陳 敏 ，張 瑾 ，2，3*，董欣琪 ，班龍科 ，卞志強(qiáng)

（1.安徽建筑大學(xué)環(huán)境與能源工程學(xué)院，安徽省水污染控制與廢水資源化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，合肥 230601；2.安徽建筑大學(xué)安徽省綠色建筑先進(jìn)技術(shù)研究院，合肥 230601；3.清華大學(xué)新興有機(jī)污染物控制北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100084）

抗生素是現(xiàn)代臨床應(yīng)用最廣泛的藥物，在控制感染傳播、治療感染性疾病過(guò)程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。抗生素不僅應(yīng)用于人類疾病治療，還用于畜牧業(yè)和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。在家畜飼養(yǎng)中，除了用于治療動(dòng)物的傳染病，還用作常規(guī)飼料添加劑[1]?？股氐拇罅可a(chǎn)和應(yīng)用，已使其成為水環(huán)境中檢測(cè)到最多的新型污染物[2-4]。調(diào)查顯示，全球許多地區(qū)的土壤和水體中都檢測(cè)到抗生素藥物，且種類較多，濃度呈升高趨勢(shì)[5]。進(jìn)入環(huán)境中的抗生素，可改變環(huán)境中微生物種類，破壞生態(tài)系統(tǒng)的平衡[6]，也可誘導(dǎo)出抗藥菌株[7]，通過(guò)食物等途徑進(jìn)入人體，對(duì)人類健康產(chǎn)生危害[8-9]。

重金屬是環(huán)境中典型的污染物之一，微量濃度的重金屬就可產(chǎn)生毒性作用[10-11]。因具有富集性和不易降解性，且對(duì)環(huán)境中的生物甚至人類健康產(chǎn)生有害影響，重金屬污染已成為最難解決的環(huán)境問(wèn)題之一，成了人們關(guān)注的熱點(diǎn)[12]。抗生素和重金屬這兩種環(huán)境污染物，在環(huán)境中經(jīng)常同時(shí)被檢測(cè)到[13-14]。水體中的重金屬和抗生素可能會(huì)以各種形態(tài)和濃度共存，形成各種各樣的混合污染物[15-16]?；旌衔廴疚锂a(chǎn)生的累積毒性與相互作用可能會(huì)對(duì)生態(tài)環(huán)境、甚至生物健康產(chǎn)生更大危害[17-19]，如張雨[20]和王瑞等[21]研究發(fā)現(xiàn)抗生素-金屬?gòu)?fù)合物之間的絡(luò)合作用會(huì)改變抗生素的環(huán)境行為和生態(tài)毒理作用，絡(luò)合物的毒性最強(qiáng)。因此，開展抗生素與重金屬的聯(lián)合毒性作用研究具有重要的實(shí)際環(huán)境意義。

越來(lái)越多的研究表明，除濃度外，暴露時(shí)間是影響污染物毒性的另一個(gè)重要因素，且不同的污染物隨時(shí)間可能有不同的毒性變化規(guī)律[22-24]。如氨基糖苷類抗生素及其混合物對(duì)青?；【╒ibrio qinghaisiense sp.-Q67，Q67）的毒性隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增加，而有的污染物毒性卻隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸減弱[25-28]。因此，要考察污染物的毒性，必須全面系統(tǒng)采集這些污染物在不同暴露時(shí)間對(duì)暴露生物的毒性數(shù)據(jù)才能揭示污染物間發(fā)生毒性相互作用（協(xié)同或拮抗作用）的機(jī)制，才能客觀準(zhǔn)確評(píng)價(jià)環(huán)境污染物的潛在風(fēng)險(xiǎn)[29-30]。目前針對(duì)重金屬或抗生素在某一特定暴露時(shí)間的單一毒性效應(yīng)的研究已有報(bào)道[31-32]，但關(guān)于二者復(fù)合污染的聯(lián)合毒性相互作用的研究，尤其關(guān)于抗生素與重金屬的多元污染物聯(lián)合毒性相互作用隨時(shí)間變化的動(dòng)態(tài)規(guī)律的研究非常有限[33-35]。

因此，本文以抗生素和重金屬為研究對(duì)象，以蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidosa）為檢測(cè)生物，采用均勻設(shè)計(jì)射線法設(shè)計(jì)抗生素與重金屬的多元（九元）混合污染物體系，應(yīng)用已建立的時(shí)間依賴微板毒性分析法（t-MTA）系統(tǒng)測(cè)定抗生素和重金屬及其混合污染物體系對(duì)蛋白核小球藻的生長(zhǎng)抑制率[36]，運(yùn)用經(jīng)典參考模型濃度加和（Concentration addtion，CA）分析混合物在不同暴露時(shí)間的毒性相互作用（協(xié)同或拮抗作用），并揭示抗生素與重金屬聯(lián)合毒性相互作用變化規(guī)律，為科學(xué)評(píng)價(jià)重金屬以及抗生素可能產(chǎn)生的風(fēng)險(xiǎn)提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

5種抗生素分別為硫酸阿米卡星（Amikacin sulfate，AMI）、硫酸慶大霉素（Gentamycin sulfate，GEN）、硫酸卡那霉素（Kanamycin sulfate，KAN）、硫酸巴龍霉素（Paromomycin sulfate，PAR）、妥布霉素（Tobramycin，TOB），購(gòu)自上海原葉生物科技有限公司，理化性質(zhì)列于表1中。4種重金屬分別為氯化鎘、五水合硫酸銅、四水合氯化錳、七水合硫酸鋅，均為分析純，均購(gòu)置于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，理化性質(zhì)列于表1中。

重金屬和抗生素的儲(chǔ)備液均用超純水（Reverses Osmosis）配制，并于4℃冰箱中保存、備用。

主要儀器：Bio-RAD 680型酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-RAD伯樂(lè)儀器有限公司），超凈工作臺(tái)（三發(fā)儀器有限公司），YX280A手提式壓力蒸汽滅菌器（上海三申醫(yī)療器械有限公司），MGC-250智能型光照培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司），F(xiàn)A1004型五位電子天平（天津天馬衡基儀器有限公司）。

表1 實(shí)驗(yàn)用抗生素與重金屬的理化性質(zhì)Table 1 Physi-chemical propertiesof antibiotics and heavy metals

1.2 藻種與培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)藻種：蛋白核小球藻購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)淡水藻種庫(kù)（FACHB），藻的培養(yǎng)基配制及其培養(yǎng)過(guò)程參見文獻(xiàn)[24]和[32]。

1.3 混合物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用均勻設(shè)計(jì)射線法（UD-Ray）[37]設(shè)計(jì)抗生素與重金屬的混合物體系，共安排10條九元混合物射線（R1~R10），每條混合物射線包含的抗生素和重金屬組分和各組分的濃度配比（pi）及每條混合物射線的最高和最低設(shè)定濃度見表2。

表2 九元混合物體系中10條射線的組分及其所占濃度比（pi）Table2 Thecomponentsand their concentration ratiostogether with thehighesand lowest experimental concentration of ten raysin nine-component mixturesystem

1.4 微板設(shè)計(jì)與時(shí)間毒性測(cè)試

微板設(shè)計(jì)與毒性測(cè)試過(guò)程參考文獻(xiàn)[24]：在96孔透明微板（Corning，9018）的四周24孔中加入200μL蒸餾水以防止邊緣效應(yīng)，于2、6、7、11列的24孔中加入100μL的蒸餾水，在余下孔加入事先配好的12個(gè)不同濃度的污染物儲(chǔ)備液100μL，然后加入事先培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期的蛋白核小球藻溶液100μL，最后加透明蓋，然后將微孔板置于溫度為25℃、照度為5000 lx、光暗比14 h∶10 h的光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別在暴露時(shí)間 t=0、12、24、48、72 h 和 96 h 時(shí)將微板放入酶標(biāo)儀中，測(cè)定690 nm波長(zhǎng)下的光密度（OD690）。針對(duì)每一個(gè)毒物，上述微板實(shí)驗(yàn)操作至少重復(fù)3遍。

小球藻生長(zhǎng)抑制率的計(jì)算公式如下：

式中：Ei，j為污染物濃度ci（i=1、2、3、…、12）在暴露時(shí)間終點(diǎn)j（j=0、12、24、48、72、96 h）對(duì)小球藻的生長(zhǎng)速率抑制率；μi，j為微板中污染物濃度ci處理孔中小球藻在暴露時(shí)間終點(diǎn)j時(shí)的平均生長(zhǎng)速率；μ0，j為微板中空白藻在暴露時(shí)間終點(diǎn)j（j=0、12、24、48、72、96 h）的平均生長(zhǎng)速率。μj為微板孔中小球藻在某一暴露時(shí)間j（j=0、12、24、48、72、96 h）的平均生長(zhǎng)速率；OD690，n為微板孔中小球藻在第n個(gè)暴露時(shí)間點(diǎn)（n=0、1、2、3、4、5、6）的平均吸光光度值；OD690，n-1為微板孔中小球藻在第n-1個(gè)暴露時(shí)間點(diǎn)的平均吸光光度值。

1.5 時(shí)間毒性數(shù)據(jù)擬合

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理方法參見文獻(xiàn)[24]。將獲得的在不同暴露時(shí)間污染物的濃度-抑制率數(shù)據(jù)運(yùn)用兩參數(shù)Logit函數(shù)進(jìn)行非線模擬合。

式中：E表示效應(yīng)（0≤E≤1）；c表示單個(gè)化合物或者混合物濃度；α和β都是參數(shù)。

由于毒性實(shí)驗(yàn)的固有誤差，評(píng)估化合物或混合物毒性時(shí)必須考察置信區(qū)間的范圍，特別是觀測(cè)值的置信區(qū)間（OCI）。OCI主要用于表征實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的不確定度。本論文中，OCI是基于實(shí)測(cè)毒性效應(yīng)，在顯著性水平為0.05情況下，化合物實(shí)驗(yàn)濃度的可信范圍，即化合物產(chǎn)生某一效應(yīng)x%時(shí)的95%OCI。并且本文是在整個(gè)濃度-效應(yīng)區(qū)域內(nèi)建立整條OCI曲線。

1.6 混合物毒性相互作用分析

混合物毒性相互作用常常是參考某一標(biāo)準(zhǔn)加和參考模型來(lái)定義的，濃度加和（CA）模型能用來(lái)評(píng)估大多數(shù)混合物的毒性[38-39]。

CA模型的公式表達(dá)為：

式中：ci表示混合物中產(chǎn)生某一效應(yīng)x%時(shí)組分i的濃度；ECx，i表示混合物中第i個(gè)化合物單獨(dú)存在時(shí)所產(chǎn)生的效應(yīng)與混合物總效應(yīng)x%相同時(shí)的濃度。當(dāng)觀測(cè)毒性等于、大于或小于參考模型預(yù)測(cè)毒性時(shí)，分別稱混合物發(fā)生了加和作用、協(xié)同作用和拮抗作用。

2 結(jié)果與討論

2.1 抗生素與重金屬對(duì)蛋白核小球藻的時(shí)間毒性

不同污染物的毒性隨暴露時(shí)間具有不同的變化規(guī)律[40-41]。圖1是5種抗生素和4種重金屬對(duì)蛋白核小球藻在不同暴露時(shí)間的濃度-效應(yīng)曲線（CRC）。從圖1可以看出，抗生素和重金屬對(duì)小球藻的毒性均隨著暴露時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增強(qiáng)，呈現(xiàn)出時(shí)間依賴性。不同物質(zhì)對(duì)小球藻毒性隨時(shí)間變化的規(guī)律不同，如AMI、GEN、KAN、PAR、Cd、Mn 和 Zn 均是從 0 時(shí)刻的沒(méi)有明顯毒性逐漸增強(qiáng)，但每個(gè)物質(zhì)毒性增強(qiáng)的速率不同，在各個(gè)暴露時(shí)間點(diǎn)，幾個(gè)物質(zhì)的毒性不同，如在96 h，PAR的最大抑制率超過(guò)了90%，AMI和GEN的最大抑制率超過(guò)了80%，KAN、Mn和Zn的最大抑制率約60%。TOB在前三個(gè)時(shí)間點(diǎn)幾乎沒(méi)有毒性，72 h后在高濃度才有明顯毒性，96 h的最高抑制率迅速達(dá)到了70%。而Cd和Cu具有急性毒性，即在12 h就呈現(xiàn)出了30%以上的抑制率，此后Cu的毒性逐漸增加，72 h后最大抑制率達(dá)到90%以上，此后幾乎不再增加，Cd的最大抑制率在12 h后迅速增加達(dá)到了70%以上，此后增加緩慢，72 h后幾乎不再增加。

研究表明，重金屬對(duì)藻的毒性主要是通過(guò)改變運(yùn)動(dòng)器的細(xì)微結(jié)構(gòu)，使核酸組成發(fā)生變化，影響細(xì)胞生長(zhǎng)和縮小細(xì)胞體[42]。氨基糖苷類抗生素的毒性作用是損害細(xì)胞膜，使細(xì)胞漿外漏，并作用于核糖體阻抑蛋白質(zhì)合成，影響細(xì)胞生長(zhǎng)[43]。由此可以看出本研究中兩種污染物對(duì)蛋白核小球藻的毒性作用機(jī)理相似，可以比較同一暴露時(shí)間節(jié)點(diǎn)的毒性大小。以pEC50值（半數(shù)效應(yīng)濃度EC50的負(fù)對(duì)數(shù)）為毒性指標(biāo)，污染物在同一暴露時(shí)間的毒性不同，且毒性大小順序隨著暴露時(shí)間延長(zhǎng)而變化，如在12 h所有物質(zhì)的pEC50值均為0，在24 h除了Cd有pEC50值，其余8種物質(zhì)的pEC50值均為0，在48 h，三種物質(zhì)的毒性大小順序?yàn)镻AR＜Cd＜Cu，其余 6種物質(zhì)的 pEC50值均為 0，72 h時(shí)KAN和TOB的pEC50值為0，其余7種物質(zhì)的毒性大小順序?yàn)?Zn＜Mn＜Cd＜AMI＜GEN＜PAR＜Cu，96 h的毒性順序?yàn)?KAN＜TOB＜Zn＜Mn＜Cd＜AMI＜GEN＜Cu＜PAR。

2.2 抗生素-重金屬對(duì)蛋白核小球藻在不同時(shí)間點(diǎn)的聯(lián)合毒性

將抗生素與重金屬的九元混合物體系對(duì)蛋白核小球藻的濃度-效應(yīng)數(shù)據(jù)及擬合CRC繪于圖2中。從圖2可以看出，抗生素和重金屬的九元混合物射線對(duì)蛋白核小球藻的毒性，均隨著暴露時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增強(qiáng)，即具有時(shí)間依賴性，但不同濃度配比的混合物射線，毒性隨時(shí)間變化的規(guī)律略有不同。如R1、R2、R3、R8和R9的毒性均隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增強(qiáng)，24 h后增加速度較快，72h后增加速率減慢，96 h后幾乎不再增加，而余下的5條射線的毒性隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng)，只在開始的48h內(nèi)迅速增加，此后毒性增加非常緩慢，96 h不再增加。九元混合物體系幾條射線的毒性較接近TOB的毒性，可能是由于TOB所占濃度比最高（表2），直接影響了混合物毒性隨時(shí)間的變化規(guī)律。

2.3 抗生素-重金屬多元混合物對(duì)蛋白核小球藻的聯(lián)合毒性相互作用

CA模型能較好地評(píng)估混合物毒性[39]。CA對(duì)10條射線在不同時(shí)間點(diǎn)的預(yù)測(cè)CRC與實(shí)驗(yàn)CRC及其置信區(qū)間繪于圖3中。由于在暴露時(shí)間12 h和24 h內(nèi)，部分組分（如TOB）沒(méi)有明顯的毒性，因此，圖3只給出了48 h后的濃度-效應(yīng)關(guān)系圖。

圖1 抗生素和重金屬在不同暴露時(shí)間點(diǎn)的濃度-效應(yīng)曲線Figure1 Theconcentration-effect curvesof antibioticsand heavy metalsat different exposuretime

從圖3可以看出，除了射線R5~R7的CA預(yù)測(cè)CRC部分落在實(shí)驗(yàn)觀測(cè)置信區(qū)間的上方，表現(xiàn)為部分拮抗作用，其余射線的CA預(yù)測(cè)線都在實(shí)驗(yàn)CRC置信區(qū)間的下方，呈現(xiàn)明顯的協(xié)同作用，但不同射線協(xié)同作用不同。R1~R3和R8、R9均呈現(xiàn)出明顯的協(xié)同作用，而R4和R10均在48 h呈現(xiàn)明顯的協(xié)同作用，且隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸減弱甚至變?yōu)榧雍妥饔茫鳵5~R7在暴露時(shí)間為48 h時(shí)，CA預(yù)測(cè)CRC都落在實(shí)驗(yàn)CRC置信區(qū)間內(nèi)，表現(xiàn)為經(jīng)典的加和作用，隨后隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng)，CA預(yù)測(cè)線CRC落在了置信區(qū)間上限的上方，即呈現(xiàn)出拮抗作用，表明R5、R6和R7三條射線呈現(xiàn)出明顯的時(shí)間依賴性拮抗作用。如前所述，兩類物質(zhì)作用于藻細(xì)胞的機(jī)理接近，因此大多數(shù)混合物射線呈現(xiàn)出明顯的協(xié)同作用。同時(shí)，由于抗生素分子中含有大量的羧基、羥基、氨等基團(tuán)或電子供體原子，可與金屬離子發(fā)生絡(luò)合作用，這種絡(luò)合作用會(huì)在不同程度上改變混合污染物的環(huán)境行為和毒理效應(yīng)，這可能使污染物的聯(lián)合毒性增強(qiáng)或減弱，即產(chǎn)生了協(xié)同或拮抗作用[20-21]。綜上所述，混合物的相互作用的毒性大小及其變化規(guī)律不僅與組分的濃度比有關(guān)，也會(huì)隨暴露時(shí)間變化而變化，這就要求我們?cè)诮沂疚廴疚锵嗷プ饔靡?guī)律時(shí)，要同時(shí)考慮濃度與時(shí)間兩個(gè)因素，提高生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的可信度。

3 結(jié)論

（1）9種污染物對(duì)蛋白核小球藻的毒性具有明顯的時(shí)間依賴性，但不同物質(zhì)對(duì)其毒性隨時(shí)間變化的規(guī)律不同，毒性大小順序也隨時(shí)間不斷變化。

（2）抗生素和重金屬的九元混合物體系對(duì)蛋白核小球藻具有時(shí)間依賴毒性，且毒性的大小隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)，前48 h內(nèi)毒性顯著增強(qiáng)，在48~96 h內(nèi)，毒性增加幅度減小。

（3）10條抗生素和重金屬的九元混合物射線對(duì)蛋白核小球藻的毒性具有時(shí)間依賴性協(xié)同或拮抗作用，射線R1~R3和R8~R9均呈現(xiàn)出隨時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸減弱的協(xié)同作用，而射線R5~R7呈現(xiàn)出隨時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸趨于明顯的拮抗作用。

（4）混合物的毒性相互作用不僅與組分的濃度配比有關(guān)，也與暴露時(shí)間有關(guān)。

圖2 九元混合物體系在不同暴露時(shí)間點(diǎn)的濃度-效應(yīng)曲線Figure2 Thecon centration-effect curvesof thenine-component mixturesystemsat different exposuretime

[1]Teuber M.Veterinary use and antibiotic resistance[J].Current Opinion in Microbiology,2001,4（5）：493-499.

[2]張琳曉,那廣水,陸紫皓,等.快速評(píng)估近岸海洋水體與沉積物中E.coli與S.aureus抗生素抗性水平的新方法[J].生態(tài)毒理學(xué)報(bào),2017,12（1）：155-162.ZHANGLin-xiao,NA Guang-shui,LU Zi-hao,et al.A novel method for rapid assessment of antibiotic resistance E.coli and S.aureus in waters and sediments[J].Asian Journal of Ecotoxicology,2017,12（1）：155-162.

圖3 呈毒性相互作用的混合物射線對(duì)蛋白核小球藻的濃度-效應(yīng)關(guān)系Figure 3 Thenine-component mixturesystemsof toxic interaction of Chlorella pyrenoidosa concentration-effect relationship

續(xù)圖3 呈毒性相互作用的混合物射線對(duì)蛋白核小球藻的濃度-效應(yīng)關(guān)系Continued figure 3 The nine-component mixture systemsof toxic interaction of Chlorella pyrenoidosa concentration-effect relationship

[3]劉 佳.重金屬污染農(nóng)田土壤中抗生素抗性基因與可移動(dòng)遺傳元件的分布[D].鄭州：鄭州大學(xué),2016.LIU Jia. Distribution of antibiotic resistance genes and removable genetic elements in soil contaminated by heavy metals [D]. Zhengzhou：Zhengzhou University, 2016.

[4]李宗宸.河流沉積物吸附四環(huán)素類抗生素的行為規(guī)律研究[D].上海：東華大學(xué),2017.LI Zong-chen.Study on the adsorption behaviors and rules of tetracyclineon river sediment[D].Shanghai：Donghua University,2017.

[5]Díaz-Cruz S,BarcelóD.Occurrence and analysis of selected pharmaceuticals and metabolites as contaminants present in waste waters,sludgeand sediments[J].Water Pollution,2004,511：47-63.

[6]Costanzo S D, Murby J, Bates J. Ecosystem response to antibiotics entering the aquatic environment[J]. Marine Pollution Bulletin, 2005, 51（1）：218-223.

[7]Duffy B,Holliger E,Walsh F.Streptomycin use in apple orchards did not increase abundance of mobileresistancegenes[J].Fems Microbiology Letters,2014,350（2）：180-189.

[8]Heberer T.Occurrence,fate,and removal of pharmaceutical residues in the aquatic environment：A review of recent research data[J].Toxicology Letters,2002,131（1/2）：5-17.

[9]Liu Y,Gao B Y,Yue Q Y,et al.Influences of two antibiotic contaminantson theproduction,releaseand toxicity of microcystins[J].Ecotoxicology and Environmental Safety,2012,77：79-87.

[10]韋麗麗,周 瓊,謝從新,等.三峽庫(kù)區(qū)重金屬的生物富集、生物放大及其生物因子的影響[J].環(huán)境科學(xué),2016,37（1）：325-334.WEI Li-li,ZHOU Qiong,XIE Cong-xin,et al.Bioaccumulation and biomagnification of heavy metals in Three Gorges Reservoir and effect of biological factors[J].Environmental Science,2016,37（1）：325-334.

[11]Bing H J,Zhou J,Wu Y H,et al.Current state,sources,and potential risk of heavy metals in sediments of Three Gorges Reservoir,China[J].Environmental Pollution,2016,214：485-496.

[12]Lin Y,Gritsenko D,Feng SL,et al.Detection of heavy metal by paperbased micr of luidics[J].Biosensors and Bioelectronics,2016,83：256-266.

[13]Yang R S.Some critical issues and concerns related to research advances on toxicology of chemical mixtures[J].Environmental Health Perspectives,1998,106（Suppl 4）：1059-1063.

[14]Zhang ZZ,Zhang QQ,Xu JJ,et al.Evaluation of the inhibitory effects of heavy metalson anammox activity：A batch test study[J].Bioresource Technology,2016,200：208-216.

[15]劉艷萍,劉鴻雁,吳龍華,等.貴陽(yáng)市某蔬菜地養(yǎng)殖廢水污灌土壤重金屬、抗生素復(fù)合污染研究[J].環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào),2017,37（3）：1074-1082.LIUYan-ping,LIUHong-yan,WULong-hua,et al.Co-contamination of heavy metals and antibiotics in soilsunder husbandry wastewater irrigation in Guiyang City[J].Acta Scientiae Circumstantiae,2017,37（3）：1074-1082.

[16]李美芳,劉云國(guó),舒 鼎,等.一種使用改性氧化石墨烯處理抗生素和重金屬?gòu)?fù)合污染水體的方法：中國(guó),201611044606.0[P].2017-03-22.LI Mei-fang,LIU Yun-guo,SHU Ding,et al.A method for treating contaminated water with antibiotic and heavy metal complexes using modified graphene：China,201611044606.0[P].2017-03-22.

[17]Zhang Y,Cai X Y,Lang X M,et al.Insights into aquatic toxicities of the antibiotics oxytetracycline and cipro floxacin in the presence of metal：Complexation versusmixture[J].Environmental Pollution,2012,166：48-56.

[18]Backhaus T,Porsbring T,Arrhenius魡,et al.Single-substance and mixture toxicity of five pharmaceuticals and personal care products to marineperiphytoncommunities[J].Environmental Toxicologyand Chemistry,2011,30（9）：2030-2040.

[19]Chen C,Wang YH,Qian YZ,et al.Thesynergistic toxicity of themultiple chemical mixtures：Implicationsfor risk assessment in the terrestrial environment[J].Environment International,2015,77：95-105.

[20]張 雨.抗生素-金屬?gòu)?fù)合物水生毒理及選擇性吸附去除[D].大連：大連理工大學(xué),2013.ZHANG Yu.Aquatic toxicity and selective adsorption removal of antibiotic and metal complex[D].Dalian：Dalian University of Technology,2013.

[21]王 瑞,魏源送.畜禽糞便中殘留四環(huán)素類抗生素和重金屬的污染特征及其控制[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào),2013,32（9）：1705-1719.WANGRui,WEIYuan-song.Pollution and control of tetracyclines and heavy metals residues in animal manure[J].Journal of Agro-Environment Science,2013,32（9）：1705-1719.

[22]Hatano A,Shoji R.A new model for predicting time course toxicity of heavy metals based on Biotic Ligand Model（BLM）[J].Comparative Biochemistry and Physiology Part C：Toxicology&Pharmacology,2010,151（1）：25-32.

[23]Zhu X W,Liu SS,Ge H L,et al.Comparison between the short-term and the long-term toxicity of six triazine herbicides on photobacteria Q67[J].Water Research,2009,43（6）：1731-1739.

[24]陳 瓊,張 瑾,李小猛,等.幾種抗生素對(duì)蛋白核小球藻的時(shí)間毒性微板分析法[J].生態(tài)毒理學(xué)報(bào),2015,10（2）：190-197.CHEN-Qiong,ZHANGJin,LIXiao-meng,et al.Time-dependent microplate toxicity analysis（T-MTA）of several antibiotics to Chlorella pyrenoidosa[J].Asian Journal of Ecotoxicology,2015,10（2）：190-197.

[25]朱祥偉,劉樹深,張 瓊,等.殺蟲劑及抗生素對(duì)發(fā)光菌的短期毒性與長(zhǎng)期毒性[J].環(huán)境科學(xué)研究,2009,22（5）：589-594.ZHUXiang-wei,LIUShu-shen,ZHANGQiong,et al.Comparison between the short-term and the long-term toxicity of selected insecticides and antibiotics on photobacteria[J].Research of Environmental Science,2009,43（6）：1731-1739.

[26]王猛超,劉樹深,陳 浮.拓展?jié)舛燃雍湍Ｐ皖A(yù)測(cè)三種三嗪類除草劑混合物的時(shí)間依賴毒性[J].化學(xué)學(xué)報(bào),2013,72（1）：56-60.WANGMeng-chao,LIUShu-shen,CHENFu.Predictingthetime-dependent toxicities of three triazine herbicide mixtures to V.qinghaiensis sp.Q67 using the extended concentration addition model[J].Acta Chimica Sinica,2013,72（1）：56-60.

[27]Zhang J,Liu SS,Yu ZY,et al.Time-dependent hormetic effects of 1-alkyl-3-methylimidazoliumbromide on Vibrioqinghaiensis sp.-Q67：Luminescence,redoxreactantsand antioxidases[J].Chemosphere,2013,91（4）：462-467.

[28]Zhang J,Liu SS,Dong X Q,et al.Predictability of thetime-dependent toxicities of aminoglycoside antibiotic mixtures to Vibrio qinghaiensis sp.-Q67[J].RSCAdvances,2015,5（129）：107076-107082.

[29]Baas J,Jager T,Kooijman B.Understanding toxicity as processes in time[J].Scienceof the Total Environment,2010,408（18）：3735-3739.

[30]Margerit A,Gomez E,Gilbin R.Dynamic energy-based modeling of uranium and cadmium joint toxicity to Caenorhabditis elegans[J].Chemosphere,2016,146：405-412.

[31]鄧輔財(cái),劉樹深,劉海玲,等.部分重金屬化合物對(duì)淡水發(fā)光菌的毒性研究[J].生態(tài)毒理學(xué)報(bào),2007,2（4）：402-408.DENGFu-cai,LIU Shu-shen,LIU Hai-ling,et al.Toxicities of Selected heavy metal compounds and their mixtures to photobacteria（Vibrio qinghaiensis sp.-Q67）[J].Asian Journal of Ecotoxicology,2007,2（4）：402-408.

[32]袁 靜,劉樹深,王麗娟,等.蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidosa）微板毒性分析方法優(yōu)化[J].環(huán)境科學(xué)研究,2011,24（5）：553-558.YUANJing,LIU Shu-shen,WANGLi-juan,et al.Optimization of microplate toxicity analysis method based on Chlorella pyrenoidose[J].Research of Environmental Sciences,2011,24（5）：553-558.

[33]Zhou Y,Xu Y B,Xu JX,et al.Combined toxic effects of heavy metals and antibiotics on a Pseudomonas fluorescens strain ZY2 isolated from swinewastewater[J].International Journal of Molecular Sciences,2015,16（2）：2839-2850.

[34]呂 旋,向 壘,李彥文,等.環(huán)丙沙星-鎘復(fù)合污染對(duì)高低累積型菜心種子發(fā)芽的影響[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào),2014,33（4）：819-820.L譈Xuan,XIANGLei,LIYan-wen,et al.Influences of ciprofloxacincadmium combined pollution on seed germination and seedling growth of ciprofloxacin high-and low-accumulating Brassica parachinensis[J].Journal of Agro-Environment Science,2014,33（4）：819-820.

[35]Brausch J M,Rand G M.A review of personal care products in the aquatic environment：Environmental concentrations and toxicity[J].Chemosphere,2010,82（11）：1518-1532.

[36]林 楠,張 晶,劉樹深.污染物對(duì)青?；【鶴67的時(shí)間依賴微板毒性分析[J].中國(guó)科技論文在線精品論文,2013,6（24）：2321-2328.LIN Nan,ZHANG Jing,LIU Shu-shen.Time-dependent microplate toxicity analysis（T-MTA）of pollutant to Vibrio qinghaiensis sp.Q67[J].Highlightsof Sciencepaper Online,2013,6（24）：2321-2328.

[37]Zhang Y H,Liu SS,Song X Q,et al.Prediction for themixture toxicity of six organophosphorus pesticides to the luminescent bacterium Q67[J].Ecotoxicology&Environmental Safety,2008,71（3）：880.

[38]Iwasaki Y, Gauthier P. Concentration addition and response addition to analyze mixture toxicity：Is it worth testing?[J]. Environmental Toxicology&Chemistry, 2016, 35（3）：526-527.

[39]劉樹深,劉 玲,陳 浮.濃度加和模型在化學(xué)混合物毒性評(píng)估中的應(yīng)用[J].化學(xué)學(xué)報(bào),2013,71（10）：1335-1340.LIUShu-shen,LIU Ling,CHEN Fu.Application of the concentration addition model in the assessment of chemical mixture toxicity[J].Acta Chimica Sinica,2013,71（10）：1335-1340.

[40]董欣琦,陳 敏,張 瑾,等.氨基糖苷類抗生素混合物對(duì)蛋白核小球藻的時(shí)間依賴毒性[J].安徽建筑大學(xué)學(xué)報(bào),2016,24（6）：67-73.DONGXin-qi,CHENMin,ZHANGJin,et al.Time-dependent Toxicity of Aminoglycoside antibioticsto Chlorella pyrenoidosa[J].Journal of Anhui Jianzhu University,2016,24（6）：67-73.

[41]Tang H X,Liu SS,Li K,et al.Combining the uniform design-based ray procedure with combination index to investigate synergistic lethal toxicities of ternary mixtures on Caenorhabditis elegans[J].Analytical Methods,2016,8（22）：4466-4472.

[42]石 磊.重金屬對(duì)小球藻的毒性作用及小球藻對(duì)Hg2+的吸附研究[D].沈陽(yáng)：東北大學(xué),2008.SHILei.Research on the toxicity of heavy metals on Chlorella sp.and the adsorpyion of Hg2+by Chlorella sp.[D].Shenyang：Northeastern U－niversity,2008.

[43]田中信男,高 恩.氨基糖苷類抗生素的作用及耐藥機(jī)理[J].國(guó)外醫(yī)藥（抗生素分冊(cè)）,1987（6）：425-426.Tanaka Nobuo,GAOEn.The effect and mechanism of aminoglycoside antibiotics[J].World Noteson Antibiotics,1987（6）：425-426.