劉炘，於洪建，李文德，謝景欣，*

（1.江蘇省疾病預(yù)防控制中心，江蘇南京210009；2.浙江尖峰健康科技有限公司，浙江金華321000）

沸玉菁茶主要由鐵觀音茶、鮮白茅根、桔梗、胖大 海、青果、百合等組成，其中多種成分具有清肺利咽等功效，但配伍產(chǎn)品的相關(guān)功能未見報道[1-6]。我們根據(jù)原衛(wèi)生部《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》（2003版）[7]及國家食藥監(jiān)局《關(guān)于印發(fā)抗氧化功能評價方法等9個保健功能評價方法的通知》（國食藥監(jiān)?；痆2012]107號）[8]的規(guī)定，通過對大小鼠采用不同劑量的沸玉菁茶水溶液進行干預(yù)，進一步觀察沸玉菁茶的清咽效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 沸玉菁茶

沸玉菁茶（批號：20150326）濃縮提取物，為原茶葉經(jīng)飲用水重復(fù)提取3次，提取液合并減壓濃縮，真空干燥，濃縮倍數(shù)為1 g粉末相當(dāng)于10 g茶葉。性狀為黃褐色粉末，由浙江尖峰健康科技有限公司提供。

1.1.2 實驗動物

SD 大鼠 150 g～220 g，ICR 小鼠 18.0 g～22.0 g，上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司提供，清潔級，合格證號：2015000533737；生產(chǎn)許可證號：SCXK（滬）2012－0002號；實驗動物屏障環(huán)境設(shè)施使用許可證號：SYXK（蘇）2012-0037號。全部動物均給予滅菌鼠飼料和滅菌水，滅菌鼠飼料由北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供，飼料合格證號：SCXK（京）2014-0010。

1.1.3 主要儀器和試劑

TE412-L電子天平：德國Sartorius公司；YLS－7A足趾容積測量儀：濟南益延科技設(shè)備有限公司；HPX-9052MBE電熱恒溫干燥箱：上海博訊醫(yī)療設(shè)備實業(yè)有限公司；葡聚糖4萬（右旋糖酐40）、二甲苯（分析純AR）：美國Sigma公司。

1.2 方法

1.2.1 分組及處理

選用健康雄性SD大鼠及ICR小鼠，分批按體重隨機各分為4組（即對照組和低、中、高劑量組），每組10只，共分3批分別進行大鼠棉球植入實驗、大鼠足趾腫脹實驗及小鼠耳腫脹實驗。經(jīng)口灌胃，按照低、中、高劑量每天給予大鼠或小鼠41.6、83.3、249.9mg/kg（分別相當(dāng)于成人每日每千克體重推薦攝入量的5倍、10倍和30倍）沸玉菁茶，大、小鼠灌胃容積分別為10、20 mL/kg·bw，溶劑對照組以等容積純凈水灌胃。各組大小鼠均給以普通飼料，自由進食和飲水，每天灌胃1次，連續(xù)灌胃30天后檢測各項指標。

1.2.2 大鼠棉球植入實驗

實驗結(jié)束前8天，用脫毛器脫去大鼠兩側(cè)腹股溝處的毛，乙醚淺麻醉，碘伏消毒，在無菌條件下切開大鼠兩側(cè)腹股溝皮膚，植入備用的棉球，縫合切口，繼續(xù)給予受試物。實驗結(jié)束當(dāng)天，給受試物1 h后，斷頸處死大鼠，在原縫合處剪開皮膚，剝離并取出棉球肉芽組織，置于已稱重潔凈平皿中，恒溫干燥箱60℃開蓋干燥1 h后稱重，計算肉芽腫凈重。

肉芽腫凈重/mg=干燥后棉球肉芽腫質(zhì)量-原棉球質(zhì)量

1.2.3 大鼠足趾腫脹實驗

實驗結(jié)束當(dāng)天再給受試樣品一次。1小時后，用足趾容積測量儀測量各組大鼠右后足趾的容積，作為0小時足趾容積。然后在大鼠右后足趾皮下注入1%葡聚糖4萬0.1mL/只，分別于1、2、4、6 h測量大鼠足趾的容積，同一部位測量3次，取平均值。以不同時間所測足趾容積與致炎劑作用前的足趾容積之差為腫脹值，計算各個時間段的足趾腫脹率。

1.2.4 小鼠耳腫脹實驗

汲取二甲苯20μL，滴加在小鼠右耳外側(cè)面耳廓的中央，讓其自由擴散，30min后，將小鼠脫頸椎處死，剪下雙耳，用9mm直徑打孔器在兩耳相同部位打下耳片稱重，以兩耳重量之差為耳廓腫脹值，計算耳廓腫脹率。

耳廓腫脹率/%=耳廓腫脹值/對照耳片質(zhì)量×100

1.2.5 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS20.0軟件進行單因素方差分析（AnalysisofVariance，ANOVA），對 P＜0.05 的數(shù)據(jù)用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計處理。方差不齊時先進行變量轉(zhuǎn)換，仍不齊則改用秩和檢驗分析。

2 結(jié)果

2.1 一般狀況

實驗期間各組大鼠一般狀況良好，無異常癥狀和體征，也無死亡和行為異常。

2.2 對實驗前后動物體重的影響

各項實驗前后動物生長情況良好，受試物各劑量組與溶劑對照組動物體重和增重差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表 1～3。

表1 各組動物的初始體重（±s，n=10）Tab le1 Initialbodyweightof theanim als in each group（±s，n=10）

表1 各組動物的初始體重（±s，n=10）Tab le1 Initialbodyweightof theanim als in each group（±s，n=10）

注：各項實驗受試物各劑量組與溶劑對照組動物初始體重經(jīng)ANOVA檢驗得P值均大于0.05。

組別 棉球植入/g 足趾腫脹/g 耳腫脹/g對照組 164±3 164±3 20.6±0.5低劑量組 166±2 163±4 20.6±0.2中劑量組 166±3 164±5 20.5±0.2高劑量組 165±3 165±5 20.4±0.6

2.3 大鼠棉球植入實驗

沸玉菁茶大鼠棉球植入實驗的結(jié)果如表4所示。

表2 各組動物的終末體重（s，n=10）Table2 Finalbodyweightof theanimals in each group（±s，n=10）

表2 各組動物的終末體重（s，n=10）Table2 Finalbodyweightof theanimals in each group（±s，n=10）

注：各項實驗受試物各劑量組與溶劑對照組動物終末體重經(jīng)ANOVA檢驗得P值均大于0.05。

組別 棉球植入/g 足趾腫脹/g 耳腫脹/g對照組 358±8 360±8 25.7±0.4低劑量組 362±10 361±11 26.1±0.5中劑量組 361±8 361±9 26.3±0.9高劑量組 362±10 363±9 26.4±0.9

表3 樣品對動物體重增加的影響（±s，n=10）Table3 Effectof fei-yu-jing tea on body weightgain in anim als（±s，n=10）

表3 樣品對動物體重增加的影響（±s，n=10）Table3 Effectof fei-yu-jing tea on body weightgain in anim als（±s，n=10）

注：各項實驗受試物各劑量組與溶劑對照組動物體重增加經(jīng)ANOVA檢驗得P值均大于0.05。

組別 棉球植入/g 足趾腫脹/g 耳腫脹/g對照組 194±7 196±6 5.2±0.5低劑量組 196±11 198±10 5.4±0.6中劑量組 195±6 197±8 5.8±1.0高劑量組 196±11 198±10 6.0±1.2

表4 沸玉菁茶大鼠棉球植入實驗結(jié)果（±s）Table4 Effectof fei-yu-jing tea on cotton ball im plantation experim ent in rats（±s）

表4 沸玉菁茶大鼠棉球植入實驗結(jié)果（±s）Table4 Effectof fei-yu-jing tea on cotton ball im plantation experim ent in rats（±s）

組別 動物數(shù) 肉芽腫凈重/g P值對照組 10 0.052±0.008低劑量組 10 0.042±0.010 0.008中劑量組 10 0.039±0.007 0.001高劑量組 10 0.038±0.007 0.001

受試物各劑量組肉芽腫凈重均低于溶劑對照組，方差分析及兩兩比較最小顯著性差異法（Least-SignificantDifference，LSD）顯示各劑量組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），該項實驗結(jié)果陽性。

2.4 大鼠足趾腫脹實驗

沸玉菁茶大鼠足趾腫脹實驗的結(jié)果如表5～表7所示。

表5 沸玉菁茶大鼠足趾腫脹1 h實驗結(jié)果（±s）Tab le5 Effectof fei-yu-jing tea on toesswelling test in ratsat1 h（±s）

表5 沸玉菁茶大鼠足趾腫脹1 h實驗結(jié)果（±s）Tab le5 Effectof fei-yu-jing tea on toesswelling test in ratsat1 h（±s）

組別 動物數(shù)致炎前足趾容積/mL 1 h足趾容積/mL 1 h腫脹率/% P值對照組 10 0.998±0.112 1.334±0.144 33.78±6.92低劑量組 10 0.998±0.075 1.369±0.122 37.20±6.30 0.387中劑量組 10 0.916±0.121 1.228±0.117 34.81±7.52 0.793高劑量組 10 0.983±0.094 1.196±0.155 21.96±12.71 0.005

表6 沸玉菁茶大鼠足趾腫脹2、4 h實驗結(jié)果（±s）Table6 Effectof fei-yu-jing tea on toesswelling test in ratsat 2 h and 4 h（±s）

表6 沸玉菁茶大鼠足趾腫脹2、4 h實驗結(jié)果（±s）Table6 Effectof fei-yu-jing tea on toesswelling test in ratsat 2 h and 4 h（±s）

注：受試物各劑量組與溶劑對照組大鼠足趾腫脹率經(jīng)ANOVA檢驗得P值均大于0.05。

30.24±8.41低劑量組 10 1.477±0.151 4 h腫脹率/%對照組 10 1.420±0.148組別 動物數(shù) 2 h足趾容積/mL 2 h腫脹率/%4 h足趾容積/mL 42.45±8.09 1.296±0.116 37.44±13.91中劑量組 10 1.323±0.107 48.13±11.05 1.370±0.164 36.61±17.55高劑量組 10 1.330±0.156 46.02±16.07 1.234±0.082 36.03±16.62 1.218±0.114 24.47±11.28

表7 沸玉菁茶大鼠足趾腫脹6 h實驗結(jié)果（±s）Table7 Effectof fei-yu-jing tea on toesswelling test in ratsat6h（±s）

表7 沸玉菁茶大鼠足趾腫脹6 h實驗結(jié)果（±s）Table7 Effectof fei-yu-jing tea on toesswelling test in ratsat6h（±s）

注：受試物各劑量組與溶劑對照組大鼠足趾腫脹率經(jīng)ANOVA檢驗得P值均大于0.05。

組別 動物數(shù) 6 h足趾容積/mL 6 h腫脹率/%對照組 10 1.206±0.120 21.06±7.89低劑量組 10 1.286±0.153 29.03±12.88中劑量組 10 1.136±0.089 25.55±14.37高劑量組 10 1.116±0.094 13.98±8.65

經(jīng)方差分析及兩兩比較（LSD檢驗）顯示，受試物高劑量組與溶劑對照組1 h足腫脹率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），該項實驗結(jié)果陽性。

2.5 小鼠耳腫脹實驗

沸玉菁茶小鼠耳腫脹實驗的結(jié)果如表8所示。

表8 沸玉菁茶小鼠耳腫脹實驗結(jié)果（±s）Table8 Effectof fei-yu-jing tea on auricleswelling test inm ice（±s）

表8 沸玉菁茶小鼠耳腫脹實驗結(jié)果（±s）Table8 Effectof fei-yu-jing tea on auricleswelling test inm ice（±s）

組別 動物數(shù) 耳廓腫脹值/mg 耳廓腫脹率/% P值對照組 10 11.65±4.47 46.00±19.15低劑量組 10 6.65±3.12 28.32±13.03 0.033中劑量組 10 6.32±3.72 29.34±17.94 0.043高劑量組 10 10.23±5.04 44.88±20.20 0.889

經(jīng)方差分析及兩兩比較（LSD檢驗）顯示，受試物低、中劑量組耳廓腫脹率均低于溶劑對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），該項實驗結(jié)果陽性。

3 討論

沸玉菁茶是一種全新的保健飲品資源，結(jié)合中醫(yī)君、臣、佐、使的配伍理論，引用中醫(yī)喉科經(jīng)典《重樓玉鑰》古方為依據(jù)[9]，采用現(xiàn)代細胞篩選技術(shù)精研改良配方，運用現(xiàn)代制劑技術(shù)將有效成分濃集，配以茶葉，制成功效明確、質(zhì)量可控的袋泡茶，對咽喉及呼吸道具有調(diào)理養(yǎng)護作用，適合粉塵危害嚴重的行業(yè)人員以及在霧霾環(huán)境下出行或作業(yè)的群體[10-12]。沸玉菁茶中的主要成分鐵觀音茶、鮮白茅根、胖大海、青果等均為藥食同源，是常見的健康飲用材料，該配伍產(chǎn)品的安全性也已得到了相關(guān)實驗驗證[13-14]。

清咽作用的機制為干預(yù)咽部炎癥反應(yīng)[15-16]。炎癥反應(yīng)分為急性炎癥和慢性炎癥，當(dāng)受試物經(jīng)實驗證實具有干預(yù)急性炎癥和慢性炎癥的作用后才能確定受試物是否具有清咽的作用[17-18]。本研究發(fā)現(xiàn)，使用沸玉菁茶干預(yù)后，與空白對照組相比，SD大鼠各劑量組棉球肉芽腫凈重及高劑量組1 h足趾腫脹率顯著減??；ICR小鼠低、中劑量組耳廓腫脹率低于溶劑對照組。說明沸玉菁茶具有干預(yù)大鼠肉芽腫形成、足趾腫脹以及抑制小鼠耳廓腫脹的作用。以上3個實驗結(jié)果均為陽性，可判定沸玉菁茶清咽功能實驗結(jié)果陽性，說明沸玉菁茶具有清咽的作用，這為以后沸玉菁茶的開發(fā)及應(yīng)用提供了有力的依據(jù)[19-20]。但其干預(yù)炎癥反應(yīng)的機制仍有待今后進一步研究探討。

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