蘇勇華，方 雷，應 璐，李雅婷，蔣 慧

（1.塔里木大學動物科學學院，新疆阿拉爾843300；2.塔里木畜牧科技兵團重點實驗室，新疆阿拉爾843300；3.塔里木大學生命科學學院，新疆阿拉爾843300）

多浪羊是新疆南疆養(yǎng)殖數(shù)量較多的優(yōu)良地方品種，具有飼料報酬高、產(chǎn)肉率高、肉質(zhì)細嫩和肉膽固醇含量低等特征［1］，其羊奶乳蛋白含量（5.79%）、乳脂肪含量（6.4%）、乳糖含量（4.56%）遠高于牛奶和人奶［2］，主要分布于喀什地區(qū)、阿克蘇地區(qū)和巴州地區(qū)，其品種具有抗寒、抗病、耐粗飼、多胎性好、雙羔率高等特性［3］，所以優(yōu)化養(yǎng)殖多浪羊?qū)π陆竽翗I(yè)的發(fā)展具有重要的意義。

微生物飼料添加劑（micro－ecological feed additives）是指可直接飼喂給動物，通過調(diào)控動物腸道微生態(tài)平衡從而達到預防疾病、促進動物生長和提高飼料利用率等作用的一類活性微生物或其培養(yǎng)物。我國農(nóng)業(yè)部2008年12月公布的1126號公告《飼料添加劑品種目錄（2008）》中規(guī)定可直接飼喂的飼用微生物添加劑菌種共16種，其中包括枯草芽孢桿菌、嗜乳酸桿菌、干酪乳桿菌等。芽孢桿菌制劑具有耐鹽、耐高溫、抗干燥等優(yōu)點［4］，而枯草芽孢桿菌（Bacillus Subtilis）作為芽孢桿菌的一種，具有拮抗致病微生物、增強動物免疫功能，同時能產(chǎn)生活性較強的脂肪酶、蛋白酶和淀粉酶，可有效分解復雜碳水化合物，促進動物對飼料養(yǎng)分的消化代謝［5－6］，因而在動物飼糧中使用枯草芽孢桿菌類微生物添加劑具有防治疾病、促進生長等作用［7］。

現(xiàn)階段對枯草芽孢桿菌的研究主要集中在單胃動物及水產(chǎn)養(yǎng)殖方面，鮮見關(guān)于枯草芽孢桿菌對多浪羊影響的研究［8－11］。本試驗所用枯草芽孢桿菌是由疏葉駱駝刺青貯飼料中分離鑒定得到的，該菌是否適合作為微生物飼料添加劑，是否存在差異性及安全問題，有待進一步研究，本試驗通過在多浪羊日糧中添加不同劑量的枯草芽孢桿菌，研究其對多浪羊表觀消化率、平均日增質(zhì)量、發(fā)酵參數(shù)及血液指標的影響，旨在為枯草芽孢桿菌在多浪羊飼料中的合理利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

枯草芽孢桿菌，從疏葉駱駝刺青貯飼料中分離鑒定得到，保存于實驗室內(nèi)。

1.2 試驗動物與飼養(yǎng)管理

選取同年齡、同性別、健康體況相近的多浪羊12只，飼喂于塔里木大學動物實驗站，試驗前對試驗羊打耳標、藥浴、喂驅(qū)蟲藥，對羊舍、料槽、水槽等進行消毒。同組同槽飼養(yǎng)，在每天08：30和18：30定時飼喂，并自由飲水?？莶菅挎邨U菌每天早上隨玉米粉一同混合飼喂給試驗羊，并注意觀察羊的健康狀況。試驗期為30 d，其中預試期10 d，正試期20 d。飼喂自配日糧，其基礎(chǔ)日糧配方見表1。

1.3 試驗設(shè)計

試驗羊隨機分為4個處理，每個處理3只羊。試驗采用4×4拉丁方設(shè)計，Ⅰ組為對照組，飼喂基礎(chǔ)日糧；Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組為試驗組，在飼喂基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上，分別添加活菌數(shù)為3.2×109、3.2×1010、3.2×1011CFU／g的枯草芽孢桿菌。

表1 試驗羊日糧組成

1.4 測定指標和方法

1.4.1 日增質(zhì)量及消化率測定 在試驗的第1天和第28、29、30天晨飼前對多浪羊進行空腹稱體質(zhì)量，計算平均日增質(zhì)量。在正試期每天09：30和19：30分別收集糞袋中的鮮糞并稱質(zhì)量，每天收集的鮮糞樣按每100 g糞樣加5 mL 10%硫酸進行固氮，同時隨機收集飼喂的飼料原料樣本，連續(xù)收集4 d，將所有糞樣和料樣分別混勻，按照四分法進行取樣，65℃烘干48 h后裝于樣品袋中備用。參照張麗英編寫的《飼料分析及飼料質(zhì)量檢測技術(shù)》測定糞樣及料樣中的DM、CP、NDF、ADF值［12］，按王鈺明等的方法［13］測定糞樣和料樣中的酸不溶灰分（AIA）以計算 DM、CP、NDF、ADF的表觀消化率。

1.4.2 多浪羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)的測定 在第30天晨飼前對多浪羊進行空腹采取瘤胃液，將采集的瘤胃液置于50 mL離心管中，用于乙酸、丙酸、丁酸等揮發(fā)性脂肪酸（VFA）含量、pH值和NH3－N濃度等瘤胃發(fā)酵參數(shù)的測定，其中VFA采用氣相色譜法測定［14］，pH值用雷磁 PHSJ－5酸度進行測定，NH3－N濃度用比色法進行測定［15］。

1.4.3 多浪羊血液指標 在第30天晨飼前對多浪羊進行空腹頸靜脈采血，分別收集于抗凝管和非抗凝管中，其中抗凝管中的血用于測定血常規(guī)指標，非抗凝管中的血用于制備血清，用于測定膽固醇、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、總蛋白等生化指標。所有的生化指標測定均在BECKMAN COULTER AU480型全自動生化分析儀上進行，當天完成測定。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗所得數(shù)據(jù)用Excel進行初步整理，采用分析軟件DPS作方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 多浪羊平均日增質(zhì)量及消化率

由表2可知，多浪羊平均日增質(zhì)量和CP消化率均是試驗組（Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）顯著高于對照組（P＜0.05），而3個試驗組之間差異不顯著；干物質(zhì)消化率表現(xiàn)為試驗組（Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）顯著高于對照組（P＜0.05），試驗Ⅱ組與Ⅲ組差異顯著（P＜005），但與Ⅳ組差異不顯著；NDF和ADF消化率均是試驗組（Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）顯著高于對照組（P＜0.05），但試驗Ⅲ、Ⅳ組差異不顯著。

表2 多浪羊平均日增質(zhì)量及消化率

2.2 多浪羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)

由表3可知，多浪羊瘤胃液的NH3－N濃度表現(xiàn)為Ⅱ、Ⅳ組均顯著高于Ⅰ組、Ⅲ組（P＜0.05），Ⅱ組與Ⅳ組、Ⅰ組與Ⅲ組差異不顯著；而瘤胃液的pH值、總揮發(fā)性脂肪酸含量、丙酸含量和丁酸含量在4個處理間差異均不顯著；瘤胃液乙酸含量表現(xiàn)為Ⅱ組顯著低于其他3組（P＜0.05），Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ組之間差異不顯著；在4個處理中，瘤胃液均未檢出戊酸。

2.3 多浪羊血液指標

表3 多浪羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)

2.3.1 多浪羊血常規(guī)指標 由表4可知，多浪羊的白細胞數(shù)量、淋巴細胞數(shù)量、淋巴細胞百分比均表現(xiàn)為Ⅳ組均顯著高于其他3組（P＜0.05），而Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組差異不顯著；Ⅲ、Ⅳ組的紅細胞數(shù)量均分別顯著高于Ⅰ、Ⅱ組（P＜0.05），Ⅲ組與Ⅳ組、Ⅰ組與Ⅱ組差異不顯著；血紅蛋白濃度、紅細胞壓積、大型血小板比例和血小板平均體積在4組間均無顯著差異；紅細胞平均體積和平均血紅蛋白含量均是對照Ⅰ組最高；試驗Ⅳ組平均血紅蛋白濃度顯著高于其他3組（P＜0.05），Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組之間差異不顯著；血小板平均分布寬度在對照Ⅰ組與3個試驗組（Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）間差異不顯著，而試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組之間存在顯著差異（P＜0.05）。

2.3.2 多浪羊血清生化指標 由表5可知，血液總膽紅素含量除Ⅰ組與Ⅱ組之間差異不顯著外，其余各組間的TB含量差異顯著（P＜0.05）；間接膽紅素含量和直接膽紅素含量在4個組之間均無顯著差異。血清的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性、谷氨酰轉(zhuǎn)氨酶活性、堿性磷酸酶活性、尿素和肌酐含量在4個組之間也無明顯差異。Ⅱ組谷草轉(zhuǎn)氨酶活性顯著高于Ⅳ組（P＜005），其他3組之間差異均不顯著。

Ⅰ組總蛋白含量與Ⅱ組相比差異不顯著，但顯著高于Ⅲ、Ⅳ組（P＜0.05），且Ⅲ、Ⅳ組間的總蛋白含量差異也不顯著；血液白蛋白含量除Ⅳ組顯著低于Ⅱ和Ⅲ組（P＜0.05）外，其余3組間差異均不顯著；血液球蛋白含量除Ⅰ組與Ⅱ組差異不顯著外，其余各組間均差異顯著（P＜0.05）；血液白球比除Ⅰ組與Ⅳ組差異不顯著外，其余各組間差異均顯著（P＜005）。

表4 多浪羊血常規(guī)指標

表5 多浪羊血液生化指標

3 討論

3.1 添加枯草芽孢桿菌對多浪羊日增質(zhì)量及養(yǎng)分消化率的影響

本試驗結(jié)果表明，添加枯草芽孢桿菌后顯著提高了多浪羊平均日增質(zhì)量及干物質(zhì)消化率，表明枯草芽孢桿菌具有促進飼料消化的功效。添加枯草芽孢桿菌使NDF、ADF的消化率均有不同程度提高，與鄧露芳等利用體外產(chǎn)氣技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)的納豆芽孢桿菌提高瘤胃糖類的消化代謝［16］得出相似的結(jié)論。出現(xiàn)這樣的結(jié)果，可能與枯草芽孢桿菌所產(chǎn)生的酶有關(guān)，如脂肪酶、蛋白酶和淀粉酶，它們能有效降解復雜的碳水化合物［6］，動物飼喂枯草芽孢桿菌后，可能不同程度地提高動物腸道中蛋自酶、淀粉酶等的活性，從而提高飼料消化利用率。

3.2 添加枯草芽孢桿菌對多浪羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響

本試驗結(jié)果表明，添加枯草芽孢桿菌后pH值無明顯變化，但在一定程度上有降低的趨勢，原因可能是枯草芽孢桿菌促進了糖類的消化代謝，提高了瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸的含量。瘤胃氨態(tài)氮濃度是反映瘤胃氮代謝的重要指標，本試驗中，除Ⅲ組（3.2×1010CFU／g）與對照組（Ⅰ）差異不顯著外，其余2組能顯著提高瘤胃氨態(tài)氮濃度，與鄧露芳等報道的納豆枯草芽孢桿菌能顯著提高瘤胃NH3－N濃度有相似的結(jié)果［16］。也有研究認為枯草芽孢桿菌促進了瘤胃原蟲的生長，瘤胃原蟲對細菌的吞食作用可降低瘤胃微生物蛋白質(zhì)合成量，使NH3－N濃度升高［17］。除Ⅱ組乙酸含量和Ⅱ、Ⅲ組乙酸／丙酸低于對照組外，其他揮發(fā)性脂肪酸指標均不存在顯著差異，表明添加枯草芽孢桿菌不能改變瘤胃發(fā)酵類型，不影響飼料的利用。

3.3 添加枯草芽孢桿菌對多浪羊血液指標的影響

3.3.1 添加枯草芽孢桿菌對多浪羊血常規(guī)指標影響 血常規(guī)是反映動物機體狀況的重要指標，血液對維持動物機體的正常生命活動具有極其重要的意義，血液各種成分的定量分析能比較客觀地反映動物機體的生理機能及代謝狀況［18］，也是疾病診斷和監(jiān)測的重要參考指標。白細胞是動物機體的防御細胞，在機體內(nèi)更新的速度比較快，參與機體對細菌、病毒等異物入侵時的免疫過程，白細胞數(shù)量的變化是機體免疫力變化的標志，白細胞數(shù)量的多少可反映機體免疫狀況。飼喂枯草芽孢桿菌的多浪羊血液中白細胞數(shù)除Ⅳ組增高外，其他2組與對照無明顯差異，說明飼料添加枯草芽孢桿菌對多浪羊免疫力無破壞意義。紅細胞是血液有形部分最主要的成分，主要功能是攜帶和運輸氧氣，以滿足機體生理活動和運動的需要，血紅蛋白是血液中承擔運輸氧氣的直接載體［19］。紅細胞和血紅蛋白共同反映動物機體的運動能力、呼吸及營養(yǎng)狀況、環(huán)境適應能力。本試驗飼喂枯草芽孢桿菌的多浪羊血液中紅細胞數(shù)略高于對照組，其中Ⅲ、Ⅳ組與對照組差異達到了顯著水平；血紅蛋白濃度、紅細胞壓積不存在明顯差異。表明飼喂枯草芽孢桿菌不影響其運輸氧氣的能量。

3.3.2 添加枯草芽孢桿菌對多浪羊血清生化指標的影響膽紅素（bilirubin）是臨床上判定黃疸的重要依據(jù)，也是肝功能檢測的重要指標。膽紅素主要在肝臟代謝，包括肝細胞對血液內(nèi)膽紅素的攝取、膽紅素在肝細胞內(nèi)的運載、未結(jié)合膽紅素［（unconjugated bilirubin，UCB）又稱游離膽紅素］轉(zhuǎn)化為結(jié)合膽紅素（conjugated bilirubin，CB）、CB膽汁排泄等一系列緊密銜接且相互影響的生理過程［20］。作為人體一種重要的內(nèi)源性物質(zhì)，膽紅素生理濃度具有抗氧化活性，高濃度易產(chǎn)生細胞毒性，從而對大腦和神經(jīng)系統(tǒng)造成不可逆損傷［21］。本試驗中，飼喂枯草芽孢桿菌多浪羊的血液中總膽紅素含量表現(xiàn)為增長趨勢（Ⅱ組與對照組無顯著差異），但仍處于正常值范圍內(nèi)，同時直接膽紅素和間接膽紅素含量變化均不存在顯著差異，表明飼料中添加高劑量的枯草芽孢桿菌可能會對羊的肝臟產(chǎn)生一定的毒害作用，生產(chǎn)中應控制用量。

谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶在蛋白質(zhì)代謝中起著重要作用，同時關(guān)聯(lián)著三羧酸循環(huán)中草酰乙酸和酮戊二酸，是聯(lián)系蛋白質(zhì)代謝和糖代謝的重要氨基轉(zhuǎn)移酶。正常情況下，這2種酶在動物的肝臟和心肌細胞中含量最高，血清中這2種酶活性較低。當組織細胞受損或通透性增大時，大量的谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶進入血液，使血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性增高，谷草轉(zhuǎn)氨酶活性是肝細胞受損最靈敏的指標之一［22］。添加枯草芽孢桿菌后谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量與對照組差異不顯著，其中Ⅳ組的谷草轉(zhuǎn)氨酶活性明顯低于對照組，說明枯草芽孢桿菌對多浪羊心臟無毒害作用，甚至可以保護心臟。

谷氨酰轉(zhuǎn)氨酶能使蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)，改善蛋白質(zhì)的溶解性、起泡性、乳化性、流變性等多種性質(zhì)，從而改變食品及其他產(chǎn)品的質(zhì)地和結(jié)構(gòu)，進而賦予產(chǎn)品特有的結(jié)構(gòu)特性和黏合性能［23］。堿性磷酸酶是一種通過寡糖磷脂酰肌醇錨定在細胞膜上的結(jié)合蛋白，在生物體可直接參與磷酸基團的轉(zhuǎn)移和代謝的生理過程，且參與體內(nèi)的鈣、磷代謝，維持體內(nèi)適宜的鈣磷比例［24］。有研究表明，堿性磷酸酶活性降低能使組織細胞生理活動維持于較低的水平以適應饑餓脅迫［25］。也有研究表明，堿性磷酸酶活性的高低也反映肝臟的功能狀態(tài)，它的活性降低可有效保護肝臟免受損傷［26］。飼喂枯草芽孢桿菌多浪羊血清谷氨酰轉(zhuǎn)氨酶和堿性磷酸酶與對照組不存在顯著差異，并夠降低堿性磷酸酶含量，說明飼喂枯草芽孢桿菌對多浪羊的肝臟、腎臟和心臟無不良影響，對多浪羊的營養(yǎng)狀況和羊肉品質(zhì)也無不良影響。

血液中的尿素，是機體內(nèi)蛋白質(zhì)中氮代謝的最終主要產(chǎn)物，不與血漿蛋白結(jié)合。血尿素的濃度取決于機體氮分解代謝能力和腎臟的排泄能力。血液中的肌酐，一般是內(nèi)生血肌酐，內(nèi)生肌酐是體內(nèi)肌肉代謝的產(chǎn)物。在肌肉中，肌酸主要通過不可逆的非酶脫水反應緩緩地形成肌酐，再釋放到血液中，隨尿排泄。肌酐濃度反映腎臟損害、腎小球濾過率、尿路通暢性等功能，是一項比尿素、尿酸更特異的腎功能指標，肌酐濃度升高表明腎功能受損［19］。本試驗中，飼喂枯草芽孢桿菌多浪羊血液中的尿素、肌酐含量并無顯著變化，說明飼料中添加枯草芽孢桿菌對機體氮分解代謝能力和腎臟功能無顯著影響。

蛋白質(zhì)是生命活動中其他營養(yǎng)物質(zhì)所不能代替的，在機體的建造和營養(yǎng)方面具有重要意義，血清中總蛋白主要由白蛋白和球蛋白組成，其指標可反映機體蛋白質(zhì)吸收與代謝狀況［19］，一般來說，機體營養(yǎng)狀況好，蛋白質(zhì)合成增加，血清總蛋白濃度升高；同時，白蛋白和球蛋白也是評價肝臟功能的重要指標。添加枯草芽孢桿菌后，Ⅲ、Ⅳ組的總蛋白和球蛋白含量低于對照組；Ⅳ組的白蛋白含量低于Ⅱ、Ⅲ組，各處理與對照比差異不顯著，表明低劑量的Ⅱ組（3.2×109CFU／g）對多浪羊機體吸收、代謝及免疫過程無顯著影響。

4 結(jié)論

飼料中添加3種劑量的枯草芽孢桿菌均能提高多浪羊的平均日增質(zhì)量、DM、CP、NDF和ADF的表觀消化率，但對多浪羊瘤胃 pH值、TVFA、丙酸、丁酸含量無顯著影響。添加3.2×109和 3.2×1011CFU／g枯草芽孢桿菌組的瘤胃NH3－N含量都有所提高。Ⅱ組（添加3.2×109CFU／g枯草芽孢桿菌組）的血常規(guī)（平均血蛋白含量除外）和血液生化指標（白球比除外）與對照組無顯著差異，因此在本試驗中效果最好。

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