李澤宇，齊亞銀

（1.石河子大學(xué)，石河子 832003；2.新疆農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，昌吉 831100）

0 引言

禽白血病是一種腫瘤性疾病，由禽白血病病毒和禽肉瘤病病毒引起。目前，在世界大多數(shù)養(yǎng)雞業(yè)發(fā)達(dá)國(guó)家已基本控制，但在我國(guó)本病的感染和流行仍十分普遍，尤其是地方品系的雞群[1-2]。雞群感染此病會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的損失[3]，一是產(chǎn)生腫瘤，導(dǎo)致雞群發(fā)??；二是出現(xiàn)系列并發(fā)癥，嚴(yán)重影響經(jīng)濟(jì)效益；三是還可以導(dǎo)致雞群免疫抑制，造成繼發(fā)感染等。

近年來，新疆養(yǎng)雞場(chǎng)禽白血病發(fā)病較多，給養(yǎng)雞業(yè)造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失。為了解新疆某規(guī)?；夥N雞場(chǎng)禽白血病的感染情況，分兩批從4棟雞舍采集血清800份，每批400份，進(jìn)行ALV-J 亞群抗體檢測(cè)，并對(duì)雞場(chǎng)采取了凈化措施。現(xiàn)將監(jiān)測(cè)及凈化情況報(bào)告如下。

1 材料與方法

美國(guó)愛德士（IDEXX）公司生產(chǎn)的白血病ELISA抗體檢測(cè)試劑盒、自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國(guó)BioTek儀器有限公司）、微量移液器（eppendorf公司）、恒溫培養(yǎng)箱（北京市光明醫(yī)療儀器廠）、振蕩器、高壓滅菌鍋、離心機(jī)等實(shí)驗(yàn)所需儀器設(shè)備。

2 實(shí)驗(yàn)樣品

2.1 血清樣品的準(zhǔn)備

采集新疆昌吉市某規(guī)?；夥N雞場(chǎng)血清數(shù)共800份，分兩批采集，每批400份。第一批采集14～15周齡的雞群，其中，14周齡采集A、B圈血清各100份、15周齡采集C、D圈血清各100份。第二批采集21～22周齡的雞群，其中，21周齡采集A、B圈血清各100份、22周齡采集C、D圈血清各100份。

2.2 樣品采集時(shí)間、方法及樣品儲(chǔ)存

血清共分8次均等采集，分別為2016年7-8月、2016年9-10月；主要采集方法為翅靜脈采血法，血液采集后用離心機(jī)提取血清即樣品，置于-20℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

3 試驗(yàn)方法與判定

3.1 血清稀釋

樣品：檢測(cè)前用樣品稀釋液將被檢樣品進(jìn)行500倍稀釋。

對(duì)照：注意不要稀釋對(duì)照。不同的樣品要注意換吸頭。在將樣品加入檢測(cè)板前要將樣品充分混勻。

3.2 試驗(yàn)方法步驟

使用前，將所有試劑恢復(fù)到室溫，并將其混勻后再進(jìn)行使用。

（1）標(biāo)記：將抗原包被板取出并做好標(biāo)記。

（2）加樣：在板的相應(yīng)孔中，分別加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和被檢樣品（已稀釋）各100 μL，加蓋后，在室溫下孵育30 min。

（3）洗板：將各孔的液體甩去，每個(gè)孔中加入350 μL的純水或超純水。第1次加入純水后浸泡2 min，然后將各孔的液體甩掉，以上步驟再重復(fù)4次（無需浸泡）。用吸水紙輕拍使之吸干。注意在每次洗滌之間和加下一種液體前不要讓板干燥或放置時(shí)間過久。

（4）加酶標(biāo)抗體：每孔加入100 μL酶標(biāo)抗體，室溫孵育30 min。

（5）洗板：重復(fù)（3）步驟。

（6）加底物液：每孔中加入100 μL的TMB底物，室溫下孵育15 min。

（7）加終止液：每孔中加入100 μL的終止液終止反應(yīng)。

（8）讀數(shù)：測(cè)定并記錄各孔在650 nm波長(zhǎng)的吸光值（A650）。

3.3 結(jié)果判定

（1）試驗(yàn)結(jié)果需同時(shí)符合下列條件：

陽性對(duì)照平均OD值與陰性對(duì)照平均OD值之差大于0.100。

陰性對(duì)照平均OD值小于或等于0.150。

（2）判定：

陽性對(duì)照和樣品的OD值應(yīng)經(jīng)陰性對(duì)照OD值校正。陽性對(duì)照：OD陽平均值－OD陰平均值，樣品：OD樣平均值－OD陰平均值；S/P=（OD樣平均值－OD陰平均值）/（OD陽平均值－OD陰平均值）。

S/P比值小于或等于0.60，判為陰性。S/P比值大于0.60（抗體滴度大于844），判為陽性，表明曾感染ALV-J。

4 凈化措施

該肉種雞場(chǎng)是父母代種雞場(chǎng)，飼養(yǎng)管理實(shí)行嚴(yán)格的全進(jìn)全出飼養(yǎng)方式。針對(duì)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)的問題，采取了嚴(yán)格的淘汰措施，加強(qiáng)雞舍環(huán)境衛(wèi)生管理與消毒，加強(qiáng)雞舍通風(fēng)，控制人員出入等措施。

4.1 淘汰措施

對(duì)檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)的ALV-J亞群陽性雞只全部淘汰，徹底消除傳染來源。同時(shí)，在日常飼養(yǎng)管理過程中，加強(qiáng)對(duì)雞群的觀察，對(duì)有臨床癥狀的病雞及已死亡雞只及時(shí)淘汰，并進(jìn)行無害化處理。

4.2 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

為保證雞群的營(yíng)養(yǎng)狀況，采用全價(jià)飼料喂養(yǎng)，確保雞只營(yíng)養(yǎng)均衡。

4.3 加強(qiáng)環(huán)境控制

嚴(yán)格執(zhí)行養(yǎng)雞場(chǎng)的衛(wèi)生管理制度，對(duì)出入雞場(chǎng)人員采用紫外線全身消毒、新鮮石灰水消毒等，對(duì)進(jìn)出車輛采取石灰水消毒；每天對(duì)雞舍環(huán)境及場(chǎng)內(nèi)設(shè)施設(shè)備進(jìn)行消毒，保持雞舍內(nèi)空氣的流通，及時(shí)清除糞便。

5 結(jié)果與分析

5.1 第一次J亞群雞白血病血清抗體水平分析

從表格可以看出（表1）：第1次對(duì)某肉種雞場(chǎng)A（14周齡）、B（14周齡）、C（15周齡）、D（15周齡）4棟雞舍不同日齡雞群400份血清的檢測(cè)，結(jié)果陽性總數(shù)為94只，陽性率為23.50%，平均OD值為0.273，其中A、B、C、D 4個(gè)圈舍陽性率分別為26.00%、21.00%、28.00%、19.00%。

通過統(tǒng)計(jì)可知，A、B、C、D 4棟圈舍檢測(cè)樣本的平均OD值分別0.287、0.315、0.275、0.216，總體OD值為0.273。

表1 昌吉市某規(guī)?；夥N雞場(chǎng)ALV-J血清抗體水平及陽性率匯總表

5.2 第二次J亞群雞白血病血清抗體水平分析

從表格可以看出（表2）：第2次對(duì)某肉種雞場(chǎng)A（21周齡）、B（21周齡）、C（22周齡）、D（22周齡）4棟雞舍不同日齡雞群400份血清的檢測(cè)，結(jié)果陽性總數(shù)為31只，總陽性率為7.75%，平均OD值為0.109，其中A、B、C、D 4個(gè)圈舍陽性率分別為9.00%、10.00%、7.00%、5.00%。

通過統(tǒng)計(jì)可知，A、B、C、D各圈舍的OD值分別0.117、0.129、0.098、0.090，總體OD值為0.109。

6 分析與討論

從結(jié)果分析可知，對(duì)昌吉市某規(guī)?；夥N雞場(chǎng)4棟雞舍不同日齡的雞群分兩批進(jìn)行檢查，每次各檢測(cè)400份血清。第1次檢測(cè)時(shí)間為14～15周齡，分別檢測(cè)了A、B、C、D4棟雞舍各100只雞，結(jié)果陽性總數(shù)為94只，總陽性率為23.50%，平均OD值為0.273，其中A、B、C、D4棟雞舍陽性率分別為26.00%、21.00%、28.00%、19.00%。

表2 昌吉市某規(guī)?；夥N雞場(chǎng)ALV-J血清抗體水平及陽性率匯總表

針對(duì)此種情況，雞場(chǎng)采取了嚴(yán)格的淘汰措施，對(duì)第1批檢測(cè)出為陽性的種雞進(jìn)行淘汰；嚴(yán)格觀察雞群，及時(shí)淘汰病雞、死雞；加強(qiáng)雞場(chǎng)消毒、通風(fēng)，7周后再次進(jìn)行檢測(cè)，陽性率明顯下降，4棟雞舍不同日齡（21～22周）雞群400份血清的檢測(cè)，結(jié)果陽性總數(shù)為31，陽性率為7.75%，下降了15.45個(gè)百分點(diǎn)，平均OD值為0.109。其中A、B、C、D4棟雞舍陽性率分別為9.00%、10.00%、7.00%、5.00%。由23.50%下降到7.75%。

參考文獻(xiàn)

[1] 崔治中. 我國(guó)雞群 J 亞群白血病流行的過去、現(xiàn)在和將來及其防控：對(duì)我國(guó)動(dòng)物疫病防控的啟示[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2015(1)：30-32.

[2] 崔治中，孫淑紅，趙鵬，等.對(duì)種雞場(chǎng)禽白血病凈化方案的建議[J].中國(guó)家禽，2014(1)：3-6.

[3] 馬秀麗.雞病毒性免疫抑制病的發(fā)展趨勢(shì)與防制措施[J].山東畜牧獸醫(yī)，2000（2)：36-38.