郭英

摘要：我國(guó)每年都有大量新收玉米入庫(kù)，同時(shí)還有大量以往年份的儲(chǔ)備玉米，這些都存在被真菌污染，產(chǎn)生真菌毒素，威脅人畜安全的危險(xiǎn)，如何在儲(chǔ)存過程中避免真菌大量繁殖，抑制黃曲霉毒素Bl的產(chǎn)生是本文研究的重點(diǎn)?，F(xiàn)通過對(duì)三個(gè)品種玉米樣品在不同水分條件下儲(chǔ)存一段時(shí)間后黃曲霉毒素含量的變化進(jìn)行檢測(cè)和分析，尋找能夠有效抑制黃曲霉毒素Bl產(chǎn)生的適宜儲(chǔ)存水分。

關(guān)鍵詞：玉米；真菌；黃曲霉毒素Bl

中圖分類號(hào)：S513

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：2095-9737（2018）04-0005-01

黃曲霉毒素Bl是一種病原真菌黃曲霉菌侵染玉米等農(nóng)作物，繁殖生長(zhǎng)過程中產(chǎn)生的眾多真菌毒素當(dāng)中的一種。黃曲霉毒素Bl的毒性很強(qiáng)，人畜誤食黃曲霉毒素Bl會(huì)導(dǎo)致中毒反應(yīng)，甚至?xí)龃蟀┌Y發(fā)生危險(xiǎn)，嚴(yán)重時(shí)能夠直接導(dǎo)致死亡。

作為一個(gè)農(nóng)業(yè)大國(guó)，我國(guó)玉米的產(chǎn)能居世界前列，玉米不單是重要的農(nóng)產(chǎn)品和工業(yè)原料，還是食品及飼料的重要組成部分，玉米真菌毒素的研究是我國(guó)糧食安全的重要課題之一。

1 樣品準(zhǔn)備

選取黑龍江省種植范圍比較廣的三個(gè)品種先玉335、飛天358、綏玉23的玉米各5000 g，將三個(gè)品種的玉米分別平均分成10份，每份樣品500 g。將這30份樣品分別調(diào)節(jié)成相應(yīng)的水分并進(jìn)行編號(hào)如表1所示：

檢測(cè)三個(gè)品種的玉米中的黃曲霉毒素Bl的含量，之后將做好編號(hào)并調(diào)節(jié)好水分的30份樣品分別隔離儲(chǔ)存3個(gè)月，檢測(cè)其中黃曲霉毒素Bl的含量。

2 實(shí)驗(yàn)原理

一般來說檢測(cè)玉米中黃曲霉毒素Bl有三種常用的方法。第一種為薄層色譜法，將玉米試樣中黃曲霉毒素Bl進(jìn)行一系列的提取、濃縮、薄層分離操作，最后在365 nm的紫外光下顯色，通過顯示藍(lán)色熒光的最低檢出量進(jìn)行粗略定量。第二種為酶標(biāo)法，將玉米試樣中黃曲霉毒素Bl進(jìn)行提取后進(jìn)行脫脂、濃縮之后與定量特異性抗體進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)剩余的游離特異性抗體再與酶標(biāo)板內(nèi)的抗原結(jié)合，與加入的底物和酶標(biāo)記物進(jìn)行顯色再與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較定量。第三種方法為膠體金快速定量法，將玉米試樣中的黃曲霉毒素Bl提取到提取液中，在溫度一定條件下與檢測(cè)條中的膠體金微粒進(jìn)行顯色反應(yīng)，使用讀數(shù)儀對(duì)檢測(cè)條上的質(zhì)控線以及檢測(cè)線的顏色深度進(jìn)行測(cè)定，顏色的深度與黃曲霉毒素Bl的含量呈線性的相關(guān)關(guān)系，顏色與讀數(shù)儀內(nèi)置的曲線對(duì)應(yīng)，自動(dòng)計(jì)算出黃曲霉毒素Bl的總量。本實(shí)驗(yàn)采用的為第三種膠體金快速定量法。

3 黃曲霉毒素Bl含量檢測(cè)

3.1 儀器及試劑

電子天平（分度值o.Ol g）；粉碎機(jī)（可使試樣細(xì)度達(dá)到全部通過20目篩）；離心機(jī)（轉(zhuǎn)速達(dá)到4000 r/min）；渦旋振蕩儀；孵育器（可進(jìn)行45℃恒溫）；讀數(shù)儀（自動(dòng)計(jì)算并顯示結(jié)果）；ROSA黃曲霉毒素Bl膠體金快速定量檢測(cè)條；針頭式過濾器；Whatman 2V濾紙；提取液（70%甲醇水溶液）。

3.2 實(shí)驗(yàn)方法

將500 g左右的樣品粉碎至全部通過20目篩，混合均勻，寫好編號(hào)備用。用電子天平（分度值0.01 g）準(zhǔn)確稱取玉米樣品10.00 g于50 mL帶蓋離心管中，分別加入20.O mL提取液（70%甲醇水溶液），擰緊螺旋蓋，使用渦旋振蕩器震蕩100 s，靜置至澄清，吸取上層清液1.0 mL于3 mL離心管中，在離心機(jī)（調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速為4000 r/min）中離心60 s。移取離心后的上清液100 μL于另一支3 mL離心管中，再加入1.0 mL稀釋緩沖液，渦旋混勻待測(cè)。

將冷藏室中保存的膠體金檢測(cè)條取出，放置一段時(shí)間直至其達(dá)到室溫，同時(shí)啟動(dòng)孵育器開始預(yù)熱，使其溫度恒定在45℃±l℃。將恢復(fù)至室溫的膠體金檢測(cè)條平放于恒溫完成的孵育器當(dāng)中，撕開檢測(cè)條的塑料薄膜露出加樣口。準(zhǔn)確移取300 μL待測(cè)液注入加樣口中，蓋好塑料薄膜封閉加樣孔，關(guān)閉孵育器上蓋，孵育5 min之后，將檢測(cè)條取出插入讀數(shù)儀中進(jìn)行讀數(shù)。如果黃曲霉毒素B1濃度太高超出檢測(cè)濃度范圍，則需移取300 μL待測(cè)液注入另一離心管中，再次加入1.O mL稀釋緩沖液，渦旋混勻后重復(fù)上述步驟，進(jìn)行再次測(cè)定。

4 數(shù)據(jù)處理

3個(gè)品種初始樣品的黃曲霉毒素Bl檢測(cè)結(jié)果均為未檢出，在同樣的條件下對(duì)3個(gè)品種的10份不同水分含量樣品進(jìn)行儲(chǔ)存實(shí)驗(yàn)，3個(gè)月后對(duì)樣品的黃曲霉毒素Bl含量分別進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果分別如表2，表3，表4所示。

5 結(jié)論

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《GB 2761- 2011食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素限量》中規(guī)定，玉米中黃曲霉毒素Bl的含量不得超過20μg/kg，由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，三個(gè)品種在儲(chǔ)存實(shí)驗(yàn)中，不同水分含量的樣品均表現(xiàn)出水分含量達(dá)到一定的高度后，隨著水分含量的增加，黃曲霉毒素Bl的含量呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。初始樣品中的黃曲霉毒素Bl均為未檢出，三個(gè)品種的玉米經(jīng)過3個(gè)月的儲(chǔ)藏試驗(yàn)后，水分含量為13.5%以下的樣品均未出現(xiàn)變化，而在水分含量達(dá)到14.3%以上時(shí)都超出了標(biāo)準(zhǔn)限量標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)樣品在含水量處于13.7%—14. 1%時(shí)，黃曲霉毒素Bl含量有一定的增長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，玉米的含水量對(duì)黃曲霉毒素Bl在儲(chǔ)存期間的增長(zhǎng)有顯著地影響，含水量在13.5%以下時(shí)其生長(zhǎng)速度較慢。影響黃曲霉毒素Bl含量增長(zhǎng)的條件還有很多，要進(jìn)一步探尋玉米的安全儲(chǔ)藏條件，還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行探索。