張 劍 趙 燕

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院眼科，黑龍江 佳木斯 154002)

糖尿病(DM)是繼腫瘤、冠心病和腦血管病之后第4大嚴(yán)重威脅人類健康的一類代謝性疾病〔1〕。作為DM最常見(jiàn)的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，白內(nèi)障是致盲的主要原因，約占所有失明病例的一半(47.8%)〔2〕。目前，白內(nèi)障摘除術(shù)和人工晶體植入術(shù)是治療DM性白內(nèi)障的主要方法。然而，手術(shù)可導(dǎo)致許多嚴(yán)重的術(shù)后并發(fā)癥，如感染、角膜水腫和眼內(nèi)壓增高，尤其是老年人和高血糖情況下更易發(fā)生〔3〕。葛根素具有調(diào)節(jié)免疫功能、改善心肌收縮力、降血壓、降血糖及抑制血小板聚集等多種生物學(xué)活性〔4〕。本研究應(yīng)用腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)復(fù)制DM性白內(nèi)障大鼠模型，研究給予葛根素治療后大鼠晶狀體透明度及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)含量的變化，以明確葛根素治療DM性白內(nèi)障抗氧化作用及其機(jī)制。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和試劑 清潔級(jí)雄性Wistar大鼠購(gòu)自北京維通利華公司，體重(180±10)g；STZ購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；葛根素購(gòu)自浙江康恩貝制藥公司；MDA，SOD和 GSH-PX檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇 實(shí)驗(yàn)前大鼠應(yīng)用托吡卡胺滴眼散瞳后，裂隙燈顯微鏡下檢測(cè)示晶狀體透明度及空腹檢測(cè)尾靜脈血糖濃度，選取同時(shí)滿足晶狀體清澈透明和血糖濃度<6.7 mmol/L的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3模型復(fù)制與葛根素治療 Wistar大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w；按完全隨機(jī)原則分為對(duì)照組、DM組和葛根素治療(PT)組；禁食24 h后行一次性腹腔注射，對(duì)照組注射0.1 mmol/L檸檬酸緩沖液，DM組和PT組注射STZ(60 mg/kg，由0.1 mmol/L檬酸緩沖液配置)；72 h后，DM組和PT組空腹檢測(cè)尾靜脈血糖濃度，視血糖濃度≥16.7 mmol/L者為造模成功并進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)；各組每日行腹腔注射1次，CT組和DM組注射生理鹽水，PT組注射葛根素(140 mg/kg)。

1.4晶狀體透明度檢測(cè) 分別于腹腔給藥4、8和12 w，經(jīng)托吡卡胺散瞳后裂隙燈顯微鏡下觀察并按Bahmani等〔5〕標(biāo)準(zhǔn)將晶狀體透明度分為Ⅰ級(jí)(晶狀體清澈透明)、Ⅱ級(jí)(晶狀體稍有混濁，細(xì)小空泡見(jiàn)于晶狀體周邊)、Ⅲ級(jí)(晶狀體較為混濁，空泡向中心擴(kuò)散，霧狀混濁見(jiàn)于部分皮質(zhì))、Ⅳ級(jí)(晶狀體顯著混濁，空泡擴(kuò)散入核區(qū)，霧狀混濁見(jiàn)于晶體核及核周邊皮質(zhì))和Ⅴ級(jí)(晶狀體完全混濁，顯著混濁見(jiàn)于核區(qū))。

1.5氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測(cè) 于腹腔給藥后12 w，脫頸法處死大鼠并獲取完整晶狀體；加入勻漿介質(zhì)用勻漿器勻漿；4℃環(huán)境下離心(14 000 r/min，10 min)后收取上清；按試劑操作說(shuō)明書(shū)檢測(cè)MDA、SOD和 GSH-PX含量。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行χ2、q檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1葛根素影響晶狀體透明度 實(shí)驗(yàn)后4、8和12 w，與對(duì)照組比較，DM組和PT組晶狀體透明度著降低(P<0.01)；實(shí)驗(yàn)后8 w和12 w， 與DM組比較，PT組晶狀體透明顯著升高(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組影響晶狀體透明度分級(jí) (n，n=20)

與對(duì)照組比較：1)P<0.01;與DM組比較：2)P<0.05；表2同

2.2葛根素晶狀體氧化應(yīng)激 實(shí)驗(yàn)后12 w， 與對(duì)照組比較，DM組和PT組晶狀體MDA含量顯著增高，SOD 和GSH-PX含量顯著降低(P<0.01)；與DM組比較，PT組大鼠晶狀體MDA含量顯著降低，SOD 和GSH-PX含量顯著增高(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組晶狀體MDA、SOD和GSH-PX含量

3 討 論

氧化應(yīng)激是指機(jī)體在內(nèi)外環(huán)境各種刺激作用下，促氧化和抗氧化系統(tǒng)間動(dòng)態(tài)平衡被打破，致使氧化過(guò)程強(qiáng)于氧化物清除過(guò)程，組織細(xì)胞中活性氧(ROS)大量蓄積而產(chǎn)生細(xì)胞毒性，引發(fā)細(xì)胞凋亡及組織損傷，并誘發(fā)多種疾病。反應(yīng)氧化應(yīng)激損傷的常用指標(biāo)有ROS、活性氮(RNS)和脂質(zhì)過(guò)氧化物等，脂質(zhì)過(guò)氧化物主要包括MDA和4-羥基壬烯酸(HNE)等，他們是由ROS攻擊多不飽和脂肪酸側(cè)鏈及核酸等大分子物質(zhì)而產(chǎn)生的，故通過(guò)檢測(cè)脂質(zhì)過(guò)氧化物(如MDA)可評(píng)估機(jī)體氧化應(yīng)激損傷程度〔6，7〕。Bala等〔8〕報(bào)道，在DM性白內(nèi)障中，作為促進(jìn)蛋白質(zhì)交聯(lián)的活性成分，MDA可誘發(fā)膜蛋白變性而致使晶狀體混濁。體內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)有酶和非酶兩類，前者包括 SOD、GSH-PX和過(guò)氧化氫酶(CAT)等，后者包括維生素C、維生素 E、巰基化合物等〔9〕。SOD能與超氧化物陰離子(O-2) 發(fā)生歧化反應(yīng)，進(jìn)而清除后者以發(fā)揮抗氧化作用，而GSH-PX可經(jīng)下調(diào)過(guò)氧化氫(H2O2)、氫氧化物，抑制氧化反應(yīng)而產(chǎn)生抗脂質(zhì)過(guò)氧化功能，因此SOD、GSH-PX 含量可評(píng)估組織細(xì)胞抗氧化能力〔10〕。在糖尿病中，Jonas等〔11〕報(bào)道胰島β細(xì)胞利用自身合成的錳SOD(MnSOD)催化超氧化物轉(zhuǎn)變?yōu)镠2O2，但由于胰島β細(xì)胞合成過(guò)氧化物解毒酶(CAT和GSH-PX等)的能力有限，故進(jìn)一步分解、清除H2O2過(guò)程受阻，提示這是β細(xì)胞易受ROS攻擊和損傷的機(jī)制之一。

本研究結(jié)果提示葛根素經(jīng)抑制脂質(zhì)過(guò)氧化物和清除ROS而降低氧化應(yīng)激損傷，進(jìn)而對(duì)DM性白內(nèi)障進(jìn)程起到一定延緩作用。

1沈燁宇，劉文斌.STZ性糖尿病性大鼠白內(nèi)障的AQP0、AQP1下調(diào)表達(dá)及Ca2+內(nèi)流參與機(jī)制〔J〕.海南醫(yī)學(xué)，2014;25(22):3290-2.

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3Kumar PA，Reddy PY，Srinivas PN，etal.Delay of diabetic cataract in rats by the antiglycating potential of cumin through modulation of alpha-crystallin chaperone activity〔J〕.J Nutr Biochem， 2009;20(7):553-62.

4張環(huán)宇，李大偉，史彩虹.葛根素的臨床應(yīng)用研究進(jìn)展〔J〕.現(xiàn)代藥物與臨床，2012;27(1):75-8.

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6任春久，張 瑤，崔為正，等.氧化應(yīng)激在2型糖尿病發(fā)病機(jī)制中的作用研究進(jìn)展〔J〕.生理學(xué)報(bào)，2013;65(6):664-73.

7李云婷，陳麗榮，李 詩(shī)，等.陽(yáng)老年糖尿病酮癥酸中毒患者外周血氧化應(yīng)激及炎癥指標(biāo)的改變〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2017;37(13):3205-7.

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9戴青原，郭 濤.氧化應(yīng)激與糖尿病及動(dòng)脈粥樣硬化研究進(jìn)展〔J〕.心血管病學(xué)進(jìn)展，2013;34(5):664-8.

10張 劍，齊艷秀，姜 偉，等.白藜蘆醇對(duì)糖尿病性白內(nèi)障大鼠 MDA、SOD和GSH-Px的影響〔J〕.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2016;50(6):497-500.

11Jonas JC，Bensellam M，Duprez J，etal.Glucose regulation of islet stress responses and beta-cell failure in type 2 diabetes〔J〕.Diabetes Obes Metab，2009;11(Suppl 4):65-81.