陳興英

自身免疫性溶血性貧血（AIHA）是溶血性貧血中較為常見的類型之一，其主要貧血原因是由于體內(nèi)免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)功能紊亂，導(dǎo)致產(chǎn)生抗體并破壞自身紅細胞［1-5］?？谷饲虻鞍自囼灒ˋT）又稱Coombs試驗，是檢查AIHA最常用的亦最有意義的實驗室檢查，直接抗人球蛋白試驗（DAT）結(jié)果呈陽性是確診AIHA的核心依據(jù)之一。傳統(tǒng)的Coombs試驗主要以試管法為主，其試驗結(jié)果受檢驗師操作水平﹑抗體濃度等多方面影響，且檢查結(jié)果需經(jīng)顯微鏡檢查；而微柱凝集法操作簡單，且結(jié)果經(jīng)肉眼即可辨認(rèn)，目前已逐漸成為Coombs試驗的主要手段。本研究通過探究微柱凝集法在AIHA診斷中的應(yīng)用價值，旨在為檢驗工作提供參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取本院血液科2014年2月至2016年9月收治的疑診為自身免疫性溶血性貧血患者120例作為觀察對象，其中男45例，女75例；年齡17～76歲，平均（42.82±18.77）歲；病程3個月～11年，平均（5.61±3.09）年；合并膽結(jié)石17例，糖尿病9例，冠心病6例，脂肪肝10例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合自身免疫性溶血性貧血的相關(guān)臨床表現(xiàn)，即出現(xiàn)貧血﹑脾大﹑黃疸等表現(xiàn)者。（2）血象檢查發(fā)現(xiàn)網(wǎng)織紅細胞增多，并有骨髓增生者。（3）無合并嚴(yán)重的肝臟﹑腎臟﹑肺等實質(zhì)性臟器組織疾病，心腦血管指標(biāo)檢查正常者。（4）對本研究內(nèi)容知情，自愿參加本項研究并簽署知情同意書者。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)問診或查體排除貧血可能的患者。（2）近6個月內(nèi)有任何輸血史或服用其他可造成貧血貌藥物的患者。（3）患有肺結(jié)核﹑乙型肝炎等傳染性疾病的患者。（4）患有嚴(yán)重的免疫系統(tǒng)疾病的患者。（5）患有任何系統(tǒng)惡性腫瘤的患者。（6）因為各種原因而拒絕配合本研究完成者。

1.2 方法 （1）器材與藥品：低離子強度鹽溶液﹑BioVue專用雙相電子控制離心機﹑BioVue專用孵育器﹑間接Coombs試驗抗-IgG﹑Coombs試驗檢測卡均購自美國強生公司；直接Coombs實驗試劑盒抗-IgG﹑C3d﹑抗-C3d﹑抗D-IgG單克隆抗體均選用江蘇力博抗人球蛋白檢測卡；試管法所用紅細胞表面抗體IgG﹑IgM﹑IgA﹑C3檢測試劑盒均購自上海血液生物醫(yī)藥制品有限責(zé)任公司。陰性對照配制方法：健康成人3%Rh陽性O(shè)型紅細胞懸液與AB型血清等量混合，37℃水浴20min后以0.9%氯化鈉溶液洗滌，配制成3%的紅細胞懸液。陽性對照配制方法：健康成人3%Rh陽性O(shè)型紅細胞懸液與抗D-IgG等量混合，37℃水浴20min后以0.9%氯化鈉溶液洗滌，配制成3%的紅細胞懸液。（2）微柱凝集法：微柱凝集法試驗均設(shè)立陰性﹑陽性對照。直接Coombs試驗法：將標(biāo)本制成3%的紅細胞懸液，取10μl置于Coombs試驗檢測卡孔中，1200r/min離心5min后與對照液比對。間接Coombs試驗法：取50μl低離子強度鹽溶液置于Coombs試驗檢測卡孔中，再加上50μl健康成人3%Rh陽性O(shè)型紅細胞懸液與受檢血清按1：4比例配置得液體，1200r/min離心5min后與對照液比對。（3）試管法：試管法試驗均設(shè)立陰性﹑陽性對照。將受檢血清配制為10%壓積的細胞懸液。直接Coombs試驗法：取0.4ml壓積紅細胞用生理鹽水配制為2%的壓積紅細胞后置于試管中，將四種抗體試劑加入后37℃水浴20min，再1200r/min離心1min后鏡檢，并與陰性﹑陽性對照液比對。間接Coombs試驗法：取0.4ml壓積紅細胞與健康成人3%Rh陽性O(shè)型紅細胞懸液等量混勻，37℃水浴60min后以生理鹽水配制為5%的壓積紅細胞后置于試管中，將四種抗體試劑加入后37℃水浴20min，再1200r/min離心1min后鏡檢，并與陰性﹑陽性對照液比對。

1.3 觀察指標(biāo) 直接Coombs試驗中兩種方法的診斷效果的比較；間接Coombs試驗中兩種方法的診斷效果的比較。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS23.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以n（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

120例患者中，共確診為自身免疫性溶血性貧血者71例，其中，單純IgG陽性39例，單純C3d陽性11例，IgG+C3d陽性10例，IgG+C3d+IgM陽性6例，IgG+IgA陽性5例。直接Coombs試驗中，微柱凝集法檢出陽性者78例。試管法檢出陽性者47例，其中單純IgG陽性34例，單純C3d陽性7例，IgG+C3d陽性6例。間接Coombs試驗中，微柱凝集法檢出陽性者22例，試管法檢出陽性者14例。

2.1 直接Coombs試驗中兩種方法的診斷效果比較 見表1。

表1 直接Coombs試驗中兩種方法的診斷效果比較（%）

2.2 間接Coombs試驗中兩種方法的診斷效果比較 見表2。

表2 間接Coombs試驗中兩種方法的診斷效果的比較（%）

3 討論

Coombs試驗屬于間接血凝試驗，其主要試驗原理為：以抗球蛋白抗體作為連接紅細胞表面抗原與特異性抗體相結(jié)合的第二抗體（亦稱為橋梁抗體），使抗紅細胞不完全抗體效價增加，從而表現(xiàn)出可觀察到的紅細胞凝集現(xiàn)象。直接Coombs試驗直接檢測已經(jīng)粘附于紅細胞表面上的抗體，間接Coombs試驗則檢測游離于血液中的抗體。Coombs試驗呈陽性說明血液中存在抗紅細胞不完全抗體，但除了自身免疫性溶血性貧血之外，還應(yīng)當(dāng)考慮藥物免疫性溶血性貧血及慢性淋巴細胞性白血病。Coombs試驗的靈敏度一般較高，但特異度相對較低，故不能完全依賴Coombs試驗作為確診AIHA的金標(biāo)準(zhǔn)，還應(yīng)當(dāng)結(jié)合其他檢查手段聯(lián)合診斷。

微柱凝集法是近年來逐漸興起的一種新式檢驗方法，相比傳統(tǒng)的試管法，微柱凝集法的操作較為簡單，檢驗過程中采用的微柱可將紅細胞凝聚在其周圍，可觀察閾值小于試管法，且肉眼即可直接觀察到結(jié)果，無需經(jīng)過顯微鏡檢查，陽性標(biāo)準(zhǔn)清晰且受主觀影響較小。微柱凝集法在檢查過程中無洗滌紅細胞的步驟，較大程度上解決了因洗滌導(dǎo)致的假陰性率上升的問題。且微柱凝集法主要過程均由機器完成，無需手工操作，在節(jié)約了檢驗時間的同時亦避免了由于檢驗師個人經(jīng)驗不足所造成的誤差［6］。本資料將試管法和微柱凝集法同時檢驗標(biāo)本，比較了兩種檢驗方法的總診斷效果及直接抗人球蛋白試驗中對各抗體型患者的陽性檢出率。檢驗結(jié)果顯示，直接﹑間接Coombs試驗中，微柱凝集法的靈敏度﹑特異度以及診斷準(zhǔn)確率均明顯高于試管法，結(jié)果符合試驗預(yù)期。

綜上所述，微柱凝集法相比傳統(tǒng)試管法對自身免疫性溶血性貧血的診斷效果更好，且操作方法更加簡便易行，因此推薦在檢驗工作中推廣。

［1］ 林嘉,何屹,饒紹琴．微柱凝集技術(shù)交叉配血主側(cè)相合、次側(cè)不合的處理流程研究．國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2015,36(5):581-582．

［2］ Al MVE．Danazol:An attractive option for the treatment of autoimmune haemolytic anemia．Nucleic Acids Res,2014, 40(19):9513-9521．

［3］ 鄒強．不同輸血方法在自身免疫性溶血性貧血患者中應(yīng)用研究．臨床醫(yī)藥文獻電子雜志,2016,3(29):5811-5811．

［4］ Arndt PA,Leger RM,Garratty G．Serologic characteristics of ceftriaxone antibodies in 25 patients with drug-induced immune hemolytic anemia．Tranfusion,2012,52(3):602-612．

［5］ Abdolhosseini M,Nandula SR,Song J,et al．Lysine substitutions convert a bacterial-agglutinating peptide into a bactericidal peptide that retains anti-lipopolysaccharide activity and low hemolytic activity．Peptides,2012,35(2):231．

［6］ Barcellini W,Fattizzo B．Clinical Applications of Hemolytic Markers in the Differential Diagnosis and Management of Hemolytic Anemia．Dis Markers,2015,2015(3):635-670．