姜 松，蔣華杰，周發(fā)林，黃建華，楊其彬*

(1.中國水產(chǎn)科學研究院 南海水產(chǎn)研究所/農(nóng)業(yè)部南海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點實驗室，廣東 廣州 510300;2.河南師范大學 水產(chǎn)學院，河南 新鄉(xiāng) 453007)

凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)又稱南美白對蝦，自20世紀90年代引進我國以來，其養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)得到迅速發(fā)展[1]。然而，發(fā)展是粗放式的，為了控制大規(guī)模高密度養(yǎng)殖帶來的環(huán)境壓力，許多養(yǎng)殖戶選擇在苗種培育過程中向養(yǎng)殖水體中投放大量的化學添加劑，對生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生了不可逆轉(zhuǎn)的影響。同時，這種“亡羊補牢”式的養(yǎng)殖方式，也使得南美白對蝦苗種的抗逆性能越來越差。此外，近年來，以白斑綜合癥、急性肝胰腺壞死癥為代表的對蝦病害的大規(guī)模暴發(fā)，對南美白對蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成重大的損失。因此，生態(tài)養(yǎng)殖越來越受到人們的關(guān)注[2-7]。有研究表明，在中國對蝦(Penaeuschinensis)的育苗過程中使用微生態(tài)制劑，可明顯改善育苗水體水質(zhì)，并能顯著提高蝦苗的出苗率[8]。

微生態(tài)制劑是益生菌的統(tǒng)稱，是可用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中的活菌制劑[9]。芽孢桿菌(Bacillus)和乳酸菌(Lactobacillus)是水產(chǎn)養(yǎng)殖和育苗過程中經(jīng)常使用的2種益生菌[10]。研究表明，芽孢桿菌能產(chǎn)生多種消化酶，幫助動物對營養(yǎng)物質(zhì)進行消化吸收，從而促進動物的生長和存活[11-13]；乳酸菌是可發(fā)酵糖類且主要產(chǎn)物為乳酸的一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細菌的總稱[14]，乳酸菌可以降低水中氨氮的含量，分解養(yǎng)殖水體底質(zhì)的腐敗物質(zhì)，有效地調(diào)控水質(zhì)[15-16]。目前，針對微生態(tài)制劑在南美白對蝦養(yǎng)殖應用的研究主要集中在商品蝦養(yǎng)殖中[2-3,10]，而在南美白對蝦苗期的應用及用量研究相對較少。鑒于此，本試驗在南美白對蝦整個育苗過程中定期添加芽孢桿菌和乳酸菌，研究益生菌對南美白對蝦育苗效果的影響，旨在為南美白對蝦的生態(tài)育苗提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

供試芽孢桿菌制劑由中國水產(chǎn)科學研究院南海水產(chǎn)研究所自行分離、篩選、培養(yǎng)的菌株培養(yǎng)，活菌量為1.2×109cfu/g；乳酸菌制劑購自廣州市欣海利生生物科技有限公司，呈液體狀，活菌量為1.0×108cfu/g；供試南美白對蝦的無節(jié)幼體購自深圳環(huán)球集團。

1.2 試驗設計

南美白對蝦無節(jié)幼體養(yǎng)殖于室內(nèi)玻璃纖維水桶(300 L)中，每桶放幼體20 000尾。將南美白對蝦無節(jié)幼體隨機分為7組，包括對照(C)組和試驗(Y1、Y2、Y3和R1、R2、R3)組，每組設3個重復。試驗期21 d(2016年8月28日— 9月18日)。育苗過程中的飼養(yǎng)管理方法見表1，Y1、Y2、Y3等3個試驗組分別在0 d(放入無節(jié)幼體的前1 d)、1 d、6 d、11 d和16 d添加芽孢桿菌制劑，使育苗水體芽孢桿菌制劑分別達到10 g/m3、15 g/m3和20 g/m3；R1、R2、R3等3個試驗組在0 d、1 d、6 d、11 d和16 d添加乳酸菌制劑，使育苗水體乳酸菌制劑分別達到20 g/m3、25 g/m3和30 g/m3；C組不添加任何微生態(tài)制劑。試驗期間不換水，所用海水鹽度為30‰～32‰，pH值為7.5～8.0，24 h不間斷充氣，溶解氧保持在5.0 mg/L以上。

表1 南美白對蝦育苗期間飼養(yǎng)管理

1.3 測定指標

1.3.1 生長指標 在無節(jié)幼體變態(tài)至糠蝦幼體后，用1 L的采水器分別在桶的4個角落的上層和底層以及桶的中心取9個點，統(tǒng)計1 L水中糠蝦幼體數(shù)量的平均值，重復3次，計算出水桶中糠蝦幼體的數(shù)量。在幼體變態(tài)至仔蝦后，用同樣的方法統(tǒng)計桶中蝦苗的數(shù)量。在試驗結(jié)束時，將每個桶中的蝦苗收集至濾網(wǎng)中稱取總質(zhì)量(W1,精確至0.001 g)，再于每個桶中取100 ind蝦苗，稱取其質(zhì)量(W2)，計算每尾蝦苗的平均質(zhì)量(W)及蝦苗的成活率(SR)。計算公式如下：

W=W2/100

(1)

SR= [(W1/W)/20 000]×100%

(2)

1.3.2 蝦苗抗逆性 淡水存活率：每桶隨機取蝦苗100 ind，放入鹽度為0的水中，分別在30 min和60 min時統(tǒng)計存活蝦苗的數(shù)量。

溫度突變存活率：每桶隨機取蝦苗100 ind，放入低于養(yǎng)殖桶溫度5 ℃的同鹽度水中2 min，立刻全部撈出放至原養(yǎng)殖桶水中，15 min后統(tǒng)計蝦苗的數(shù)量。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用 Excel 對蝦苗各個階段的成活率、體質(zhì)量以及抗逆性等進行樣本頻率的假設檢驗，以此來統(tǒng)計各組間的差異性。采用SPSS 19.0軟件的One-way ANOVA分析進行差異性比較，并利用Duncan’s多重比較法分析不同組之間的差異顯著性，數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標準差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同微生態(tài)制劑對南美白對蝦蝦苗體質(zhì)量的影響

從圖1可知，C組蝦苗的體質(zhì)量最小，Y3組的蝦苗體質(zhì)量最大，較C組顯著提高27.18%，R3組次之。

不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，下同

2.2 不同微生態(tài)制劑對南美白對蝦各個變態(tài)階段成活率的影響

當南美白對蝦蝦苗變態(tài)至糠蝦階段時，各組之間的糠蝦幼體成活率差異均不顯著，成活率為70%～80%(圖2)。當蝦苗變態(tài)至仔蝦幼體后，蝦苗成活率差異整體顯著，其中對照組的成活率顯著低于試驗組，R3組的仔蝦幼體成活率最高，較C組顯著提高10.45%。且芽孢桿菌組蝦苗成活率均低于乳酸菌組。蝦苗出苗時，R3組蝦苗的成活率最高，較C組提高34.86%。

圖2 不同微生態(tài)制劑對南美白對蝦各變態(tài)階段成活率的影響

2.3 不同微生態(tài)制劑對南美白對蝦蝦苗抗逆性的影響

由圖3可見，將蝦苗放至淡水中30 min后，存活率均約為100%，且各組之間無顯著性差異。放置在淡水中的時間延長至60 min后，試驗組的存活率均顯著高于對照組，與對照組相比，Y1組、Y2組、Y3組、R1組、R2組和R3組的存活率分別提高14.05%、16.53%、14.05%、13.22%、14.05%和14.88%，各試驗組之間差異不顯著。

圖3 淡水試驗中蝦苗的存活率

溫度突變試驗結(jié)果顯示，與對照組相比，Y1組、Y2組、Y3組、R1組、R2組和R3組的存活率分別顯著提高9.29%、9.84%、10.38%、8.74%、9.29%和10.38%，各試驗組之間差異不顯著(圖4)。

圖4 溫度突變后蝦苗的存活率

3 結(jié)論與討論

3.1 微生態(tài)制劑對蝦苗生長性能的影響

20世紀90年代，微生態(tài)制劑開始逐漸應用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中[17]。微生態(tài)制劑主要有以下2種作用機制：一是直接作用于養(yǎng)殖動物本身，可作為養(yǎng)殖動物的餌料被其直接利用，從而促進養(yǎng)殖動物的生長以及提高養(yǎng)殖動物的消化機能和對飼料的利用率[18-20]；二是作用于養(yǎng)殖水體，通過對養(yǎng)殖水體環(huán)境的改善，使養(yǎng)殖生物有一個良好的生存環(huán)境，從而達到生態(tài)養(yǎng)殖、健康養(yǎng)殖的效果[10,21-22]。研究表明，芽孢桿菌可以提高水產(chǎn)養(yǎng)殖動物消化酶活性，增加動物機體對飼料的消化利用率，從而提高攝入營養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)化率[23]；乳酸菌可以降低水中氨氮的含量，分解養(yǎng)殖水體底質(zhì)的腐敗物質(zhì)，有效地調(diào)控水質(zhì)[8-9]。本試驗中，在南美白對蝦育苗期間定期添加芽孢桿菌和乳酸菌，可不同程度提高蝦苗的體質(zhì)量，這一結(jié)果與袁成玉等[24]在刺參上的研究結(jié)果一致。芽孢桿菌能夠分解有機物，改良育苗水體水質(zhì)[25]，本試驗中，添加芽孢桿菌的試驗組可觀察到絮狀物質(zhì)，蝦苗可以將這些絮狀物質(zhì)作為食物進行攝食，因此，添加適量的芽孢桿菌可明顯提高蝦苗的體質(zhì)量。乳酸菌的主要作用是調(diào)控水質(zhì)，抑制有害菌類的生長和繁殖[12]，因此，添加相對少量的乳酸菌的試驗組在提高蝦苗體質(zhì)量方面無明顯作用，而高劑量組作用顯著。

不同微生態(tài)制劑對南美白對蝦各個變態(tài)階段成活率有不同的影響。當南美白對蝦變態(tài)至糠蝦幼體時，試驗組和對照組糠蝦幼體成活率無明顯差異，這一結(jié)果與楊章武等[25]的研究結(jié)果一致，這是由于育苗期前期水質(zhì)狀況相對良好，在餌料充足、條件適宜的情況下，健康的蝦苗均可變態(tài)至糠蝦幼體。當糠蝦幼體變態(tài)至仔蝦幼體時，由于投喂的蝦片等高蛋白質(zhì)殘餌的積累分解，加之糞便的積累，水質(zhì)發(fā)生一定程度的惡化。益生菌的使用，可在一定程度上調(diào)節(jié)水質(zhì)，因此，試驗組蝦苗在變態(tài)至仔蝦幼體時的成活率顯著高于對照組。在試驗組中， R3組變態(tài)至仔蝦幼體的成活率最高，且芽孢桿菌組成活率均低于乳酸菌組，這可能由于乳酸菌對水質(zhì)的調(diào)節(jié)能力優(yōu)于芽孢桿菌，也可能是由于乳酸菌在育苗水體的繁殖速度大于芽孢桿菌，因此，下一步還需要對育苗水體水質(zhì)指標及不同細菌總數(shù)加以測量。

3.2 微生態(tài)制劑對蝦苗抗逆性的影響

抗逆性是動物對環(huán)境突然變化的適應能力的衡量指標，當遇到環(huán)境溫度、鹽度的突然升高或降低、細菌病菌感染、飼料的突然變化等狀況時，動物都會產(chǎn)生應激反應，而抗逆性的大小既與遺傳有關(guān)，也受動物本身健康狀況的影響[16,26]。水溫、鹽度突變是養(yǎng)殖過程中常見的脅迫因子[16]，蝦苗抗逆性的強弱是對脅迫因子耐受性的關(guān)鍵，因此，對于蝦苗抗逆性的探究非常必要。本試驗中，將各組蝦苗置于鹽度為0的水中30 min后，蝦苗幾乎無死亡現(xiàn)象；隨著在淡水中時間的延長，對照組蝦苗的存活率明顯低于試驗組，而各試驗組之間差異不明顯，溫度突變試驗也得到了相同的結(jié)果。以上結(jié)果表明，在南美白對蝦育苗過程中少量添加微生態(tài)制劑可顯著提高蝦苗的抗逆性能。芽孢桿菌作為蝦苗的餌料，可增強蝦苗的消化機能，同時可以提高苗體蛋白酶活力；而乳酸菌對育苗水環(huán)境的改良作用則可以為蝦苗提供適宜的生存生長環(huán)境。因此，在南美白對蝦育苗過程應添加微生態(tài)制劑，以提高蝦苗的抗逆能力，從而降低蝦苗運輸過程及下塘后的死亡率。

綜上，南美白對蝦育苗過程中定期添加一定量的微生態(tài)制劑能夠提高蝦苗的成活率及個體體質(zhì)量，同時可增強蝦苗的抗逆性能，以潑灑乳酸菌效果較好。微生態(tài)制劑的潑灑周期以及潑灑量與苗池負載量、水源情況等因素密切相關(guān)，施用時應按照各種微生態(tài)制劑的有效微生物含量、生理活性、生態(tài)特點進行調(diào)整，以達到最佳效果。

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