蔡琳 隋大鳴 付海鈺 査鵬 古小平 鞏固

異氟醚是一種常用的吸入性麻醉劑，能夠阻礙大腦海馬區(qū)功能并導(dǎo)致記憶和認(rèn)知功能障礙[1]。有大量研究發(fā)現(xiàn)，誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡、氧化應(yīng)激和線(xiàn)粒體功能障礙是異氟醚產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用的主要因素[2]。小窩是已分化細(xì)胞的細(xì)胞膜上凹陷，小窩蛋白是小窩的主要成分，包含3個(gè)家族成員，即小窩蛋白1(caveolin-1，Cav-1)、Cav-2和Cav-3。Cav-1是細(xì)胞“脂筏”的重要標(biāo)記蛋白，廣泛參與細(xì)胞遷移、腫瘤形成、神經(jīng)發(fā)育以及干細(xì)胞增殖活動(dòng)[3]。Cav-2與Cav-1通常表達(dá)于非肌肉細(xì)胞中，而Cav-3則在肌肉細(xì)胞中表達(dá)豐富。三者在哺乳動(dòng)物大腦中均有表達(dá)，參與細(xì)胞胞吞、膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程，同時(shí)也參與腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain derived neurotrophic factor，BDNF)/酪氨酸激酶受體B(tyrosine receptor kinase B，TrkB)、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)等多種細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，對(duì)細(xì)胞正常生命活動(dòng)具有重要意義[4-6]。小窩蛋白在神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育及正常功能中發(fā)揮不可或缺的重要作用[7-8]。本研究探索了異氟醚對(duì)小窩蛋白表達(dá)的影響及小窩蛋白的作用，旨在闡明異氟醚產(chǎn)生神經(jīng)毒性的作用機(jī)制。

1 材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料HEK293細(xì)胞購(gòu)自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)，阿糖胞苷購(gòu)自上海生工，異氟醚購(gòu)自上海雅培，DMEM培養(yǎng)基、胰酶、胎牛血清、內(nèi)切酶BamHⅠ、SalⅠ、pDC315腺病毒質(zhì)粒、腺病毒包裝質(zhì)粒、Trizol試劑、cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒、Fast SYBRTMGreen Master Mix購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher公司，Cav-1抗體、Cav-2抗體、Cav-3抗體、BDNF抗體、ERK1/2抗體、p-ERK1/2抗體、TrkB抗體、內(nèi)參GAPDH抗體購(gòu)自美國(guó)R&D system公司，聚偏氟乙烯膜、Braford蛋白濃度測(cè)定試劑盒、噻唑藍(lán)(MTT)試劑盒、ECL試劑盒、二甲基亞砜購(gòu)自江蘇碧云天生物公司。

1.2動(dòng)物SPF級(jí)SD大鼠共40只，購(gòu)自北京維通利華公司〔許可證號(hào)SCXK(京)2016-0006〕，雌雄各半，7周齡。隨機(jī)分為對(duì)照組、異氟醚1組(ISO1)、異氟醚2組(ISO2)、異氟醚3組(ISO3)，每組10只。

1.3方法

1.3.1異氟醚處理大鼠模型：大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，自由飲食，飼養(yǎng)溫度(21±2)℃，濕度30%～70%，12 h/12 h光照周期。調(diào)整麻醉機(jī)氣體總流量為2 L/min，對(duì)照組吸入40%氧氣2 h，ISO1、ISO2、ISO3組大鼠首先吸入3%(體積分?jǐn)?shù))異氟醚，待夾尾反射消失后，分別調(diào)整異氟醚濃度為1.2%、1.8%、2.4%(均為體積分?jǐn)?shù))，維持2 h，麻醉同時(shí)吸入40%氧氣。麻醉結(jié)束后待大鼠自然蘇醒。

1.3.2Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)：大鼠蘇醒24 h后進(jìn)行5 d水迷宮實(shí)驗(yàn)。Morris水迷宮裝置直徑1.2 m、高0.5 m，并平均劃分為四個(gè)象限，將平臺(tái)置于第二象限中央，并低于水面2 cm，水溫維持(22±4)℃。實(shí)驗(yàn)前將大鼠置于水迷宮裝置熟悉環(huán)境，同時(shí)剔除不會(huì)游泳大鼠。前4 d進(jìn)行定向航行實(shí)驗(yàn)：將大鼠從4個(gè)象限上不同的入水點(diǎn)放入水中，記錄大鼠從水中尋找并爬上平臺(tái)的時(shí)間即為逃避潛伏期(escape latency)。每只大鼠每天訓(xùn)練4次，每次間隔0.5 h。第5天進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)：將平臺(tái)撤除，將大鼠從第四象限入水點(diǎn)放入水中，記錄大鼠在第二象限(原平臺(tái)放置處)停留時(shí)間(總時(shí)間設(shè)定為1 min)，即為空間探索時(shí)間。

1.3.3大鼠原代海馬神經(jīng)元分離、培養(yǎng)：具體方法見(jiàn)參考文獻(xiàn)[9]。取8只初生的SD大鼠(孕鼠購(gòu)自北京維通利華公司)分離兩側(cè)海馬，將組織剪碎置于離心管，加入1.25 g/L胰酶于37℃、5%(體積分?jǐn)?shù))CO2培養(yǎng)箱消化20 min，然后加入含10%(體積分?jǐn)?shù))胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基終止消化，離心(1000 r/min，5 min)洗滌2次。隨后用200目篩網(wǎng)過(guò)濾，臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)，將細(xì)胞水平調(diào)整為5×104個(gè)/mL并接種于包被有多聚賴(lài)氨酸的培養(yǎng)板上，培養(yǎng)于37℃、5%(體積分?jǐn)?shù))CO2培養(yǎng)箱中。培養(yǎng)3～5 d后加入終濃度為3 μg/mL的阿糖胞苷以抑制非神經(jīng)細(xì)胞的增殖。此后，海馬神經(jīng)元培養(yǎng)于含10%(體積分?jǐn)?shù))馬血清的DMEM培養(yǎng)基中，每周換液3次。培養(yǎng)2周后，采集海馬神經(jīng)元備用。將海馬神經(jīng)元隨機(jī)分為對(duì)照組、異氟醚(ISO)組、對(duì)照腺病毒轉(zhuǎn)染(Ad-GFP)+ISO組、Cav-1過(guò)表達(dá)腺病毒轉(zhuǎn)染(Ad-Cav-1)+ISO組，每組樣本數(shù)10。ISO組細(xì)胞于2.4%異氟醚環(huán)境中暴露2 h，Ad-GFP+ISO組和Ad-Cav-1+ISO組細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染腺病毒Ad-GFP和Ad-Cav-1后于2.4%異氟醚環(huán)境中暴露2 h，對(duì)照組細(xì)胞則添加等體積溶媒處理并置正常環(huán)境中培養(yǎng)。

1.3.4腺病毒過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建與轉(zhuǎn)染：擴(kuò)增Cav-1基因全長(zhǎng)，內(nèi)切酶BamHⅠ和SalⅠ雙酶切后插入pDC315腺病毒質(zhì)粒載體(重組pDC315-Cav-1質(zhì)粒)。在脂質(zhì)體的輔助作用下，pDC315-Cav-1重組質(zhì)粒與腺病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染工具細(xì)胞HEK293。轉(zhuǎn)染48 h后反復(fù)凍融收集腺病毒Ad-Cav-1，擴(kuò)增并測(cè)序，鑒定重組腺病毒。海馬神經(jīng)元細(xì)胞異氟醚處理前48 h，將海馬神經(jīng)元細(xì)胞按照1×105/孔接種于六孔細(xì)胞培養(yǎng)板上轉(zhuǎn)染腺病毒Ad-GFP或者Ad-Cav-1，轉(zhuǎn)染復(fù)數(shù)均為150 MOI。轉(zhuǎn)染24 h后，熒光顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率，同時(shí)利用Western blot檢測(cè)Cav-1的相對(duì)表達(dá)量。

1.3.5熒光實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)分析：利用Trizol試劑提取大鼠海馬組織(異氟醚處理后第5天取大鼠海馬組織)或海馬神經(jīng)元細(xì)胞總RNA(異氟醚處理后24 h收集細(xì)胞)，cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA第一鏈用作擴(kuò)增模板。擴(kuò)增體系：總體積20 μL，上、下游引物各0.5 μL，F(xiàn)ast SYBRTMGreen Master Mix 10 μL，模板 2 μL，ddH2O 7 μL。擴(kuò)增條件：95℃ 2 min；94℃ 20 s，60℃ 20 s，40 個(gè)循環(huán)，溶解曲線(xiàn)溫度 65～95℃。使用β-actin作為定量?jī)?nèi)參，根據(jù)PCR反應(yīng)得出的循環(huán)閾值(cycle threshold value，Ct)，由2-ΔΔCt公式計(jì)算目的基因相對(duì)表達(dá)量。本實(shí)驗(yàn)使用基因擴(kuò)增引物有：Cav-1：上游引物5′-AGTGCATCAGCCGTGTCTAT-3′，下游引物5′-TCACGGCTGTGATAGCAACTT-3′；Cav-2：上游引物5′ -TTGGCCTTCATTGCGGGTAT-3′，下游引物5′-AGAGGAGAAGATGCGCCCTA-3′；Cav-3，上游引物5 ′-AGATCTGGAGGCACGGATCA-3′，下游引物5′-ACGCCATCGAAGCTGTAAGT-3′；β-actin，上游引物5′-GGCTCTATCCTGGCCTCACT-3′，下游引物5′ -GGTGTAAAACGCAGCTCAGTAA-3′。

1.3.6Western blot分析：異氟醚處理后第5天取大鼠海馬組織，體外細(xì)胞經(jīng)異氟醚處理后24 h收集海馬神經(jīng)元。將分離的大鼠海馬組織和海馬神經(jīng)元細(xì)胞勻漿添加RIPA裂解液〔50 mmol/L Tris(pH 7.4)、150 mmol/L氯化鈉、1%(質(zhì)量濃度)Triton X-100、1%(質(zhì)量濃度)去氧膽酸鈉、0.1%(質(zhì)量濃度)SDS、0.1 g/L PMSF〕提取總蛋白，利用Braford法測(cè)定蛋白濃度。取40 μg蛋白上樣，十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離蛋白。電泳結(jié)束后將蛋白通過(guò)濕法轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯膜(PVDF)上，將PVDF膜用5%(質(zhì)量濃度)脫脂奶粉在室溫下封閉2 h。TPBS漂洗3次，添加第一抗體在4℃中封閉過(guò)夜。第一抗體有Cav-1抗體(1∶800)、Cav-2抗體(1∶800)、Cav-3抗體(1∶800)、BDNF抗體(1∶1000)、ERK1/2抗體(1∶1000)、p-ERK1/2抗體(1∶1000)、TrkB抗體(1∶1000)、內(nèi)參GAPDH抗體(1∶1000)。T-PBS漂洗3次，添加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗小鼠第二抗體(1∶5000)于37℃孵育2 h，ECL試劑盒顯影，利用Image J軟件檢測(cè)相對(duì)表達(dá)量。

1.3.7細(xì)胞存活檢測(cè)：噻唑藍(lán)法(MTT)檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞存活。將細(xì)胞按1×105個(gè)/孔接種于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，加入10%(體積分?jǐn)?shù))胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)48 h，隨后腺病毒Ad-Cav-1轉(zhuǎn)染并經(jīng)2.4%異氟醚處理后，分別于第1、2、3、4、5天進(jìn)行MTT檢測(cè)。每孔加入20 μL MTT(5 mg/mL)后培養(yǎng) 4 h。去掉上清，每孔150 μL加入二甲基亞砜(DMSO)?；靹蚝笥妹笜?biāo)儀于490 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，符合正態(tài)性分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組均數(shù)比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)麻醉蘇醒后第2、3天，ISO1、ISO2和ISO3組大鼠逃避潛伏期顯著長(zhǎng)于對(duì)照組(P<0.05)；第4天，ISO2和ISO3組大鼠逃避潛伏期明顯長(zhǎng)于對(duì)照組和ISO1組(P<0.05)；第1、5天，4組大鼠逃避潛伏期無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。各組大鼠空間探索時(shí)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2大鼠海馬區(qū)CavmRNA表達(dá)4組大鼠海馬區(qū)Cav-1、Cav-2、Cav-3 mRNA表達(dá)水平比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(FCav-1=104.252，F(xiàn)Cav-2=46.638，F(xiàn)Cav-3=9.264，均P<0.01)，且兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖1。

表1 各組大鼠麻醉蘇醒后不同時(shí)間逃避潛伏期和空間探索時(shí)間比較(±s，s)

注：ISO1、ISO2、ISO3組：分別用異氟醚1.2%、1.8%、2.4%干預(yù)，圖1～5同；與對(duì)照組比較，aP<0.05；與ISO1組比較，bP<0.05；與ISO2組比較，cP<0.05

注：Cav：小窩蛋白，圖2、3、6、7同；與對(duì)照組比較，aP<0.05；與ISO1組比較，bP<0.05；與ISO2組比較，cP<0.05 圖 1 熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)各組大鼠海馬區(qū)Cav mRNA相對(duì)表達(dá)量

2.3各組大鼠海馬區(qū)Cav蛋白表達(dá)4組大鼠海馬區(qū)Cav-1、Cav-2、Cav-3 蛋白表達(dá)水平比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(FCav-1=111.279，F(xiàn)Cav-2=45.608，F(xiàn)Cav-3=69.854，均P<0.01)，且兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖2、3。

注：GAPDH：甘油醛-3-磷酸脫氫酶，圖4、6同 圖 2 Western blot檢測(cè)各組大鼠海馬區(qū)Cav蛋白印跡條帶圖

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與ISO1組比較，bP<0.05；與ISO2組比較，cP<0.05 圖 3 Western blot檢測(cè)各組大鼠海馬區(qū)Cav蛋白相對(duì)表達(dá)量

2.4各組大鼠海馬區(qū)BDNF、p-ERK1/2和TrkB表達(dá)各組大鼠海馬BDNF、TrkB和p-ERK1/2蛋白表達(dá)水平比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(FBDNF=20.593，F(xiàn)TrkB=38.544，F(xiàn)p-ERK1/2=26.763，均P<0.01)；與對(duì)照組比較，ISO1、ISO2和ISO3組大鼠BDNF、TrkB和p-ERK1/2蛋白表達(dá)降低(P<0.05)。而各組大鼠ERK1/2蛋白水平比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=1.052，P=0.305)。見(jiàn)圖4、5。

注：BDNF：腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，TrkB：酪氨酸激酶受體B，ERK1/2：細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2，p-ERK1/2：磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2；圖5同 圖 4 Western blot檢測(cè)大鼠海馬區(qū)BDNF、TrkB、ERK1/2和p-ERK1/2印跡條帶圖

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與ISO1組比較，bP<0.05；與ISO2組比較，cP<0.05 圖 5 Western blot檢測(cè)大鼠海馬區(qū)BDNF、TrkB、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白相對(duì)表達(dá)水平

2.5過(guò)表達(dá)Cav-1拮抗異氟醚誘導(dǎo)的細(xì)胞活性抑制與對(duì)照組比較，異氟醚處理能夠明顯降低海馬神經(jīng)元的存活，并抑制細(xì)胞Cav-1的表達(dá)(F=229.593，P<0.01)。與ISO組及Ad-GFP組比較，Ad-Cav-1組細(xì)胞Cav-1的表達(dá)增加，細(xì)胞存活率升高(F2 d=6.798，F(xiàn)3 d=40.231，F(xiàn)4 d=88.646，F(xiàn)5 d=82.765，均P<0.01)。見(jiàn)圖6～8。

注：ISO：異氟醚組，Ad-GFP+ISO：對(duì)照腺病毒轉(zhuǎn)染+異氟醚組，Ad-Cav-1+ISO：Cav-1過(guò)表達(dá)腺病毒轉(zhuǎn)染+異氟醚組；圖7、8同 圖 6 Western blot大鼠海馬神經(jīng)元Cav-1蛋白印跡條帶圖

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與Ad-GFP+ISO組比較，bP<0.05 圖 7 Western blot檢測(cè)大鼠海馬神經(jīng)元Cav-1相對(duì)表達(dá)量

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與Ad-GFP+ISO比較，bP<0.05 圖 8 大鼠海馬神經(jīng)元活性檢測(cè)(MMT法)

3 討論

異氟醚是臨床上廣泛使用的吸入性全身麻醉劑，但研究發(fā)現(xiàn)異氟醚對(duì)大腦海馬神經(jīng)元以及學(xué)習(xí)和記憶功能具有損害作用。因此闡明其作用機(jī)制對(duì)于制定相關(guān)臨床規(guī)范、減輕其副作用具有重要意義。Morris水迷宮是觀(guān)察動(dòng)物模型學(xué)習(xí)和記憶功能損傷的常用經(jīng)典實(shí)驗(yàn)裝置[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，盡管麻醉蘇醒后第1天各組大鼠平均逃避潛伏期無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但從第2天起，各異氟醚處理組大鼠的逃避潛伏期明顯長(zhǎng)于對(duì)照組，隨著蘇醒后時(shí)間的增加，至第5天各組大鼠平均逃避潛伏期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且各組大鼠的空間探索時(shí)間也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明在1.2%至2.4%濃度下異氟醚對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響具有時(shí)效性；同時(shí)，在蘇醒后第4天，低劑量異醚處理大鼠的平均逃避潛伏期與對(duì)照組相當(dāng)，而明顯短于另外兩處理組，提示較低劑量的異氟醚對(duì)大鼠的影響也相對(duì)較小，大鼠學(xué)習(xí)能力恢復(fù)較快。

Zhou等[11]研究發(fā)現(xiàn)糖尿病大鼠空間記憶能力與海馬區(qū)Cav-1的表達(dá)水平相關(guān)。海馬神經(jīng)元突觸可塑性影響動(dòng)物的空間學(xué)習(xí)能力[12]，而Cav-1參與了海馬神經(jīng)元突觸可塑性調(diào)節(jié)[13]。本實(shí)驗(yàn)在大鼠蘇醒后24 h檢測(cè)大鼠海馬組織Cav-1、Cav-2和Cav-3 mRNA和蛋白的表達(dá)，盡管在此時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力尚無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，然而細(xì)胞基因表達(dá)的變化通常對(duì)外界刺激反應(yīng)較快。本實(shí)驗(yàn)即發(fā)現(xiàn)，在大鼠蘇醒后24 h時(shí)間點(diǎn)，Cav-1、Cav-2和Cav-3 mRNA和蛋白水平均下調(diào)，表明異氟醚可作用于海馬區(qū)組織，誘導(dǎo)小窩蛋白家族表達(dá)變化。既往研究發(fā)現(xiàn)異氟醚可作用于海馬區(qū)神經(jīng)元并影響突觸可塑性[14]，因此異氟醚的神經(jīng)毒性作用可能與小窩蛋白有關(guān)。另有研究發(fā)現(xiàn)異氟醚能夠促進(jìn)新生大鼠海馬組織p38和JNK的磷酸化而抑制ERK1/2磷酸化并誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元凋亡[15-16]。本研究結(jié)果顯示，與小窩蛋白家族表達(dá)變化相對(duì)應(yīng)，異氟醚處理后大鼠海馬區(qū)BDNF和TrkB的表達(dá)明顯降低，信號(hào)蛋白ERK1/2蛋白表達(dá)總量未受到異氟醚影響，然而其活化蛋白p-ERK1/2表達(dá)水平明顯降低，表明異氟醚具有抑制神經(jīng)細(xì)胞或膠質(zhì)細(xì)胞中ERK1/2信號(hào)的傳導(dǎo)。小窩蛋白是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的重要介質(zhì)，異氟醚是否通過(guò)小窩蛋白家族影響ERK1/2信號(hào)在海馬神經(jīng)元中的傳導(dǎo)，尚需要進(jìn)一步研究證實(shí)。

本研究體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，2.4%濃度異氟醚處理顯著降低大鼠神經(jīng)元的存活，同時(shí)下調(diào)Cav-1蛋白表達(dá)水平，進(jìn)一步驗(yàn)證了異氟醚對(duì)神經(jīng)元的細(xì)胞毒性作用。由于大鼠體內(nèi)Cav-1的下調(diào)幅度大于Cav-2和Cav-3蛋白(2.4%濃度)，因此本課題組利用Cav-1過(guò)表達(dá)腺病毒載體感染神經(jīng)元細(xì)胞，驗(yàn)證Cav-1在大鼠海馬神經(jīng)元中的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Cav-1高表達(dá)的海馬神經(jīng)元細(xì)胞存活率高于對(duì)照轉(zhuǎn)染細(xì)胞，證明Cav-1可拮抗異氟醚對(duì)神經(jīng)元的毒性作用。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示，異氟醚可影響大鼠學(xué)習(xí)記憶能力并降低海馬區(qū)小窩蛋白的表達(dá)，過(guò)表達(dá)Cav-1可拮抗異氟醚的體外毒性作用。

[1]Jevtovic-Todorovic V. Good gas，bad gas：isoflurane，carbon monoxide，and which is which?[J]. Anesth Analg，2014，118(6)：1160-1162.

[2]Quiroz-Padilla MF，Guillazo-Blanch G，Sanchez MY，et al. Effects of excitotoxic lesion with inhaled anesthetics on nervous system cells of rodents[J]. Curr Pharm Des，2017.Epub ahead of print.

[3]呂建鑫，張亞男，陶慶松，等. 小窩蛋白-1與乳腺癌相關(guān)性的研究進(jìn)展[J]. 中華臨床醫(yī)師雜志(電子版)，2012，6(9)：2460-2463.

[4]Badaut J，Ajao DO，Sorensen DW，et al. Caveolin expression changes in the neurovascular unit after juvenile traumatic brain injury：signs of blood-brain barrier healing?[J]. Neuroscience，2015，285：215-226.

[5]Head BP，Hu Y，F(xiàn)inley JC，et al. Neuron-targeted caveolin-1 protein enhances signaling and promotes arborization of primary neurons[J]. J Biol Chem，2011，286(38)：33310-33321.

[6]Gortazar AR，Martin-Millan M，Bravo B，et al. Crosstalk between caveolin-1/extracellular signal-regulated kinase(ERK)and beta-catenin survival pathways in osteocyte mechanotransduction[J]. J Biol Chem，2013，288(12)：8168-8175.

[7]Wang S，Kan Q，Sun Y，et al. Caveolin-1 regulates neural differentiation of rat bone mesenchymal stem cells into neurons by modulating Notch signaling[J]. Int J Dev Neurosci，2013，31(1)：30-35.

[8]Li X，Mcclellan ME，Tanito M，et al. Loss of caveolin-1 impairs retinal function due to disturbance of subretinal microenvironment[J]. J Biol Chem，2012，287(20)：16424-16434.

[9]扈俊華，梁羽冰，覃怡，等. 右美托咪定預(yù)處理對(duì)丙泊酚孵育的大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞活力的影響[J]. 臨床麻醉學(xué)雜志，2013，29(5)：488-490.

[10]劉鵬飛，胡艷婷，李天佐，等. 阿托伐他汀預(yù)處理對(duì)異氟醚麻醉小鼠認(rèn)知功能的影響[J]. 中華麻醉學(xué)雜志，2017，37(9)：1082-1086.

[11]Zhou H，Liu J，Ren L，et al. Relationship between [corrected] spatial memory in diabetic rats and protein kinase Cgamma，caveolin-1 in the hippocampus and neuroprotective effect of catalpol[J]. Chin Med J(Engl)，2014，127(5)：916-923.

[12]Zhu D，Li C，Swanson AM，et al. BAI1 regulates spatial learning and synaptic plasticity in the hippocampus[J]. J Clin Invest，2015，125(4)：1497-1508.

[13]Liu Y，Liang Z，Liu J，et al. Downregulation of caveolin-1 contributes to the synaptic plasticity deficit in the hippocampus of aged rats[J]. Neural Regen Res，2013，8(29)：2725-2733.

[14]Uchimoto K，Miyazaki T，Kamiya Y，et al. Isoflurane impairs learning and hippocampal long-term potentiation via the saturation of synaptic plasticity[J]. Anesthesiology，2014，121(2)：302-310.

[15]Liao Z，Cao D，Han X，et al. Both JNK and P38 MAPK pathways participate in the protection by dexmedetomidine against isoflurane-induced neuroapoptosis in the hippocampus of neonatal rats[J]. Brain Res Bull，2014，107：69-78.

[16]王飛，李玉娟，曾敏婷，等. 右美托咪定通過(guò)抑制p38和JNK活化減少異氟醚誘導(dǎo)的新生大鼠海馬神經(jīng)元凋亡[J]. 中國(guó)病理生理雜志，2013，29(9)：1651-1656.