guò)程中甲基嘧啶磷農(nóng)藥控制良好。