舒昆慧，張 麗，伍玲麗，司友斌，劉沁雪

（安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院，農(nóng)田生態(tài)保育與污染防控安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，合肥 230036）

銀納米粒子（AgNPs）是經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織（OECD）列出的需要優(yōu)先進(jìn)行安全性研究的納米材料之一[1]，因其獨(dú)特的廣譜抗菌性被廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)生活中。隨著含納米銀產(chǎn)品消費(fèi)量的增加，空氣、水、土壤及生物體暴露于納米銀環(huán)境的幾率增加[2]。調(diào)查顯示，2010年全球所生產(chǎn)的26萬~30.9萬t納米材料有63%~91%以垃圾填埋的方式處理，剩余的排入土壤（8%~28%）、水體（0.4%~7%）和大氣（0.1%~1.5%）[3]。模型預(yù)測(cè)納米銀在土壤和污泥中的濃度分別為0.02、4.4 mg·kg-1[4-5]，而美國(guó)環(huán)境保護(hù)署（EPA）在污泥中測(cè)得的銀離子濃度范圍為2~195 mg·kg-1，平均值為（20±22）mg·kg-1[6]?；钚晕勰嘣诒挥糜谵r(nóng)田肥料、固廢填埋或在廢物處理廠進(jìn)行焚燒的過程中會(huì)導(dǎo)致納米銀進(jìn)入陸生系統(tǒng)，同時(shí)通過雨水淋洗進(jìn)入下層土壤或者地下水中[7]。水生生物可能因廢水中出現(xiàn)納米銀顆粒受到傷害[8]，納米銀也會(huì)通過污泥農(nóng)用影響土壤環(huán)境[9]。

最近的研究表明納米顆粒在土壤中的積累可能影響微生物的活性和多樣性。比如納米氧化鋅（ZnO）具有破壞土壤中常見細(xì)菌銅綠假單胞菌的能力[10]；含Ag140μg·kg-1修飾的有機(jī)污泥能使土壤中柔枝莠竹（Microstegium vimeneum）的生物量降低 32%[11]；濃度為 32μg·kg-1和 320μg·kg-1的納米銀顯著降低土壤中微生物的生物量[12]。目前，人們對(duì)納米銀的研究主要集中在微生物毒性方面，對(duì)納米銀直接作用于土壤環(huán)境的研究很少。大多數(shù)研究表明納米銀的毒性主要來自于釋放的銀離子和其自身的特異性效應(yīng)，如氧化應(yīng)激和細(xì)菌的直接作用[13]等，納米銀的反應(yīng)性和殺菌性能則取決于其尺寸、形狀和形態(tài)[14]。銀對(duì)土壤有機(jī)物和硫醇化合物具有高親和力，可能對(duì)土壤微生物產(chǎn)生直接的影響，對(duì)富含氨基酸的土壤酶產(chǎn)生間接影響[15]。納米銀對(duì)土壤的污染可以通過生物地球化學(xué)過程表現(xiàn)出來，包括營(yíng)養(yǎng)循環(huán)和大部分微生物介導(dǎo)的過程。

土壤是一個(gè)由礦物、有機(jī)顆粒與液相、氣相結(jié)合組成的復(fù)雜多孔體系，土壤環(huán)境（包括土壤生物、有機(jī)質(zhì)等）與納米材料相互作用，改變其表面性質(zhì)，進(jìn)而影響納米材料的反應(yīng)活性、穩(wěn)定性、移動(dòng)性、生物有效性乃至毒性[16-17]。這些復(fù)雜的相互作用顯著影響了土壤生態(tài)系統(tǒng)中納米材料環(huán)境行為與環(huán)境效應(yīng)，增加了納米材料生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的不確定性，亟需更深入的研究[18]。

本文通過外源添加納米銀的方式，研究納米銀對(duì)不同性質(zhì)土壤中微生物數(shù)量、底物呼吸及不同種類酶活性的影響，并利用統(tǒng)計(jì)分析等手段進(jìn)一步探究土壤特性與納米銀毒性之間的關(guān)系，為納米銀的土壤環(huán)境影響評(píng)價(jià)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試材料

納米銀粉末，購于南京埃瑞普納米材料有限公司，純度≥99%。灰色，平均粒徑20~80 nm、比表面積2.5~15 m2·g-1、松裝密度 0.25~0.6 g·m-3，無包裹，其形態(tài)和粒徑如圖1所示。

1.1.2 土壤樣品采集

土壤樣品分別采自安徽合肥的水稻土、黃棕壤、黃褐土以及廣東肇慶的磚紅壤，采樣深度為0~20 cm。采集土樣后及時(shí)揀出可見植物殘?bào)w、根系及土壤動(dòng)物，風(fēng)干后過20目篩，充分混勻裝袋，備用，供試土壤基本理化性質(zhì)見表1。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

圖1 納米銀TEM圖（A）和粒徑分布圖（B）Figure 1 TEMimage（A）and distribution of particulate sizes（B）of silver nanoparticles

根據(jù)美國(guó)EPA調(diào)查推測(cè)施用污泥農(nóng)田土壤納米銀可累積到10 mg·kg-1，據(jù)此本試驗(yàn)設(shè)計(jì)土壤納米銀為低（10mg·kg-1）、中（50mg·kg-1）、高（100mg·kg-1）3種劑量。將土壤樣品置于28℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱中培育一周，培養(yǎng)期間稱重法調(diào)節(jié)土壤含水量，使其保持一致。培養(yǎng)結(jié)束后，采用干混法將納米銀與少量風(fēng)干土混合均勻后再加入新鮮過篩土壤，使得土壤中納米銀含量分別為10、50、100 mg·kg-1干土，不加納米銀土壤為對(duì)照，每處理3次重復(fù)。調(diào)節(jié)土壤含水量至田間最大持水量60%，置于28℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，按時(shí)取樣。

表1 供試土壤的基本理化性質(zhì)Table 1 Basic physical and chemical properties of the experimental soils

1.2.1 土壤可培養(yǎng)微生物數(shù)量測(cè)定

供試土壤培養(yǎng)7 d后，采用系列稀釋平板培養(yǎng)法對(duì)不同劑量納米銀暴露土壤樣品分別進(jìn)行細(xì)菌、真菌、放線菌數(shù)量的測(cè)定，培養(yǎng)基分別為牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、馬丁氏培養(yǎng)基及改良高氏一號(hào)培養(yǎng)基。

1.2.2 土壤微生物多樣性測(cè)定

稱取0.5 g培養(yǎng)7 d含不同劑量納米銀的黃褐土，按照FastDNA SPINKit for soil試劑盒進(jìn)行土壤微生物總DNA的提取，利用通用引物（515F-907R）擴(kuò)增土壤微生物DNA的16SrRNA基因，采用Illumina MiSeq platform測(cè)序平臺(tái)對(duì)V4區(qū)進(jìn)行測(cè)序[19-20]。

1.2.3 土壤誘導(dǎo)呼吸測(cè)定

稱取20.0 g（干土）不同劑量納米銀處理7 d的土壤樣品，分別放入250 mL錐形瓶中，加入葡萄糖粉劑（6 mg·g-1干土），反應(yīng)30 min后用密封膠將錐形瓶密封，置于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 h。培養(yǎng)結(jié)束后用注射器抽取5 mL氣體樣品采用氣相色譜儀測(cè)定CO2含量。土壤誘導(dǎo)呼吸量為單位時(shí)間（h）內(nèi)單位烘干土壤（g）釋放的CO2（μL）含量[21]。

1.2.4 土壤酶活性測(cè)定

供試土壤培養(yǎng)7 d后取樣測(cè)定土壤脲酶、蔗糖酶、熒光素二乙酸酯酶（FDA酶）、過氧化氫酶活性，測(cè)定方法參見《土壤與環(huán)境微生物研究法》[21]。土壤脲酶測(cè)定采用苯酚鈉-次氯酸鈉比色法，其活性以每克土壤24 h酶解尿素產(chǎn)生銨態(tài)氮（NH+4-N）的毫克數(shù)來表示；FDA酶采用比色法測(cè)定，其活性以每克土20 min內(nèi)生成的熒光素表示；蔗糖酶采用二硝基水楊酸比色法測(cè)定，其活性以37℃下每克土24 h后的葡萄糖量表示；過氧化氫酶采用高錳酸鉀滴定法測(cè)定，其活性以每克土30 min分解H2O2的毫克數(shù)表示。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

利用Excel 2007處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，SPSS 18.0分析數(shù)據(jù)，以Canoco 4.5軟件完成變量之間的PCA相關(guān)性分析，采用Origin 8.5繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 納米銀對(duì)土壤可培養(yǎng)微生物數(shù)量的影響

納米銀對(duì)不同性質(zhì)土壤中可培養(yǎng)微生物數(shù)量產(chǎn)生不同程度影響（圖2）。水稻土中細(xì)菌數(shù)量在低劑量（10 mg·kg-1）納米銀處理下顯著降低，中高劑量（50、100 mg·kg-1）處理顯著低于低劑量處理，但不同劑量納米銀對(duì)放線菌、真菌的影響均不顯著。低劑量納米銀對(duì)黃棕壤可培養(yǎng)微生物影響較小，中高劑量下細(xì)菌、放線菌、真菌數(shù)量顯著降低。不同劑量納米銀顯著抑制黃褐土中可培養(yǎng)微生物的生長(zhǎng)，隨著納米銀劑量的增加抑制作用也逐漸增強(qiáng)。低劑量納米處理下，黃褐土中放線菌、真菌數(shù)量分別減少86.8%和58.3%，而中高劑量下細(xì)菌、放線菌、真菌數(shù)量都減少80%以上，可見黃褐土中微生物對(duì)納米銀極為敏感。納米銀對(duì)磚紅壤的影響與黃褐土相似，不同的是納米銀對(duì)磚紅壤微生物的抑制強(qiáng)度略低于黃褐土。

從結(jié)果可以看出水稻土中對(duì)納米銀最敏感的是細(xì)菌，黃棕壤中微生物對(duì)納米銀有一定的耐受力，高劑量下才會(huì)有所減少，黃褐土、磚紅壤中微生物對(duì)納米銀都很敏感，尤其是高劑量納米銀處理下，微生物數(shù)量出現(xiàn)大幅降低。因此，供試4種土壤可培養(yǎng)微生物對(duì)納米銀的敏感程度為黃褐土>磚紅壤>水稻土>黃棕壤。

2.2 納米銀對(duì)土壤微生物多樣性的影響

通過對(duì)黃褐土微生物16SrRNA基因MiSeq高通量測(cè)序，得到微生物門水平的相對(duì)豐度。不同劑量納米銀對(duì)黃褐土微生物主要門類沒有明顯影響，但對(duì)微生物群落豐度產(chǎn)生影響（圖3）。納米銀暴露的土壤中變形菌門（Proteobacteria，25.4%~35.9%）、酸桿菌門（Acidobacteria，23.7%~30.1%）和放線菌門（Actinobacteria，10.3%~14.1%）為土壤的主導(dǎo)微生物門類，約占所有微生物總豐度的60%以上。其中螺旋菌門（Nitrospirae，1.6%~2.2%）、厚壁菌門（Firmicutes，3.7%~6.6%）、藍(lán)菌門（Cyanobacteria，0.4%~2.6%）、放線菌門（Actinobacteria，10.3%~14.1%）、酸桿菌門（Acidobacteria，23.7%~30.1%）對(duì)納米銀敏感度較高，隨著納米銀劑量增加群落豐度下降。土壤納米銀含量為50 mg·kg-1時(shí)，土壤中酸桿菌門群落相較于對(duì)照豐度下降了25.1%，而變形菌門群落相較于對(duì)照組豐度上升了41.3%。浮霉菌門（Planctomycetes）和芽孢單菌門（Gemmatimonadetes）群落豐度隨納米銀含量增加而上升。同時(shí)，綠彎菌門（Chloroflexi）和擬桿菌門（Bacteroidetes）在不同納米銀含量土壤中群落豐度變化不大。

圖2 納米銀對(duì)土壤微生物數(shù)量的影響gNPs on soil microbial quantity

圖3 納米銀處理對(duì)黃褐土微生物群落結(jié)構(gòu)的影響Figure3 Effect of different contents AgNPstreatment on microflora in yellowcinnamon soils

2.3 納米銀對(duì)土壤呼吸的影響

土壤誘導(dǎo)呼吸量可以反映出土壤生物量的大?。▓D4）。通過對(duì)納米銀暴露7 d的土壤進(jìn)行底物誘導(dǎo)呼吸，發(fā)現(xiàn)4種土壤中納米銀處理組呼吸強(qiáng)度均低于對(duì)照組，并且隨著納米銀劑量的增加，呼吸作用逐漸減弱。低劑量納米銀處理下，土壤呼吸作用沒有受到顯著影響，中高劑量納米銀顯著抑制土壤呼吸，高劑量下水稻土、黃棕壤、黃褐土、磚紅壤呼吸作用分別降低23.8%、15.9%、29.3%、14.5%?？梢姡{米銀的加入會(huì)減少土壤生物量，導(dǎo)致土壤微生物過程減弱，這與高通量測(cè)序的結(jié)果相一致。

2.4 納米銀對(duì)土壤酶活性的影響

添加不同劑量納米銀對(duì)4種土壤酶活性產(chǎn)生不同程度的影響（圖5）。低劑量納米銀處理下，水稻土的脲酶、FDA酶，黃棕壤的蔗糖酶活性有明顯的升高；黃褐土、磚紅壤酶活性降低。中劑量納米銀處理下，4種土壤脲酶、蔗糖酶活性顯著降低，水稻土和黃棕壤的FDA酶、過氧化氫酶，黃褐土FDA酶活性受到輕微抑制，未達(dá)到顯著影響。高劑量納米銀處理下，水稻土和黃棕壤的脲酶、蔗糖酶，黃褐土脲酶、蔗糖酶、過氧化氫酶，以及磚紅壤酶活性均顯著降低。說明納米銀的添加會(huì)影響土壤微生物酶過程，并且這種影響與納米銀的劑量正相關(guān)。

圖4 納米銀對(duì)土壤誘導(dǎo)呼吸量的影響Figure 4 Effect of AgNPs on substrate induced respiration in soils

圖5 不同納米銀處理下土壤酶活性Figure 5 Effect of different contents AgNPson enzyme activities in soils

此外，納米銀對(duì)不同種類酶的影響也不相同，脲酶對(duì)納米銀最為敏感，其次是蔗糖酶。高劑量下土壤脲酶活性降低41.7%~54.0%，蔗糖酶活性降低24.5%~40.8%。雖然磚紅壤FDA酶在高劑量納米銀下活性降低27.8%，但水稻土、黃棕壤、黃褐土中酶活性抑制均不顯著（降低4.5%~7.2%）。納米銀對(duì)過氧化氫酶的影響在黃褐土、磚紅壤中較為顯著，在水稻土、黃棕壤中影響較小。

2.5 土壤環(huán)境因子與微生物性狀因子之間的相關(guān)性分析

加入納米銀后土壤理化性質(zhì)沒有發(fā)生明顯變化，但納米銀在不同土壤中的微生物毒性卻有著較大差異。中劑量（50 mg·kg-1）納米銀處理下土壤各微生物性狀因子抑制率（與對(duì)照相比）與環(huán)境因子進(jìn)行相關(guān)性分析，由表2可知納米銀對(duì)呼吸作用的抑制與土壤pH正相關(guān)，對(duì)脲酶、蔗糖酶的抑制與土壤pH值、CEC正相關(guān)，對(duì)FDA酶、過氧化氫酶及真菌的抑制與土壤有機(jī)質(zhì)、砂粒含量有一定的相關(guān)性，而對(duì)細(xì)菌、放線菌的抑制與環(huán)境因子相關(guān)性不高。土壤黏粒含量與各微生物性狀因子之間的相關(guān)性不高，可能是因?yàn)楣┰囃寥鲤ち：枯^為接近，在分析時(shí)無法顯示出較大的差別。

環(huán)境因子與微生物性狀因子主成分分析如圖6所示，軸1和軸2的變量解釋因子為96.5%，土壤有機(jī)質(zhì)、砂粒在軸1方向上與真菌、FDA酶、過氧化氫酶等變量相關(guān)性較高；土壤pH、CEC與脲酶、蔗糖酶相關(guān)性高，這與表2結(jié)果相似。說明納米銀在有機(jī)質(zhì)、砂粒含量高的土壤中對(duì)FDA酶、過氧化氫酶的毒性作用大，而在pH、離子強(qiáng)度大的土壤中對(duì)脲酶、蔗糖酶及真菌的毒性大。納米銀對(duì)土壤呼吸作用的影響主要與土壤pH值相關(guān)，在pH值高的土壤中，納米銀對(duì)生物量的影響較大。

圖6 環(huán)境因子-微生物性狀因子的PCA分析Figure6 Principal component analysisof environmental factors and microbial traitsfactors

3 討論

土壤微生物是維持土壤肥力和作物生產(chǎn)的關(guān)鍵因素[22]，土壤生境的改變會(huì)影響微生物數(shù)量及群落結(jié)構(gòu)的組成[23]。平板計(jì)數(shù)和底物誘導(dǎo)呼吸結(jié)果表明納米銀對(duì)土壤微生物的生長(zhǎng)繁殖具有顯著抑制作用。納米銀暴露下土壤細(xì)菌、放線菌、真菌數(shù)量顯著降低，呼吸作用受到抑制，并且這種抑制在低劑量（10 mg·kg-1）下就有所表現(xiàn)，隨著納米銀劑量的增加抑制作用逐漸增強(qiáng)。研究發(fā)現(xiàn)10 mg·kg-1納米銀可以顯著降低土壤真菌的菌落數(shù)，100 mg·kg-1會(huì)顯著抑制土壤細(xì)菌及放線菌的數(shù)量[24]。當(dāng)納米銀含量?jī)H為0.14 mg·kg-1時(shí)，污泥中微生物生物量與細(xì)菌群落組成顯著減少[11]；土壤中納米銀濃度高于20 mg·kg-1時(shí)，土壤呼吸被明顯抑制，且濃度越高抑制作用越大[25]。納米銀能夠破壞細(xì)菌的細(xì)胞膜，并聚集在細(xì)胞膜中，增加細(xì)胞通透性，導(dǎo)致細(xì)胞死亡[26]；進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部的納米銀通過濃縮DNA使之失去復(fù)制能力，引起DNA降解從而抑制細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖[27]。

表2 環(huán)境因子與微生物性狀因子相關(guān)性Table 2 Correlation between environmental factorsand microbial traitsfactors

納米銀進(jìn)入土壤后增加了細(xì)菌的豐富度但并沒有改變土壤中主導(dǎo)微生物群落（變形菌門和酸桿菌門）。除主導(dǎo)細(xì)菌群落外，螺旋菌門、厚壁菌門、藍(lán)菌門等隨納米銀劑量增加群落豐度下降，浮霉菌門和芽孢單菌門隨納米銀劑量增加群落豐度上升，綠彎菌門和擬桿菌門隨納米銀劑量增加群落豐度無明顯差異。說明土壤生境的變化不會(huì)改變主導(dǎo)細(xì)菌群落，但會(huì)引起群落豐度的變化，且不同細(xì)菌門類對(duì)納米銀的敏感程度不一樣。Kumar等[28]發(fā)現(xiàn)，納米銀對(duì)土壤微生物群落有較高毒性，并可改變?nèi)郝浣M成豐度，特別是植物伴生菌；Yang等[29]研究表明，納米銀會(huì)對(duì)活性污泥的微生物群落產(chǎn)生抑制作用，對(duì)硝化細(xì)菌群落的抑制尤為顯著。

不同土壤中不同種類酶對(duì)納米銀的響應(yīng)不同，但整體上土壤酶活性隨著納米銀劑量的增加而降低。在測(cè)定的4種酶中，納米銀對(duì)脲酶的抑制最為顯著，對(duì)蔗糖酶、FDA酶、過氧化氫酶活性也有一定程度的抑制，這與相關(guān)研究結(jié)果相似。Shin等[30]研究了納米銀對(duì)土壤6種酶活性的影響，發(fā)現(xiàn)脲酶對(duì)納米銀最敏感，而納米銀對(duì)FDA酶等影響較小。王秋雙等[24]研究顯示納米銀處理顯著抑制土壤脲酶、脫氫酶活性，卻對(duì)土壤過氧化氫酶與磷酸酶活性基本無影響。納米金屬的毒性可能來自于其本身，通過滅活蛋白質(zhì)組或阻斷酶上的結(jié)合位點(diǎn)來抑制酶活性[31]，也可能是因其粒徑小，易進(jìn)入微生物內(nèi)部產(chǎn)生氧化應(yīng)激，導(dǎo)致生物死亡。ROS（活性氧簇）的累積可能是導(dǎo)致脲酶、磷酸酶活性降低的主要原因[32]，而納米顆粒本身或其溶解的離子對(duì)于土壤生態(tài)系統(tǒng)是明顯有毒的[33]。

納米銀對(duì)土壤微生物的毒性與土壤理化性質(zhì)有一定的關(guān)系，土壤pH、有機(jī)質(zhì)含量、黏粒分布等都會(huì)影響納米銀在土壤中的聚合狀態(tài)和穩(wěn)定性。研究發(fā)現(xiàn)納米ZnO的毒性是由離子釋放導(dǎo)致的，納米ZnO對(duì)念珠菌的毒性與土壤pH有關(guān)，在酸性土壤中毒性更強(qiáng)[34]。也有研究表明納米銀在酸性土壤中的毒性要強(qiáng)于堿性土壤[35]。這可能是因?yàn)樗嵝酝寥辣砻娴碾娯?fù)性低，對(duì)帶負(fù)電的納米銀靜電排斥力更小[36]，易與納米銀結(jié)合，從而降低了納米銀在土壤中的遷移性，毒性作用更持久。此外，土壤天然有機(jī)質(zhì)的表面吸附能夠防止納米銀的氧化和銀離子釋放，腐植酸、富里酸能將氧化產(chǎn)物轉(zhuǎn)化成金屬從而抑制納米銀的溶解[37]。但也有研究發(fā)現(xiàn)用有機(jī)質(zhì)修飾和未用有機(jī)質(zhì)修飾的土壤中溶解Ag的濃度是相似的[38]，而土壤質(zhì)地越細(xì)，納米材料的保留率會(huì)提高，其生物有效性會(huì)降低[39]。因此，納米銀進(jìn)入土壤環(huán)境后不僅形態(tài)、大小會(huì)發(fā)生改變，毒性作用也會(huì)受到影響，土壤性質(zhì)則可能是其毒性變化的主要原因。

雖然本研究對(duì)納米銀在不同土壤中微生物毒性進(jìn)行了探討，對(duì)納米銀的微生物毒性大小進(jìn)行了測(cè)定，但是關(guān)于納米銀在土壤環(huán)境中的轉(zhuǎn)化及毒性作用過程尚不清楚，有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

（1）納米銀能抑制土壤細(xì)菌、放線菌的數(shù)量，對(duì)真菌也有一定的抑制作用，劑量越高，抑制作用越明顯。

（2）納米銀抑制土壤微生物呼吸作用，使土壤生物量減少。

（3）納米銀對(duì)不同土壤中酶活性的影響存在顯著差異。納米銀顯著抑制黃褐土、磚紅壤中蔗糖酶、脲酶、FDA酶、過氧化氫酶活性；對(duì)水稻土、黃棕壤中脲酶影響較大，蔗糖酶、FDA酶、過氧化氫酶活性變化較小。

（4）納米銀毒性與土壤性質(zhì)相關(guān)。納米銀對(duì)真菌、FDA酶、過氧化氫酶的抑制與土壤有機(jī)質(zhì)、砂粒含量正相關(guān)；納米銀對(duì)脲酶、蔗糖酶、呼吸作用的抑制與土壤pH值、陽離子交換量正相關(guān)。

[1]Organization for Economic Co-operation and Development（OECD）.Publications in the series on the safety of manufactured nanomaterials no.27：List of manufactured nanomaterials and list of endpoints for phase one of the sponsorship programme for the testing of manufactured nanomaterials[S].Paris：OECDPublishing,2010.

[2]Ma X,Geiser L J,Deng Y,et al.Interactions between engineered nanoparticles（ENPs）and plants：Phytotoxicity,uptake and accumulation[J].Scienceof the Total Environment,2010,408（16）：3053-3061.

[3]Keller A A,Mcferran S,Lazareva A,et al.Global life cycle releases of engineered nanomaterials[J].Journal of Nanoparticle Research,2013,15（6）：1692.

[4]Mueller NC,Nowack B.Exposuremodelingof engineered nanoparticles in the environment[J].Environmental Science&Technology,2008,42（12）：4447-4453.

[5]Gottschalk F,Sonderer T,Scholz R W,et al.Modeled environmental concentrations of engineered nanomaterials（TiO2,ZnO,Ag,CNT,Fullerenes）for different regions[J].Environmental Science&Technology,2009,43（24）：9216-9222.

[6]United States Environmental Protection Agency（US EPA）.Targeted national sewage sludge survey statistical analysis[R].Washington DC：USEPA,2009.

[7]Blaser SA,Scheringer M,Macleod M,et al.Estimation of cumulative aquatic exposure and risk due to silver：Contribution of nano-functionalized plastics and textiles[J].Science of the Total Environment,2008,390（2/3）：396-409.

[8]Nowack B,Ranville JF,Diamond S,et al.Potential scenarios for nanomaterial release and subsequent alteration in the environment[J].Environmental Toxicology&Chemistry,2012,31（1）：50-59.

[9]Schlich K,Klawonn T,Terytze K,et al.Hazard assessment of a silver nanoparticle in soil applied via sewage sludge[J].Environmental Sciences Europe,2013,25（1）：1-14.

[10]Vos P,Garrity G,Jones D,et al.Bergey′smanual of systematic bacteriology[M].Volume3.New York：Springer Verlag,2009.

[11]Colman BP,Arnaout CL,Anciaux S,et al.Low concentrationsof silver nanoparticlesin biosolids cause adverse ecosystemresponses under realistic field scenario[J].PLoSOne,2013,8（2）：e57189.

[12]H?nsch M,Emmerling C.Effects of silver nanoparticles on the microbiota and enzyme activity in soil[J].Journal of Plant Nutrition&Soil Science,2010,173（4）：554-558.

[13]Morones JR,Elechiguerra JL,Camacho A,et al.The bactericidal effect of silver nanoparticles[J].Nanotechnology,2005,16（10）：2346-2353.

[14]Sotiriou GA,Pratsinis SE.Antibacterial activity of nanosilver ionsand particles[J].Environment Science&Technology,2010,44（14）：5649-5654.

[15]Wigginton N S,De Titta A,Piccapietra F,et al.Binding of silver nanoparticles to bacterial proteins depends on surface modifications and inhibits enzymatic activity[J].Environment Science&Technology,2010,44（6）：2163-2168.

[16]Benmoshe T,Dror I,Berkowitz B.Transport of metal oxide nanoparticles in saturated porous media[J].Chemosphere,2011,81（3）：387-393.

[17]Fang J,Shan X Q,Wen B.Stability of titania nanoparticles in soil suspensions and transport in saturated homogeneous soil columns[J].Environment Pollution,2009,157（4）：1101-1109.

[18]周東美.納米Ag粒子在我國(guó)主要類型土壤中的遷移轉(zhuǎn)化過程與環(huán)境效應(yīng)[J].環(huán)境化學(xué),2015,34（4）：605-613.ZHOU Dong-mei.Transport and transformation of nanoAg particle in soils and its environmental effects[J].Environmental Chemistry,2015,34（4）：605-613.

[19]Marteinsson V T,Runarsson A,Stefansson A,et al.Microbial communities in the subglacial waters of the Vatnajokull ice cap,Iceland[J].ISMEJournal,2013,7（2）：427-437.

[20]Caporaso JG,Lauber CL,Walters WA,et al.Ultra-high-throughput microbial community analysis on the Illumina HiSeq and MiSeq platforms[J].ISMEJournal,2012,6（8）：1621-1624.

[21]李振高,駱永明,滕 應(yīng).土壤與環(huán)境微生物研究法[M].北京：科學(xué)出版社,2008.LI Zhen-gao,LUO Yong-ming,TENG Ying.Soil and environmental microbiological research[M].Beijing：Science Press,2008.

[22]Carbone S,Vittori A L,Gaggia F,et al.Bioavailability and biological effect of engineered silver nanoparticles in a forest soil[J].Journal of Hazardous Materials,2014,280：89-96.

[23]Hansel CM,Fendorf S,Jardine PM,et al.Changesin bacterial and archaeal community structureand functional diversity along a geochemically variable soil profile[J].Applied and Environmental Microbiology,2008,74（5）：1620-1633.

[24]王秋雙,戚興超,申天琳,等.納米銀與石墨烯對(duì)土壤微生物及土壤酶的影響[J].環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào),2017,37（8）：3149-3157.WANG Qiu-shuang,QI Xing-chao,SHEN Tian-lin,et al.Effect of silver nanoparticles and graphene on soil microorganisms and enzyme activities[J].Acta Scientiae Circumstantiae,2017,37（8）：3149-3157.

[25]Rahmatpour S,Shirvani M,Mosaddeghi M R,et al.Dose-response effects of silver nanoparticles and silver nitrate on microbial and enzyme activitiesin calcareoussoils[J].Geoderma,2017,285：313-322.

[26]Sondi I,Salopek-Sondi B.Silver nanoparticlesas antimicrobial agent：Acase study on E.coli asamodel for gram-negativebacteria[J].Journal of Colloid&Interface Science,2004,275（1）：177-182.

[27]謝小保,李文茹,曾海燕,等.納米銀對(duì)大腸桿菌的抗菌作用及其機(jī)制[J].材料工程,2008（10）：106-109.XIE Xiao-bao,LIWen-ru,ZENGHai-yan,et al.Study of antimicrobial activity and mechanismof silver nanoparticleson Escherichia coli[J].Materials Engineering,2008（10）：106-109.

[28]Kumar N,Shah V,Walker V K.Perturbation of an Arctic soil microbial community by metal nanoparticles[J].Journal of Hazardous Materials,2011,190（1/2/3）：816-822.

[29]Yang Y,Quensen J,Mathieu J,et al.Pyrosequencing reveals higher impact of silver nanoparticles than Ag+on the microbial community structureof activated sludge[J].Water Research,2014,48：317-325.

[30]Shin Y J,Kwak JI,An Y J.Evidence for the inhibitory effects of silver nanoparticles on the activities of soil exoenzymes[J].Chemosphere,2012,88（4）：524-529.

[31]Xu C,Peng C,Sun L J,et al.Distinctive effects of TiO2and CuO nanoparticleson soil microbesand their community structuresin flooded paddy soil[J].Soil Biology&Biochemistry,2015,86：24-33.

[32]Pan B,Xing BS.Manufactured nanoparticlesand their sorption of organic chemicals[J].Advancesin Agronomy,2010,108（10）：137-181.

[33]Du WC,Sun Y Y,Ji R,et al.TiO2and ZnOnanoparticles negatively affect wheat growth and soil enzyme activities in agricultural soil[J].Journal of Environmental Monitoring,2011,13（4）：822-828.

[34]Waalewijn-Kool PL,Ortiz MD,Lofts S,et al.The effect of pH on the toxicity of zinc oxide nanoparticles to Folsomia candida in amended field soil[J].Environmental Toxicology&Chemistry,2013,32（10）：2349-2355.

[35]Schlich K,Hund-Rinke K.Influence of soil properties on the effect of silver nanomaterials on microbial activity in fivesoils[J].Environmental Pollution,2015,196：321-330.

[36]杜 歡,王玉軍,李程程,等.納米Ag在四種不同性質(zhì)土壤上的吸附行為研究[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào),2015,34（6）：1069-1075.DU Huan,WANG Yu-jun,LI Cheng-cheng,et al.Sorption of silver nanoparticles on four soils with different characteristics[J].Journal of Agro-Environment Science,2015,34（6）：1069-1075.

[37]Liu J,Hurt RH.Ion release kinetics and particle persistence in aqueousnano-silver colloids[J].Environmental Science&Technology,2010,44（6）：2169-2175.

[38]Peyrot C,Wilkinson K J,Desrosiers M,et al.Effects of silver nanoparticles on soil enzyme activities with and without added organic matter[J].Environmental Toxicology&Chemistry,2014,33（1）：115-125.

[39]Hund-Rinke K.Fateand bioavailability of engineered nanoparticles in soils：A review[J].Critical Reviews in Environmental Science&Technology,2014,44（24）：2720-2764.