趙子剛　張輝　俞財峰　沈雪鋒　吳曉華　舒雅娟

摘要 [目的]建立藍(lán)莓品種“粉紅檸檬水”穩(wěn)定高效的組培快繁體系。[方法]以“粉紅檸檬水”帶腋芽的莖段為材料，研究不同植物生長調(diào)節(jié)劑及生根基質(zhì)對誘導(dǎo)、增殖、生根過程的影響。[結(jié)果]在改良WPM培養(yǎng)基上，添加玉米素ZT 2.0 mg/L、NAA 0.1 mg/L可成功誘導(dǎo)出芽，將芽接種在添加0.3～1.0 mg/L ZT玉米素的培養(yǎng)基上增殖良好，增殖系數(shù)1.10～1.40；以水苔蘚為扦插基質(zhì)進(jìn)行瓶外生根，生根成活率達(dá)85.00%。[結(jié)論]該研究可為藍(lán)莓品種“粉紅檸檬水”果樹種植推廣奠定基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞 粉紅檸檬水；組織培養(yǎng)；快繁

中圖分類號 S663 文獻(xiàn)標(biāo)識碼

A 文章編號 0517-6611（2018）18-0086-02

Establishment of Tissue Culture Rapid Propagation System of Blueberry “Pink Lemonade”

ZHAO Zigang，ZHANG Hui，YU Caifeng et al （Modern Agricultural Park of Qingpu，Shanghai，Shanghai 201717）

Abstract [Objective]To establish a fast and efficient tissue culture system of blueberry variety “Pink Lemonade”.[Method]The effects of different plant growth regulators and rooting matrix on the process of induction，proliferation and rooting were studied.The stem segments with axillary buds was used as material.[Result]In the improved WPM medium，adding zeatin 2.0 mg/L and NAA 0.1 mg/L could successfully induce buds，and the improved WPM medium with the addition of 0.3-1.0 mg/L zeatin had a good proliferation and a proliferation coefficient of 1.10-1.40，and the rate of rooting was 85.00% with the water moss as the cuttage matrix.[Conclusion]The research could lay the foundation for the promotion of the “Pink Lemonade” planting.

Key words “Pink Lemonade”；Tissue culture；Rapid propagation

藍(lán)莓又名越橘，杜鵑花科越橘屬，為多年生落葉或常綠果樹，呈灌木狀生長；果實為漿果，藍(lán)色，近圓形，單果重0.5～2.5 g；果肉細(xì)膩，種子極小，甜酸適中，具有宜人的香氣，可鮮食，也可加工成果汁飲料、果酒等飲品。藍(lán)莓果實營養(yǎng)豐富，微量元素含量也很高，特別是富含鈣、磷、鎂、鋅、鐵、鍺、銅，其抗氧化能力為所有果品、蔬菜之首，對防止人體細(xì)胞衰老，預(yù)防老年性疾病、心臟病、白內(nèi)障、癌癥、記憶力衰退等具有特殊功效，因而被國際糧農(nóng)組織列為五大健康食品之一，被譽(yù)為“21世紀(jì)功能性保健水果”和“水果皇后”[1]，是近年世界發(fā)展最為迅速的集營養(yǎng)保健于一身的第三代果樹新品種，風(fēng)靡世界。

國內(nèi)外對于藍(lán)莓組培快繁的研究較多[2-3]，利用莖段、葉片作為外植體開展研究，已在多個類群中建立了組培再生體系?！胺奂t檸檬水”屬兔眼藍(lán)莓系列，由于成熟后果實呈鮮艷的紅色，現(xiàn)已成為家庭盆栽種植、旅游觀光種植的新寵，市場需求量較大，常規(guī)扦插育苗受時節(jié)限制，繁殖速度較慢，生長勢差，果實品質(zhì)較低，組培快繁具有速度快、商品性高、連年生產(chǎn)、成本較低等優(yōu)勢，因此建立適于該品種穩(wěn)定高效的組培快繁體系意義重大。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗于2015年4月—2017年10月在上海青浦現(xiàn)代農(nóng)業(yè)園區(qū)組培實驗室和基地完成。品種為“粉紅檸檬水”，以4—5月藍(lán)莓新生枝條為材料，截取枝頂端10 cm長。

1.2 方法

1.2.1 外植體的選擇與消毒。從田間選擇無病健壯藍(lán)莓母株，截取枝頂端10 cm長，用自來水沖洗30 min后，在超凈臺上進(jìn)行消毒處理，用70%乙醇表面處理30 s，無菌水沖洗2次，然后用0.1%氯化汞處理8～10 min，最后用無菌水沖洗4次，將枝條剪切成至少帶1個腋芽的莖段，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上[4-5]。接種后移至培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，光照2 000 lx，16 h/d，溫度（25±1）℃，觀察記錄。

1.2.2 誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽。將藍(lán)莓莖段接種于含不同濃度玉米素ZT（0、2.0、4.0 mg/L）、NAA（0、0.1 mg/L）的改良WPM培養(yǎng)基上，每個培養(yǎng)瓶接種3個莖段。采用完全區(qū)組設(shè)計，共設(shè)6種培養(yǎng)基配比方案（表1），每周觀察記錄分生組織的生長動態(tài)，30 d后統(tǒng)計萌發(fā)率，萌發(fā)率=萌發(fā)芽數(shù)/無菌外植體數(shù)×100%。

1.2.3 繼代增殖。將誘導(dǎo)分化產(chǎn)生的健壯小苗進(jìn)行分割，然后把分割開的小苗接種到增殖培養(yǎng)基上，繼代組培苗株數(shù)為20株/瓶，每個處理10瓶，培養(yǎng)容器為200 mL玻璃瓶，增殖培養(yǎng)過60 d繼代1次。增殖培養(yǎng)基采用含玉米素ZT（0、0.3、0.5、1.0、1.5 mg/L）的改良WPM培養(yǎng)基，采用完全區(qū)組設(shè)計，共設(shè)立5種培養(yǎng)基配比方案，記為B1～B5。60 d后統(tǒng)計增殖系數(shù)及苗粗壯度，增殖系數(shù)=增殖芽數(shù)/正常叢芽數(shù)。

1.2.4 組培苗馴化與瓶外生根。由于組培苗在無菌、高濕、強(qiáng)光等優(yōu)越條件下生長形成，如直接將其移至大田，勢必會出現(xiàn)生理功能上的紊亂而不能成活，因此，移栽前要將培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)室中取出置于自然條件下，打開瓶蓋，讓幼苗進(jìn)行透氣鍛煉，以提高抗逆性。24 h后，從瓶中取出，將其剪成2～3 cm的莖段，速蘸生根液（1 g/L IBA）后栽入不同混合基質(zhì)（草炭∶珍珠巖為2∶1）及水苔蘚中。用塑料薄膜蓋好，保持濕度70%以上，初期適當(dāng)遮光，后期逐漸通風(fēng)，增加光照30 d后，可去除塑料薄膜，統(tǒng)計成活率，成活率=成活植株數(shù)/移栽植株數(shù)×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 初代誘導(dǎo)

由表2可知，A3～A6這4種培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)藍(lán)莓產(chǎn)生不定芽，即藍(lán)莓腋芽萌發(fā)需要ZT的參與。當(dāng)ZT超過2.0 mg/L時，萌發(fā)率并無顯著提高，但芽畸變率提高，表現(xiàn)為木質(zhì)化程度低，有黃化現(xiàn)象，這表明高濃度的ZT會影響莖尖的正常分化。該試驗表明，藍(lán)莓初代誘導(dǎo)過程中較適宜的植物生長調(diào)節(jié)劑為ZT 2.0 mg/L及NAA 0.1 mg/L。

2.2 莖段增殖

將誘導(dǎo)出的藍(lán)莓苗轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基上，60 d后調(diào)查芽的增殖情況。由表3可知，芽的增殖受ZT濃度的影響，較低濃度ZT有利于單芽生成（圖1），高濃度ZT反而會提高芽的畸變率，表現(xiàn)為苗纖細(xì)瘦弱，木質(zhì)化程度低，不利于持續(xù)的繼代增殖，該試驗認(rèn)為增殖過程中最適的植物生長調(diào)節(jié)劑為ZT 0.3～1.0 mg/L。

2.3 組培苗馴化與生根

將組培莖段剪切成2～3 cm（至少帶2個腋芽），速蘸生根液后栽入不同基質(zhì)中，由表4可知，混合基質(zhì)中的成活率只有68.33%，低于在水苔蘚中的成活率（85.00%），因此，藍(lán)莓組培苗瓶外生根時較理想的生根基質(zhì)為水苔蘚（圖2）。

3 結(jié)論與討論

該試驗以“粉紅檸檬水”的帶腋芽莖段為外植體，接種在添加ZT 2.0 mg/L及NAA 0.1 mg/L的改良WPM培養(yǎng)基上進(jìn)行初代誘導(dǎo)，將誘導(dǎo)的芽在添加0.3～1.0 mg/L ZT的改良WPM培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖，增殖系數(shù)達(dá)1.10～1.40，所誘導(dǎo)的藍(lán)莓苗木質(zhì)化程度較高，可直接用于瓶外扦插生根，最佳生根基質(zhì)為水苔蘚，生根成活率為85.00%。

已有的研究結(jié)果表明，藍(lán)莓組織培養(yǎng)以MS、WPM為基本培養(yǎng)基效果較好[6-8]，該研究采取改良WPM培養(yǎng)基，添加ZT，不僅增殖系數(shù)高，而且增殖苗的木質(zhì)化程度高，可以直接進(jìn)行瓶外扦插生根，成活率高，成本低，可實現(xiàn)工廠化快速育苗。作為第三代果品，藍(lán)莓有著廣闊的市場前景，組培育苗加快了繁育速度，為該品種的果樹種植推廣奠定了基礎(chǔ)。

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