萬曉露

（浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院，浙江 杭州 310003）

心肌缺血為心肌細(xì)胞缺血缺氧引起其代謝的紊亂，心肌收縮功能減弱，舒張功能障礙，引起血流阻力增加，使血液流速減慢，心肌細(xì)胞膜中不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，直接影響冠脈供血，威脅患者的生命健康［1-3]?；钛獙幮慕舛痉骄哂幸鏆怵B(yǎng)心、活血解毒的功效，作為本院治療急性心肌缺血的院內(nèi)協(xié)定方，對于心肌缺血（心氣不足、瘀血麻痹證）患者具有良好的臨床療效，且無明顯毒副反應(yīng)，但其作用機(jī)制尚不明確。因此，本研究以結(jié)扎冠狀動脈前降支法制備急性心肌缺血模型，旨在探討活血寧心解毒方對急性心肌缺血模型大鼠心電圖、血流動力學(xué)及氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響，為臨床治療提供新思考。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 實(shí)驗(yàn)動物：50只健康清潔級Wiatar大鼠由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供［SCXK（京）2011-0011]，雌雄各半，體質(zhì)量（250±20） g。自然光線下，以標(biāo)準(zhǔn)飼料和無菌蒸餾水喂養(yǎng)。

1.2 試藥與儀器 活血寧心解毒方（組成為三七10 g，丹參 10 g，黃芪 15 g，刺五加 10 g，麥冬 10 g，甘松10 g，黃連 10 g，鹿銜草 10 g，酸棗仁 15 g，柴胡 10 g，水蛭10 g，甘草10 g），臨床每人用量為每日130 g生藥，藥材均由本院中藥房提供，加水煎煮，濃縮至質(zhì)量濃度1 g/mL，4℃冰箱保存?zhèn)溆?。水合氯醛（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），肝素鈉（天津生物化學(xué)制藥有限公司）。超氧化物歧化酶（SOD）、脂質(zhì)過氧化物（LPO）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）試劑盒購自武漢博士德公司。XD-7100型心電圖儀（上海醫(yī)療電子儀器廠生產(chǎn)），Bioteka Quant型酶標(biāo)儀 （上海坤肯生物化工有限公司），13R離心機(jī)（力康集團(tuán)力新儀器（上海）有限公司），MPG-3E血液凝聚儀 （上海斯隆醫(yī)電設(shè)備有限公司生產(chǎn)），OLYMPUSAU5400全自動生化分析儀（日本奧林巴斯有限公司），SOUTH990BZ血液黏度分析儀（重慶南方數(shù)控設(shè)備有限責(zé)任公司）。

1.3 模型制備 50只Wiatar大鼠，隨機(jī)取10只為空白對照組，剩余40只Wiatar大鼠水合氯醛麻醉后，自左側(cè)肋間開胸，暴露心臟，肺動脈圓錐及左房間找出冠狀動脈左前降支，在距起點(diǎn)3 mm處穿“0”號線結(jié)扎，將心臟送回胸腔，擠出胸腔內(nèi)血液，縫合胸壁，建立急性心肌缺血模型大鼠［4-5]。

1.4 分組與給藥 將造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型對照組，活血寧心解毒方低、中、高劑量組?？瞻讓φ战M和模型對照組給予蒸餾水2.0mL/kg灌胃，活血寧心解毒方低、中、高劑量組分別給予0.5、1.0、2.0mL/kg的活血寧心解毒方提取溶液。每天灌胃1次，連續(xù)灌胃2周。

1.5 標(biāo)本采集與檢測 灌胃給藥2周后，采用心電圖儀觀察各組大鼠的心電圖變化。心導(dǎo)管測定左房平均壓（mLAP），彩色多普勒超聲心動圖測定血流動力學(xué)的平均二尖瓣壓力差（mMPG）、肺動脈平均壓（mPAP）等指標(biāo)。處死各組大鼠，取同一位置的心室肌組織，固定24 h后，經(jīng)酒精脫水和二甲苯透明后，石蠟包埋，連續(xù)切片，切片間距5 mm，蘇木素-伊紅染色，樹膠封片后，光學(xué)顯微鏡觀察視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)。頸總動脈取血，取抗凝血1 mL，血黏度分析儀檢測全血黏度（WBV）、血漿黏度（PV）、紅細(xì)胞壓積（RCPP）及紅細(xì)胞聚集指數(shù)（RCAI）等血液流變學(xué)指標(biāo)。采用ELISA檢測血清SOD、LPO和GSH-PX水平，試劑盒購自武漢博士德公司，嚴(yán)格按照說明書操作。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠心肌組織病理學(xué)變化 見圖1。空白對照組肌束排列整齊，無炎性細(xì)胞浸潤和血管擴(kuò)張；模型對照組肌束排列不整齊，肌纖維斷裂，炎性細(xì)胞浸潤和血管擴(kuò)張，心肌纖維化及間質(zhì)水腫；活血寧心解毒方低劑量組肌束排列不整齊，炎性細(xì)胞浸潤、血管擴(kuò)張，心肌纖維化水腫減輕；活血寧心解毒方中劑量組炎性細(xì)胞浸潤、血管擴(kuò)張，心肌纖維化水腫明顯減輕；活血寧心解毒方高劑量組肌束排列整齊，無炎性細(xì)胞浸潤，輕度血管擴(kuò)張，輕度心肌纖維化。

圖1 各組大鼠心肌組織病理學(xué)變化（HE染色，400倍）

2.2 各組大鼠心電圖比較 見表1。與空白對照組比較，模型對照組大鼠ST段明顯抬高（P＜0.05）；與模型對照組比較，活血寧心解毒方組大鼠心電圖ST段抬高值明顯減少，且不同組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 各組大鼠心電圖ST段比較（mV，±s）

表1 各組大鼠心電圖ST段比較（mV，±s）

空白對照組比較，*P＜0.05；與模型對照組比較，△P＜0.05；與活血寧心解毒方低劑量組比較，#P＜0.05；與活血寧心解毒方中劑量組比較，◇P＜0.05。 下同。

組 別 n 1周 2周空白對照組 10 0.12±0.04 0.13±0.04模型對照組 10 0.27±0.08* 0.25±0.10*活血寧心解毒方低劑量組 10 0.21±0.07*△ 0.20±0.07*△活血寧心解毒方中劑量組 10 0.18±0.06*△# 0.17±0.06*△#活血寧心解毒方高劑量組 10 0.14±0.05△#◇ 0.12±0.05△#◇

2.3 各組大鼠血流動力學(xué)指標(biāo)比較 見表2。與空白對照組比較，模型對照組mLAP、mMPG和mPAP均顯著升高（P＜0.05）；與模型對照組比較，活血寧心解毒方組mLAP、mMPG和mPAP顯著降低，且活血寧心解毒方劑量越高，mLAP、mMPG 和 mPAP 越低（P＜0.05）。

表2 各組大鼠血流動力學(xué)指標(biāo)比較（kPa，±s）

表2 各組大鼠血流動力學(xué)指標(biāo)比較（kPa，±s）

組 別 n mLAP空白對照組 10 1.34±0.18模型對照組 10 4.46±0.32*活血寧心解毒方低劑量組 10 3.75±0.27*△活血寧心解毒方中劑量組 10 2.64±0.25*△#活血寧心解毒方高劑量組 10 1.81±0.21△#◇mMPG mPAP 0.97±0.17 2.26±0.51 2.61±0.24* 7.12±0.76*2.09±0.22*△ 5.71±0.65*△1.60±0.21*△# 4.82±0.56*△#1.23±0.19△#◇ 3.01±0.57△#◇

2.4 各組大鼠凝血功能指標(biāo)比較 見表3。與空白對照組比較，模型對照組大鼠的PV、RCPP及RCAI變化不明顯（P＞0.05），WBV 顯著升高（P＜0.05）；與模型對照組比較，活血寧心解毒方組大鼠全血黏度顯著降低（P＜0.05）。

表3 各組大鼠凝血功能指標(biāo)比較（±s）

表3 各組大鼠凝血功能指標(biāo)比較（±s）

組 別 n WBV（mPa·s）空白對照組 10 3.22±0.38模型對照組 10 5.72±0.62*活血寧心解毒方低劑量組 10 4.86±0.57*△活血寧心解毒方中劑量組 10 3.94±0.55*△#活血寧心解毒方高劑量組 10 3.34±0.51△#◇PV（mPa·s）0.97±0.17 1.02±0.21 1.05±0.22 1.03±0.23 1.01±0.20 RCPP（L/L） RCAI（%）3.24±0.75 43.15±2.65 3.41±0.79 48.41±3.24 3.37±0.77 45.17±3.27 3.34±0.76 44.28±2.96 3.21±0.78 45.13±2.57

2.5 各組大鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)比較 見表4。與空白對照組比較，模型對照組大鼠的SOD和GSH-PX水平明顯升高，LPO水平明顯降低（P＞0.05）；與模型對照組比較，活血寧心解毒方組大鼠SOD和GSH-PX升高，LPO 降低，且呈劑量依賴性（P＜0.05）。

表4 各組大鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)比較（±s）

表4 各組大鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)比較（±s）

組 別 n SOD（IU/mL）空白對照組 10 16.24±5.37模型對照組 10 34.51±6.31*活血寧心解毒方低劑量組 10 41.28±6.42*△活血寧心解毒方中劑量組 10 49.14±6.57*△#活血寧心解毒方高劑量組 10 65.22±7.27△#◇LPO（mmol/L）GSH-PX（μg/L）7.67±0.75 1.21±0.17 5.14±0.63* 0.52±0.13*4.19±0.59*△ 0.65±0.15*△3.71±0.51*△# 0.74±0.16*△#2.32±0.49△#◇ 0.87±0.17△#◇

3 討 論

缺血性心臟病主要病因是冠狀動脈病變，冠狀動脈粥樣硬化和冠狀動脈痙攣導(dǎo)致冠脈血流量突然下降，心肌急性缺血、缺氧而產(chǎn)生心絞痛或心肌梗死，心電圖表現(xiàn)出ST段改變［6-7]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為急性心肌缺相當(dāng)于“胸痹心痛”，是由正氣虧虛、痰濁瘀血、氣滯寒凝而引起心脈痹阻不暢，以膻中或左胸部疼痛為主，治宜益氣養(yǎng)心、活血解毒［8]。結(jié)扎左冠狀動脈前降支建立的急性心肌缺血模型大鼠，是評價(jià)抗心肌缺血藥物療效最常用模型［9-10]。本研究發(fā)現(xiàn)活血寧心解毒方組可減輕炎性細(xì)胞浸潤、血管擴(kuò)張，心肌纖維化水腫，心電圖ST段抬高值明顯減少，說明活血寧心解毒方各藥物能夠改善大鼠心肌病理改變，顯著抑制ST段的異常抬高。

模型大鼠給予不同劑量的活血寧心解毒方灌胃治療，活血寧心解毒方組mLAP、mMPG和mPAP顯著降低，且活血寧心解毒方劑量越高，mLAP、mMPG和mPAP越低，活血寧心解毒方組大鼠全血黏度顯著降低，活血寧心解毒方組大鼠SOD和GSH-PX升高，LPO降低，且呈劑量依賴性。大鼠血流動力學(xué)和心肌代謝改變與急性心肌缺血密切相關(guān)，心肌損傷細(xì)胞內(nèi)酶擴(kuò)散入血漿，可反映缺血心肌病變，缺氧導(dǎo)致乳酸生成，催化自由基的生成和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，加劇缺血心肌的組織損傷及功能障礙?；钛獙幮慕舛痉椒街腥咧寡?、消腫定痛，以暢達(dá)元?dú)庵缆?，丹參活血化瘀，芪益氣托毒外出，刺五加益氣健脾、補(bǔ)腎安神改善植物神經(jīng)功能紊亂，麥冬養(yǎng)陰清心除煩、益胃生津，甘松開郁理氣醒脾；酸棗仁寧心安神、補(bǔ)中益肝，黃連清熱解毒、清心除煩，鹿銜草祛風(fēng)除濕、活血調(diào)經(jīng)，柴胡疏散退熱、疏肝解郁、升陽舉陷，水蛭活血化瘀，甘草補(bǔ)脾益氣，調(diào)和藥性［11-12]。方中三七、當(dāng)歸、水蛭穩(wěn)定心肌細(xì)胞膜，改善心肌微循環(huán)，增加心肌營養(yǎng)及血量，刺五加改善神經(jīng)系統(tǒng)的功能，有增加心腦血流量，甘松、酸棗仁增加冠脈血流量，降低心肌耗氧量，改善心肌缺血、提高心肌耐氧能力，黃連抗心律失常，改善心肌缺血，增強(qiáng)心肌收縮力和減慢心率［13-15]?；钛獙幮慕舛救揭鏆怵B(yǎng)心、活血解毒，以達(dá)心氣漸充，心陰得養(yǎng)，氣血流暢。

綜上所述，活血寧心解毒方可減輕急性心肌缺血模型大鼠炎性細(xì)胞浸潤、血管擴(kuò)張、心肌纖維化水腫，逆轉(zhuǎn)心電圖、血流動力學(xué)、凝血及氧化應(yīng)激指標(biāo)，改善急性心肌缺血。

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