陶翎 周翔 戎春燕 宋博 黃濤 郭睿

(常州千紅生化制藥股份有限公司，江蘇 常州 213125)

0 引言

肝素是從豬、牛、羊等動(dòng)物的腸粘膜或肺提取的具有抗凝血作用的粘多糖硫酸酯類物。原料藥可能存在多個(gè)來(lái)源的元素雜質(zhì)，由于元素雜質(zhì)通常沒(méi)有治療作用，因此原料藥生產(chǎn)中元素雜質(zhì)含量應(yīng)被控制在可接受的限度。國(guó)際人用藥物注冊(cè)技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)議(ICH)Q3D元素雜質(zhì)指南和美國(guó)藥典(USP)，都提出對(duì)于潛在存在于藥物中的元素雜質(zhì)需進(jìn)行定性和定量分析評(píng)估，并基于進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估以限制最低元素雜質(zhì)含量[1-2]。因此我們采用電感耦合等離子體發(fā)射光譜法(ICP-OES)進(jìn)一步控制肝素原料藥中元素雜質(zhì)水平，從而有效保障藥品質(zhì)量。

1 測(cè)試部分

1.1 主要儀器

電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀(ICP-OES)：Avio 200(珀金埃爾默公司)。

微波消解儀：Multiwave 3000(安東帕有限公司)。

1.2 試劑與試藥

Cd、Pb、Hg、Co、V、Ni、Li、Sb、Cu、Ba、Cr、As元素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)由國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心提供；肝素鈉由常州千紅生化制藥股份有限公司生產(chǎn)；硝酸(分析純)由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供。

1.3 測(cè)試方法

1.3.1 溶液配制

2%硝酸溶液：先放30mL的純化水，再取3.1mL的濃硝酸加入瓶?jī)?nèi)定容至100mL。

混標(biāo)溶液：吸取Cd、Pb、Co、V、Ni、Li、Cu、Ba、Cr、As(混合溶液100μg/mL)10mL，Hg(單 元 素1000μg/mL)1mL，Sb(單 元 素1000μg/mL)1mL，加2%硝酸溶液定容至100mL。

標(biāo)準(zhǔn)溶液：根據(jù)儀器的工作濃度區(qū)間，定義J=0.1μg/mL，將混標(biāo)溶液用2%硝酸稀釋成0.5J、0.75J、1J、1.25J、1.5J的混合溶液。

樣品溶液：稱取肝素鈉供試品約0.4g，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加2%硝酸6mL，置適宜的微波消解。消解完全后，用2%硝酸定容至100mL。

混合溶液(0.5J)：稱取肝素鈉供試品約0.4g，加混標(biāo)溶液0.5mL，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加2%硝酸6mL，置適宜的微波消解。消解完全后，用2%硝酸定容至100mL。

混合溶液(0.75J)：稱取肝素鈉供試品約0.4g，加混標(biāo)溶液0.75mL，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加2%硝酸6mL，置適宜的微波消解。消解完全后，用2%硝酸定容至100mL。

混合溶液(1J)：稱取肝素鈉供試品約0.4g，加混標(biāo)溶液1.0mL，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加2%硝酸6mL，置適宜的微波消解。消解完全后，用2%硝酸定容至100mL。

混合溶液(1.25J)：稱取肝素鈉供試品約0.4g，加混標(biāo)溶液1.25mL，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加2%硝酸6mL，置適宜的微波消解。消解完全后，用2%硝酸定容至100mL。

混合溶液(1.5J)：稱取肝素鈉供試品約0.4g，加混標(biāo)溶液1.5mL，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加2%硝酸6mL，置適宜的微波消解。消解完全后，用2%硝酸定容至100mL。

空白溶液：即2%硝酸溶液。

微波消解儀升溫程序：5min由室溫升至120℃，維持3min；6min由120℃升至150℃，維持2min；6min由150℃升至180℃，維持20min。

1.3.2 光譜系統(tǒng)

儀器：ICP-OES。

Delay Time：30～60s。

流速：1.5mL/min。

波長(zhǎng)：儀器默認(rèn)元素波長(zhǎng)(Cd=228.802、Pb=220.353、Hg=253.652、Co=228.616、V=292.464、Ni=231.604、Li=670.784、Sb=206.836、Cu=327.393、Ba=233.527、Cr=267.716、As=193.696)。

2 結(jié)果分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5J、0.75J、1J、1.25J、1.5J，混合溶液0.5J、0.75J、1J、1.25J、1.5J分別進(jìn)樣，結(jié)果見(jiàn)表1和表2。

從表1和表2可以得出，各濃度下標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積與混合溶液近似，呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.2 回收率

取樣品溶液、混合溶液1.5J、1J、0.5J分別進(jìn)樣3次，結(jié)果見(jiàn)表3。

表1 混合溶液線性

表2 標(biāo)準(zhǔn)溶液線性

表3 準(zhǔn)確度

續(xù)表3

從表3可得，各元素在各濃度下回收率均在70%～150%之間，平均回收率為97.8%。

2.3 檢出限

用空白溶液進(jìn)樣11次，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差SA，根據(jù)線性項(xiàng)下斜率QL=3SA/S，計(jì)算出各元素的檢出限，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 各元素檢出限

續(xù)表4

從表4可得，各元素檢出限在0.005～2μg/g之間，能滿足這些金屬元素的檢測(cè)需求。

3 結(jié)語(yǔ)

利用ICP-OES儀檢測(cè)肝素中金屬雜質(zhì)具有良好的線性關(guān)系、回收率、檢出限，可以用于肝素元素雜質(zhì)的檢測(cè)，且實(shí)現(xiàn)了可同時(shí)檢測(cè)Cd、Pb、Hg、Co、V、Ni、Li、Sb、Cu、Ba、Cr、As共12種元素，縮短了試驗(yàn)時(shí)間。隨著本方法使用的深入，將繼續(xù)開(kāi)發(fā)改進(jìn)本方法，以滿足更多雜質(zhì)元素檢測(cè)的質(zhì)控要求。