云南中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院，云南 昆明 650500

在《本草綱目》中，花類藥物至少在80種以上，約占植物類藥物的1/10以上[1]?；愘|(zhì)地輕靈[2]，花類藥物藥性較為平和，副作用小，是各名家的常用藥物[3-11]，在婦科疾病中應(yīng)用甚廣。惡性腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康和生命的疾病，抗腫瘤藥物長春花堿由夾竹桃科植物長春花中提取而來。云南鮮花四季盛開，花朵品質(zhì)高、產(chǎn)量大[12]。筆者對(duì)云南常見的花朵進(jìn)行抗腫瘤活性篩選，為進(jìn)一步開發(fā)利用“云花”、“云藥”提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞、試劑和儀器 乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞和肺癌A549細(xì)胞購自中國科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所。所有花朵采集自云南中醫(yī)學(xué)院呈貢校區(qū)和昆明醫(yī)科大學(xué)呈貢校區(qū)。乙醇(天津市大茂化學(xué)試劑廠)，三氧化二砷(云南文山金馳砒霜有限公司)。RPMI1640培養(yǎng)液(美國Hyclone公司)；胎牛血清(蘭州百靈生物技術(shù)有限公司)；MTS一步法細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒(美國Promega公司)。電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司)；SK3300LH 型超聲清洗機(jī)(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)；CO2培養(yǎng)箱(美國Thermo公司)；全自動(dòng)酶標(biāo)儀(美國Bio-Rad公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品制備 采集茼蒿菊、桂花、鳳仙、蜀葵、牽牛、蔥蓮、百日菊、葉子花、大麗花、杜鵑等云南常見的花朵。50℃烘干，干燥花朵粉碎后浸泡在10倍量的90%乙醇溶液中過夜，過濾后，將濾渣超聲提取，重復(fù)提取兩次，濾液合并后濃縮，得到樣品。

1.2.2 活性測(cè)試 取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞接種于96孔板，每孔1×103個(gè)細(xì)胞。置CO2培養(yǎng)箱中37℃孵育24 h后加入樣品。試驗(yàn)組用DMSO溶解，96孔板中DMSO的濃度為千分之一；陰性對(duì)照組加入含百分之一DMSO的培養(yǎng)液10 μL，DMSO終濃度為千分之一；陽性對(duì)照組加入5 μL五十分之一DMSO的培養(yǎng)液與5 μL三氧化二砷溶液，三氧化二砷溶液終濃度為0.5 mg/L；每組設(shè)6復(fù)孔，每個(gè)實(shí)驗(yàn)分別重復(fù)3次。放入37℃ CO2培養(yǎng)箱中。48 h后加入20 μL MTS溶液，37℃ CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育2 h，用全自動(dòng)酶標(biāo)儀在490 nm測(cè)定吸光度(A)。在測(cè)試十種花對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的抑制作用的過程中，試驗(yàn)組花朵提取物的濃度均為20 mg/L。進(jìn)一步測(cè)試蔥蓮花對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞和肺癌A549細(xì)胞的抑制作用時(shí)，試驗(yàn)組蔥蓮提取物的濃度為20 mg/L、4 mg/L、0.8 mg/L。

2 結(jié)果

2.1 10種花對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的抑制作用 采集了云南常見的10種花朵，分別為茼蒿菊、桂花、鳳仙、蜀葵、牽牛、蔥蓮、百日菊、葉子花、大麗花、杜鵑等。將這10種花朵的提取物作為試驗(yàn)組，測(cè)試其對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的增殖抑制活性(圖1)。其中，蔥蓮的抑制率(43.07±4.52%)與陽性對(duì)照的抑制率(47.62±3.24%)相近。

2.2 蔥蓮對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞和肺癌A549細(xì)胞的抑制作用 為了進(jìn)一步探索蔥蓮的抗腫瘤活性，考察了蔥蓮提取物對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞和肺癌A549細(xì)胞的增殖抑制作用(圖2)。試驗(yàn)結(jié)果顯示，蔥蓮提取物的濃度為20 mg/L、4 mg/L、0.8 mg/L對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的抑制率分別為(43.06±1.59)%、(30.20±3.93)%、(2.29±2.12)%；對(duì)肺癌A549細(xì)胞的抑制率分別為(56.96±0.48)%、(13.85±1.52)%、(0.36±2.71)%;增殖抑制作用呈現(xiàn)量效關(guān)系。

3 討論

藥物是治療惡性腫瘤的重要方法之一，抗腫瘤藥物的研究與開發(fā)已進(jìn)入一個(gè)嶄新的時(shí)代[13]。目前應(yīng)用的很多抗腫瘤藥物的副作用較大，而花類藥物藥性較為平和[2]，從花中可能篩選到副作用較小的抗腫瘤藥物。筆者采集了云南常見的10種花朵，將其提取物進(jìn)行抗腫瘤活性篩選。大部分花朵對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的增殖無抑制作用，而令人欣喜的是其中蔥蓮花的提取物對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞和肺癌A549細(xì)胞的增殖抑制活性較好，與陽性對(duì)照三氧化二砷抑制率相當(dāng)，并且呈劑量效應(yīng)關(guān)系。

蔥蓮(Zephyranthescandida(Lindl.)Herb.)，又名玉簾、蔥蘭等，多年生草本植物，在云南各處有種植。有平肝熄風(fēng)、散熱解毒的功能；用于小兒急驚風(fēng)、癲癇；外用于癰瘡紅腫[14]。楊簡(jiǎn)賽等從蔥蓮鱗莖中分離得到6個(gè)化合物[15]，Zengwei Luo等[16]從蔥蓮整株植物中提取分離到具有抗腫瘤活性的生物堿，尚無對(duì)蔥蓮的花朵進(jìn)行化學(xué)成分及藥理活性的相關(guān)報(bào)道。筆者對(duì)蔥蓮花朵進(jìn)行抗腫瘤活性測(cè)試，提取物濃度為4 mg/L即顯示出顯著的抗腫瘤活性，并有劑量效應(yīng)關(guān)系。為蔥蓮在抗腫瘤藥物的開發(fā)提供了依據(jù)。

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