魏淑麗，黃雪玲

(1.廈門醫(yī)學院臨床醫(yī)學系，福建 廈門 361023；2.廈門醫(yī)學院附屬廈門市第二醫(yī)院兒科，福建 廈門 361021)

支氣管哮喘是兒童時期最常見的慢性阻塞性疾病，近年來大量的動物實驗和臨床研究說明有許多細胞因子、炎癥因子等與哮喘發(fā)病有關(guān)系。趨化因子在哮喘的病理變化過程中發(fā)揮著重要作用，其中認為Eotaxin、IL-13與哮喘的發(fā)作關(guān)系密切，但其確切機制和二者之間的關(guān)系還不清楚[1-3]。本研究旨在通過觀察哮喘患兒血清中Eotaxin、IL-13變化，探討其在哮喘疾病發(fā)作及演變過程中的作用及相互關(guān)系，從而為兒童哮喘的診斷、病情判定、治療療效的評價提供客觀參考指標。

1 資料與方法

1.1 一般資料

哮喘組選擇2015年11月至2017年3月間在廈門醫(yī)學院附屬醫(yī)院兒科就診且確診為支氣管哮喘患兒，24例均符合中華醫(yī)學會兒科分會呼吸組于2008年修訂的我國《兒童支氣管哮喘診斷和防治指南》中5歲以上患兒典型支氣管哮喘診斷標準：(1)反復發(fā)作喘息、咳嗽、氣促、胸悶，多與接觸變應(yīng)原、冷空氣、物理、化學性刺激、呼吸道感染以及運動等有關(guān)，常在夜間和(或)清晨發(fā)作或加劇。(2)發(fā)作時在雙肺可聞及散在或彌漫性，以呼氣相為主的哮鳴音，呼氣相延長。(3)上述癥狀和體征經(jīng)抗哮喘治療有效或自行緩解。(4)除外其他疾病所引起的喘息、咳嗽、氣促和胸悶。患兒均為特應(yīng)性體質(zhì)，無感染性、免疫性疾病史。其中男性13例，女性11例；城市17例，農(nóng)村7例；年齡5～12歲，平均(7.82±2.78)歲，身高(131.42±2.18)cm，體質(zhì)質(zhì)量指數(shù)(BMI)均在正常范圍。健康對照組為附屬醫(yī)院兒科門診體檢健康兒童30名，其中男性16名，女性14名；城市22名，農(nóng)村8名；年齡5～13歲，平均(8.12±2.65)歲，身高(132.42±1.98)cm，體質(zhì)質(zhì)量指數(shù)(BMI)均在正常范圍，無個人與家族過敏史，無感染性、免疫性疾病史，半年內(nèi)無糖皮質(zhì)激素應(yīng)用史。兩組兒童均為漢族且一般資料比較，均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。家長同意抽血化驗，并簽訂知情同意書，兩組兒童失訪率均為0。

1.2 方法

1.2.1 標本采集及保存 哮喘組于急性發(fā)作期、臨床緩解期(臨床癥狀消失、雙肺聽診哮鳴音消失3～5 d)及健康對照組分別留取清晨空腹靜脈血3 mL，注入密封采血管,室溫放置60 min凝固后，3 000 r·min-1離心8 min取上層血清分別注入EP管，保存于-80 ℃冰箱待測，保存期間避免反復凍融。

1.2.2 研究方法 采用人定量酶聯(lián)免疫吸附實驗法(ELISA法)檢測Eotaxin、IL-13,采用武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司試劑盒,標準品均設(shè)復孔，樣品均設(shè)單孔，操作步驟嚴格按照試劑說明書的標準操作程序進行。儀器采用Stat-fax-2100酶標儀。IL-13測定范圍:0～800 ng·L-1,靈敏度1.0 ng·L-1；Eotaxin測定值范圍:0～240 ng·L-1,敏感度0.1 ng·L-1。實驗結(jié)束后，在酶標儀中檢測得出每個標本的OD值，使用CurveExpert漢化版1.4系統(tǒng)繪出七點圖并算出每份標本的eotaxin濃度。標本采用同一批測定。

1.2.3 肺功能檢查 哮喘組在急性發(fā)作期和臨床緩解期行肺功能檢測。采用RSFJ900型肺功能檢測儀，精度為±3%。首先把受試者的年齡、身高、體重、性別參數(shù)輸入肺功能檢測儀得到該受試者的預計值。讓受試者練習至熟練掌握其步驟,重復測3次，每次間隔5～10 min讓患兒充分休息，取重復測定中最佳值用于分析。所得參數(shù)包括50%肺活量最大呼氣流速(V50)、25%肺活量最大呼氣流速(V25)、用力肺活量(FVC)；最大呼氣流量(PEF)、一秒鐘用力呼氣量(FEV1)等。

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 血清Eotaxin、IL-13水平比較

哮喘患兒組急性期與緩解期兒童血清中Eotaxin、IL-13水平組內(nèi)比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.001)；哮喘患兒組急性期、緩解期兒童血清中Eotaxin、IL-13水平與健康組組間比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。見表1。

表1 血清中Eotaxin、IL-13水平比較

2.2 哮喘組患兒急性期與緩解期肺功能的比較

哮喘患兒組肺功能測定包括：FEV1( L·min-1)、PEF/%、FEV1/FVC、V50%、V50( L· min-1)、V25%、V25( L· min-1)。急性期與緩解期兒童肺功能進行比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.001)。見表2。

表2 哮喘組急性期與緩解期兒童肺功能的比較(n=24)

2.3 哮喘患兒組血清Eotaxin、IL-13的相關(guān)關(guān)系

哮喘患兒組急性期兒童血清中Eotaxin、IL-13水平進行相關(guān)分析，差異具有統(tǒng)計學意義(r=0.698,P=0.001)；緩解期兒童血清中Eotaxin、IL-13水平進行相關(guān)分析，差異亦具有統(tǒng)計學意義(r=0.485,P=0.001)。見表3。

表3 哮喘患兒急性期、緩解期血清Eotaxin、IL-13的相關(guān)關(guān)系

2.4 哮喘患兒組急性期血清Eotaxin、IL-13水平與FEV1及PEF的關(guān)系

急性期兒童血清中Eotaxin、IL-13水平與一秒鐘用力呼氣量(FEV1)進行相關(guān)分析，二者與FEV1均呈負相關(guān)，相關(guān)性具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；急性期兒童血清中Eotaxin、IL-13水平分別與呼氣高峰流量(PEF)進行相關(guān)分析，二者與PEF均呈負相關(guān)，相關(guān)性具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表4。

表4哮喘組急性期患兒血清Eotaxin、IL-13水平與FEV1及PEF的關(guān)系

項目FEV1r值P值PEFr值P值Eotaxin-0.6720.001-0.4080.004IL-13-0.7190.001-0.7060.001

2.5 哮喘患兒組緩解期血清Eotaxin、IL-13水平與FEV1及PEF的關(guān)系

緩解期兒童血清中Eotaxin、IL-13與一秒鐘用力呼氣量(FEV1)進行相關(guān)分析，二者與FEV1均呈負相關(guān)，相關(guān)性具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；緩解期兒童血清中IL-13水平與呼氣高峰流量(PEF)進行相關(guān)分析，二者呈負相關(guān)，相關(guān)性具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；緩解期兒童血清中Eotaxin水平與呼氣高峰流量(PEF)進行相關(guān)分析，二者呈負相關(guān)，但P=0.138，相關(guān)性不具有統(tǒng)計學意義。見表5。

表5哮喘組緩解期患兒血清Eotaxin、IL-13水平與FEV1及PEF的關(guān)系

項目FEV1r值P值PEFr值P值Eotaxin-0.5010.001-0.2040.138IL-13-0.4120.017-0.4020.021

3 討論

3.1 Eotaxin與兒童支氣管哮喘

Eotaxin最早于致敏豚鼠的支氣管肺泡灌洗液中分離獲得[4]，目前發(fā)現(xiàn)Eotaxin家族有Eotaxin-1、Eotaxin-2、Eotaxin-3，雖然它們結(jié)構(gòu)不同，但功能相似，都對嗜酸性粒細胞具有趨化作用。在肺組織中Eotaxin主要來源于支氣管的上皮細胞、肺泡巨噬細胞和肺成纖維細胞。劉新等[5]在動物實驗中發(fā)現(xiàn)氣道炎癥時，肺Eotaxin基因的表達水平明顯增高，證實Eotaxin在氣道炎癥中對炎癥細胞的聚集、活化起重要作用。Lamkhioued等[6]在臨床研究進一步證實Eotaxin與支氣管哮喘發(fā)病密切相關(guān)。Eotaxin與受體CCR3結(jié)合，通過對嗜酸性粒細胞強大的選擇性激活作用在支氣管哮喘的發(fā)病過程中起著重要作用[7]。本研究結(jié)果顯示哮喘急性發(fā)作時Eotaxin比緩解期、健康組兒童血清的含量明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義，進一步證實Eotaxin對嗜酸性粒細胞的趨化作用在哮喘發(fā)作過程中的重要地位。以后可以從抑制或阻斷Eotaxin對嗜酸性粒細胞趨化作用環(huán)節(jié)作為新的突破口來研究防治兒童支氣管哮喘。

3.2 IL-13與哮喘

IL-13是由活化的TH2細胞釋放的多效能的細胞因子，通過激活嗜酸性粒細胞，促進IGE的分泌，誘導氣道的高反應(yīng)性的形成，維持哮喘患者氣道的炎癥。本研究結(jié)果顯示哮喘組患兒急性發(fā)作期血清中IL-13水平顯著高于緩解期以及健康對照組的兒童,差異有統(tǒng)計學意義。哮喘急性發(fā)作期患兒血清中IL-13明顯升高,隨著病情緩解,IL-13表達水平逐漸減少。提示IL-13參與哮喘發(fā)病,哮喘患者緩解期呼吸道炎癥仍持續(xù)存在，L-13表達水平可用于監(jiān)測哮喘的發(fā)病及療效。有研究報道，IL-13在支氣管哮喘氣道炎癥和氣管重塑過程中均起到重要作用，通過降低或抑制IL-13生成對控制兒童哮喘發(fā)作和恢復患兒肺功能還有待進一步研究。

3.3 支氣管哮喘患兒血清中Eotaxin、IL-13與肺功能的相互關(guān)系

支氣管哮喘是一種以氣道變應(yīng)性炎癥(AAI)和氣道的高反應(yīng)性(BHR)為特征的變態(tài)反應(yīng)性疾病，是一種病因復雜的具有家族聚集傾向的多基因遺傳病，多種細胞因子和炎癥細胞、炎癥因子等參與哮喘的調(diào)節(jié)。世界上許多國家都對哮喘的治療做了大量的研究，但兒童哮喘的發(fā)病率跟死亡率反而有上升趨勢(尤其是兒童)，所以哮喘的防治仍任重道遠[8]。支氣管哮喘防治的療效可以體現(xiàn)在患兒的肺功能的檢測上。本研究結(jié)果提示，哮喘組患兒急性發(fā)作期及緩解期血清中Eotaxin及IL-13水平與肺功能(FEVI、PEF)值之間均呈負相關(guān)，哮喘患兒肺功能的改善同時伴隨血清Eotaxin及IL-13水平的降低，與國外學者報道一致[9]。本研究提示Eotaxin及IL-13的水平在哮喘患兒可以反映肺功能的變化，可以作為評判哮喘病情嚴重程度的一項客觀指標，對哮喘的診斷及肺功能的評估有重要意義。

3.4 支氣管哮喘患兒血清中Eotaxin、IL-13的相互關(guān)系。

本研究哮喘患者血清中Eotaxin與IL-13水平明顯高于健康對照組,哮喘患者急性期及緩解期血清中Eotaxin與IL-13水平均呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，表明Eotaxin與IL-13在哮喘發(fā)病過程中起重要的作用。支氣管哮喘的發(fā)病機理復雜，對其發(fā)病過程中的病理變化仍缺乏全面認知，細胞因子方面研究發(fā)現(xiàn)，“因子網(wǎng)絡(luò)失衡”在哮喘發(fā)病過程中可能起到重要作用[10]，本研究中哮喘患兒血清IL-13、Eotaxin在急性期及緩解期均呈正相關(guān)。由此可見，IL-13與Eotaxin在哮喘發(fā)病過程中相互影響,共同參與哮喘的病理生理改變。具體的相互影響的方式和途徑還有待進一步研究。

以往在臨床實踐工作中，哮喘的診斷相對更重視臨床癥狀、肺部體征的價值，但臨床癥狀與體征是病理生理改變的外現(xiàn)形式，僅僅依靠癥狀、體征去防治哮喘，在疾病演變過程中有種“后知后覺”的滯后感，動態(tài)觀察血清Eotaxin、IL-13水平，對于哮喘診斷和病情評估以及治療療效的評定有指導意義，為通過阻斷IL-13、Eotaxin產(chǎn)生途徑、治療哮喘的新思路提供理論依據(jù)。

參考文獻

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