王雪 李海全 萬青山 肖香 陳橋 黃宇

1.四川省北川羌族自治縣農(nóng)業(yè)局

2.四川省三臺縣農(nóng)業(yè)局

禽流感是一種由A型流感病毒引起的多種家禽及野鳥的高度接觸性傳染病，被OIE列為A類傳染病，我國也將其列為一類動物疫病，為強制免疫病種。2016-2017年期間，為分析春秋兩季集中免疫質(zhì)量，及時掌握流行病學(xué)動態(tài)和免疫效果，筆者在每年的5月和11月對轄區(qū)內(nèi)部分規(guī)模場、散戶進行H5型高致病性禽流感抗體的血清學(xué)監(jiān)測采樣和檢測，現(xiàn)將近2年的檢測結(jié)果報告如下。

一、材料與方法

1.試劑。自配阿氏液，1%雞紅細胞懸液，pH7.2的0．Olmol/L磷酸鹽緩沖液（PBS），H5型禽流感抗原，及陰、陽對照血清（由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所提供），批號:20160401，20170512。

2.采樣。

（1）采樣選擇。共對17個養(yǎng)雞場、180個村218戶采樣。如表1。

表1北川縣高致病性禽流感監(jiān)測場點

（2）采樣要求。每個家禽均采用翅靜脈采取血液，并記錄地址、日齡、養(yǎng)殖規(guī)模、免疫次數(shù)、最近免疫時間、品種及使用疫苗的相關(guān)資料。

（3）采集內(nèi)容。共采集雞血583份、鴨血25份、鵝血10份，每個樣品采血量1.5～2.0ml。

3.檢測方法。血凝抑制試驗:采集血液后，及時分離出血清，并參照H5高致病性禽流感診斷技術(shù)（GB/T 18936-2003）和禽流感微量紅細胞凝集抑制試驗（SN/T1182.2-2004）的規(guī)定，采用血凝抑制試驗，集中對血清樣品進行實驗室檢測，并作系統(tǒng)分析。

4.結(jié)果判定。以完成抑制4個HAU抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI滴度。只有陰性對照孔血清滴度不大于2 log2．陽性對照孔血清誤差不超過1個滴度，試驗結(jié)果才有效。HI價小于或等于3 log2判定HI試驗陰性；HI價等于4 log2為可疑，需重復(fù)試驗；HI價大于或等于 5 log2 為陽性。

二、結(jié)果與分析

2016年全年共檢測免疫禽血清310份，其中合格255份，平均合格率為82.3%。2017年全年共檢測免疫禽血清308份，其中合格237份，平均合格率為77%。結(jié)果見表2。

表2 2016-2017年北川縣H5高致病性禽流感免疫抗體檢測結(jié)果 份

1．規(guī)模場檢測結(jié)果。在2016年總檢測數(shù)90份中，合格79份，平均合格率為88%，2017年總檢測數(shù)80份中，合格71份，平均合格率為89.5%。

2.散養(yǎng)戶檢測結(jié)果。在2016年總檢測數(shù)220份中，合格176份，平均合格率為80%，2017年總檢測數(shù)228份中，合格166份，平均合格率為72.8%。

三、結(jié)論與討論

1.規(guī)模場的抗體水平普遍比較高，這些養(yǎng)殖場基本上是外地購買雞苗，蛋雞居多，選址嚴格，周圍有天然的免疫屏障，有專業(yè)的獸醫(yī)技術(shù)人員駐場或作技術(shù)指導(dǎo)，疫苗有專規(guī)范保存和運輸，按照科學(xué)的免疫程序進行接種。商品代養(yǎng)殖場均經(jīng)兩次禽流感免疫，有時新禽二聯(lián)和重組禽流感間隔免疫。

2.有的散養(yǎng)戶禽流感免疫抗體合格率始終較規(guī)模場低的原因主要有以下幾方面：（1）免疫程序不科學(xué)。有些散養(yǎng)場養(yǎng)殖戶防疫意識淡薄，重點靠春秋兩季集中免疫，基礎(chǔ)免疫過遲或加強免疫的間隔時間過長，加之北川地處山區(qū)，家禽多散養(yǎng)林間，存在免疫困難，免疫效果差；（2）疫苗的運輸和保存不當(dāng)。北川山區(qū)養(yǎng)殖戶不集中，村社間距離遠，疫苗浪費嚴重，禽流感滅活油乳苗稀釋后要在當(dāng)天內(nèi)用完，禽流感一新城疫重組二聯(lián)活疫苗稀釋后2小時內(nèi)用完。有些養(yǎng)禽戶家禽散養(yǎng)不方便抓，多用二聯(lián)苗飲水，自行擠到水槽內(nèi)，之前沒有限水，無法保證2小時內(nèi)喂完，水槽也沒清理干凈，家禽免疫效果不得而知；（3）疫苗使用前準備不充分，未按免疫劑量接種，加大或減少劑量。疫苗使用前溫度回到室溫的水平，油乳劑要充分搖勻，加上注射過程中操作技術(shù)不熟練，出現(xiàn)空打或少打。有的還隨意減少或加大劑量，造成免疫抑制或不能產(chǎn)生足夠的抗體，以致抗體水平偏低；（4）禽苗首免10～14日齡，但是散養(yǎng)戶考慮到家禽日齡比較小，一般不讓免疫。以致抗體水平低。

3.需要注意的是，本次檢測的規(guī)模場樣品170份中，陽性率雖然都達到80%以上，但是尚未出現(xiàn)達100%免疫合格率的雞群，仍需要認真分析免疫過程中的各種問題，按照強制免疫計劃做好強制免疫工作。2017年比2016年春秋防規(guī)模場檢測合格率要略高，原因應(yīng)該是2017年局里加強了規(guī)模場管理，大部分用的是重組禽流感，而有文獻表明重組禽流感比新禽二聯(lián)苗效果要好。農(nóng)業(yè)部2017年起增加對H7型高致病性禽流感免疫，新禽二聯(lián)苗將退出市場，但是禽流感不能飲水免疫對于散戶抗體達標始終存在困難，

4.HI主要檢測血清中針對HA蛋白的抗體，具有特異性，HA抗體的產(chǎn)生在很大程度上反映了機體對病毒感染的抵抗力水平。因此，免疫是預(yù)防和控制禽流感最有效的手段。在家禽生產(chǎn)中，長期對AI的血清學(xué)監(jiān)測是十分必要的，同時多做宣傳，定期培訓(xùn)縣內(nèi)的基層防疫員，了解疫苗注射流程及必要性，最終提升禽流感的抗體合格率。