高長斌，馮媛媛，喬 琳，姚宏明，介琳霞，劉 蕊

（北京大偉嘉生物技術(shù)股份有限公司，北京市飼用微生態(tài)制劑工程技術(shù)研究中心，微生態(tài)制劑關(guān)鍵技術(shù)開發(fā)北京市工程實(shí)驗(yàn)室，北京 100085）

微生態(tài)制劑具有綠色、安全、高效等優(yōu)點(diǎn)，將微生態(tài)制劑應(yīng)用于產(chǎn)蛋雞中可使其生產(chǎn)性能明顯提高、蛋品質(zhì)顯著改善[1]。其中，乳酸菌作為腸道的優(yōu)勢菌群，具有兼性厭氧的特性，能夠在腸道氧氣極度缺乏的環(huán)境中保持良好的生長，因此被廣泛應(yīng)用于微生態(tài)制劑中。乳酸菌產(chǎn)生的有機(jī)酸、過氧化氫、丁二酮、細(xì)菌素和抗菌肽可有效抑制腸道致病菌，促進(jìn)腸道內(nèi)乳酸菌和雙歧桿菌的生長，調(diào)節(jié)腸道菌群，維持腸道內(nèi)菌群的平衡[2-3]，從而促進(jìn)腸道的消化吸收能力，使畜禽獲得更豐富的營養(yǎng)。任景樂等[4]報(bào)道，在蛋雞日糧中添加乳酸菌制劑，可以提升飼料的利用率，提高蛋雞的產(chǎn)蛋率，降低料蛋比。

目前，有關(guān)植物乳桿菌的報(bào)道多集中于食品發(fā)酵和對人的腸道菌群調(diào)節(jié)領(lǐng)域。本試驗(yàn)旨在研究蛋雞日糧中添加植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）WEI-70菌粉對蛋雞的生產(chǎn)性能、雞蛋品質(zhì)、臟器指數(shù)、腸黏膜組織及臟器病理變化的影響，為綠色、安全畜禽產(chǎn)品的生產(chǎn)提供依據(jù)和指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 菌株 本試驗(yàn)使用的菌株為植物乳桿菌WEI-70由微生態(tài)制劑關(guān)鍵技術(shù)開發(fā)北京市飼用微生物生態(tài)制劑工程技術(shù)研究中心分離自230日齡產(chǎn)蛋雞的盲腸內(nèi)容物，其菌粉為本實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過液體高密度發(fā)酵和真空冷凍干燥生產(chǎn)的凍干菌粉，菌粉活菌數(shù)≥1×1011CFU/g，菌粉在試驗(yàn)前用基礎(chǔ)日糧稀釋到所需濃度。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)在北京密云某蛋雞養(yǎng)殖公司進(jìn)行。試驗(yàn)使用305日齡海蘭褐蛋雞288只，隨機(jī)分為2組，每組設(shè)6個重復(fù)，每個重復(fù)24只雞，處理組之間體重及產(chǎn)蛋率差異不顯著。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧[1,5-6]，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧中添加植物乳桿菌WEI-70凍干菌粉，每克日糧中的活菌濃度為1×106CFU。

1.3 試驗(yàn)日糧與飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)采用玉米-豆粕型日糧，日糧組成及營養(yǎng)成分見表1[7]。試驗(yàn)采用3層階梯式籠養(yǎng)，試驗(yàn)組和對照組在相同環(huán)境和管理?xiàng)l件下飼養(yǎng)，自由采食，自由飲水，試驗(yàn)期間按免疫程序正常接種疫苗。調(diào)整雞群至組間初始體重?zé)o顯著差異（P＞0.05）。每天以重復(fù)為單位記錄采食量，監(jiān)測雞群健康狀況。預(yù)試期7 d，試驗(yàn)組與對照組均飼喂基礎(chǔ)日糧，飼喂飲水方式、光照時長、溫度控制、通風(fēng)時間等條件均保持一致，預(yù)試期按各重復(fù)統(tǒng)計(jì)產(chǎn)蛋率，并根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，使各組在正式試驗(yàn)開始時的產(chǎn)蛋率無顯著性差異（P＞0.05）。試驗(yàn)期 70 d[8]。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)成分

1.4 測定指標(biāo)與方法

1.4.1 生產(chǎn)性能 試驗(yàn)期間，每天按各重復(fù)記錄各組的采食量、產(chǎn)蛋總數(shù)、總蛋重、死淘數(shù)，試驗(yàn)結(jié)束計(jì)算全期平均蛋重、平均產(chǎn)蛋率、平均日采食量、平均日產(chǎn)蛋重和平均料蛋比、死淘率。

1.4.2 雞蛋品質(zhì) 分別在試驗(yàn)開始和結(jié)束時，試驗(yàn)組和對照組在同一天的09:00—11:00采集雞蛋，以重復(fù)為單位，每個重復(fù)隨機(jī)選取3枚雞蛋，每組18枚，進(jìn)行蛋品質(zhì)指標(biāo)測定。蛋殼厚度采用蛋殼厚度測定儀（ModelP-1，Ozaki MFG.Co.L.td.，Tokyo，Japan）測定。蛋白高度、蛋黃顏色、哈氏單位和蛋殼顏色采用蛋品質(zhì)測定儀（EMT-2500 Robotmation Co.L.td.，Tokyo，Japan）測定。利用游標(biāo)卡尺測量蛋的縱徑和橫徑，計(jì)算蛋形指數(shù)。

1.4.3 臟器指數(shù) 試驗(yàn)結(jié)束，每組的每個重復(fù)各選擇1只體重與該重復(fù)平均體重接近的雞，空腹稱重，頸動脈放血處死，解剖，摘取心、肝和脾，剔除脂肪后稱重，計(jì)算臟器指數(shù)。臟器指數(shù)= 臟器重量（g）/體重（kg）。同時取完整的十二指腸、空腸及稱重后的心臟、肝臟、脾臟留作組織病理檢查。

1.4.4 組織病理檢查 于十二指腸和空腸的近端分別截取2 cm長腸段，同時剪取心臟、肝臟和脾臟樣品浸于10%甲醛固定，用梯度乙醇逐級脫水，二甲苯洗滌，石蠟包埋，分別在腸段5個位點(diǎn)連續(xù)切取3～6個腸環(huán)橫斷面，制備6 μm厚石蠟切片，蘇木精-伊紅（HE）染色，光學(xué)顯微鏡10×、20×和40×倍數(shù)下觀察各臟器的基本形態(tài)和病理學(xué)改變，并用圖像采集系統(tǒng)采集相應(yīng)組織圖像[9]。絨毛高度定義為腸絨毛的最尖端和絨毛與隱窩的連接處之間的直線距離。隱窩深度定義為2根腸絨毛之間內(nèi)陷的深度[10]。絨毛高度、隱窩深度和黏膜厚度的分析采用北航Cmiaswin system多功能真彩色病理圖像分析系統(tǒng)。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 16.0軟件的獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)程序進(jìn)行方差分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。P＜0.05表示差異顯著，P＞0.05表示差異不顯著。

2 結(jié) 果

2.1 植物乳桿菌WEI-70菌粉對蛋雞生產(chǎn)性能的影響由表2可知，相比對照組，試驗(yàn)組日產(chǎn)蛋重顯著提高了2.71%（P＜0.05），平均料蛋比顯著下降了3.27%（P＜0.05）。試驗(yàn)組的平均蛋重、平均產(chǎn)蛋率較對照組無顯著差異（P＞0.05）。試驗(yàn)組與對照組的死淘率均為0。

表2 植物乳桿菌WEI-70菌粉對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 植物乳桿菌WEI-70菌粉對蛋品質(zhì)的影響 由表3可知，在試驗(yàn)結(jié)束時，同對照組相比，試驗(yàn)組的雞蛋哈氏單位顯著提高了3.42%（P＜0.05），蛋黃顏色顯著提高了4.37%（P＜0.05）；試驗(yàn)組的蛋形指數(shù)、蛋殼顏色、蛋白高度有提高趨勢（P＞0.05）。

2.3 植物乳桿菌WEI-70菌粉對蛋雞臟器指數(shù)的影響解剖時通過臨床觀察，試驗(yàn)組和對照組的內(nèi)臟器官均沒有出現(xiàn)肝腫大、脾腫大和盲腸擴(kuò)大。由表4可知，試驗(yàn)組和對照組的臟器指數(shù)均無顯著性差異（P＞0.05）。

2.4 植物乳桿菌WEI-70菌粉對蛋雞重要組織病理變化的影響 由圖1～3可知，試驗(yàn)組和對照組都沒有出現(xiàn)臟器實(shí)質(zhì)性病變、炎性細(xì)胞和相應(yīng)淋巴細(xì)胞的增多以及結(jié)構(gòu)疏松和水腫等。由圖4～5可知，試驗(yàn)組和對照組的十二指腸和空腸的腸道黏膜的完整性良好，均無黏膜上皮細(xì)胞脫落、固有層裸露、固有層疏松以及淋巴細(xì)胞浸潤造成炎性反應(yīng)等。

由表5可知，試驗(yàn)組和對照組十二指腸的絨毛高度、隱窩深度和黏膜厚度均無顯著差異（P＞0.05）；試驗(yàn)組空腸的絨毛高度相比對照組顯著提高了31.82%（P＜0.05），而隱窩深度下降了7.79%（P＞0.05），黏膜厚度提高了19.22%（P＞0.05）。

圖1 心臟的組織切片

圖2 肝臟的組織切片

圖3 脾臟的組織切片

表3 植物乳桿菌WEI-70菌粉對蛋品質(zhì)的影響

表4 植物乳桿菌WEI-70菌粉對蛋雞臟器指數(shù)的影響

表5 植物乳桿菌WEI-70菌粉對蛋雞腸道絨毛高度、隱窩深度及黏膜厚度的影響 μm

圖4 十二指腸的組織切片

圖5 空腸的組織切片

3 討 論

3.1 植物乳桿菌WEI-70菌粉對蛋雞生產(chǎn)性能及蛋品質(zhì)的影響 在腸道中乳酸菌產(chǎn)生的乳酸使腸道內(nèi)pH降低，這有利于碳水化合物的降解、氨基酸的合成以及機(jī)體對營養(yǎng)物質(zhì)的利用，并且日糧中添加的乳酸菌可以定殖在腸道中持續(xù)發(fā)揮作用。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組的平均日產(chǎn)蛋重顯著提高，平均料蛋比顯著下降，這是得益于植物乳桿菌在腸道中發(fā)揮的作用。任景樂等[4]報(bào)道，在每克蛋雞日糧中添加1×106CFU復(fù)合乳酸菌菌粉，飼喂4周，日產(chǎn)蛋重提升了3.75%，平均料蛋比下降了10.57%。這與本研究的結(jié)果基本一致，只是料蛋比下降幅度更大。侯成立等[5]報(bào)道，在保育豬日糧中添加植物乳桿菌飼喂二元斷奶仔豬30 d，末重提高了5.58%，日增重提高了8.01%，耗料增重比降低了7.73%，飼料轉(zhuǎn)化率得到顯著改善。

曲湘勇等[11]報(bào)道，東鄉(xiāng)黑羽綠殼蛋雞采食30 mg/kg的包膜乳酸菌劑4周可提升平均蛋重4.04%，可提升平均產(chǎn)蛋率7.80%，可降低料蛋比14.60%，顯著提高東鄉(xiāng)黑羽綠殼蛋雞的生產(chǎn)性能，可提升蛋殼厚度4.71%，提升蛋黃色澤41.86%，提升哈氏單位7.7%，顯著提高雞蛋品質(zhì)，促進(jìn)雞蛋的保鮮能力，這與本研究結(jié)果基本一致，但這些指標(biāo)均比本試驗(yàn)的提升幅度更大，可能是由于本試驗(yàn)使用的菌劑沒有進(jìn)行包被處理，在消化道中保護(hù)能力不夠。同時蛋黃顏色提高的幅度遠(yuǎn)超本試驗(yàn)，這可能與蛋雞品種的差異有關(guān)。植物乳桿菌在產(chǎn)蛋雞的飼喂過程中能提高蛋黃中類胡蘿卜素的種類和沉積量，從而使蛋黃的顏色加深[12]。龍愛琳等[13]報(bào)道，在羅曼粉殼蛋雞日糧中添加1×107CFU/g的植物乳桿菌菌劑，雞蛋的蛋黃顏色提高了2.91%，這與本研究結(jié)果相似。Jahanian等[8]報(bào)道，產(chǎn)蛋雞日糧中添加植物乳桿菌的代謝產(chǎn)物飼喂8周，雞蛋中多種不飽和脂肪酸得到了顯著的提升，從而顯著提高了蛋黃顏色，這與本研究的結(jié)果一致。

3.2 植物乳桿菌WEI-70對蛋雞腸道組織的影響 在本研究中空腸的絨毛高度提升了31.82%，這與Cao等[14]研究結(jié)果一致，而十二指腸的絨毛高度、隱窩深度和黏膜厚度均沒有顯著提升。由于乳酸菌在腸道內(nèi)定殖，產(chǎn)生的大量短鏈脂肪酸能促進(jìn)腸上皮細(xì)胞的生長，致使腸道中絨毛高度得到顯著提升[15]，由于腸絨毛高度提高和腸絨毛完整性的改善，使腸黏膜的表面積顯著增加，增強(qiáng)了腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力，從而使機(jī)體有了更充足的營養(yǎng)[16]，所以蛋雞的生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)顯著提升。然而，本研究中為何植物乳桿菌WEI-70僅僅促進(jìn)了空腸絨毛高度的增加，十二指腸絨毛高度沒有顯著變化，原因有待進(jìn)一步研究。

3.3 植物乳桿菌WEI-70對蛋雞重要組織病理變化的影響 肝腫大和脾腫大是反映感染性的間接指標(biāo)。通過臨床觀察，試驗(yàn)組和對照組的心臟、肝臟、脾臟、十二指腸和空腸均沒有出現(xiàn)實(shí)質(zhì)性病變和明顯差異，試驗(yàn)組和對照組的臟器指數(shù)也無顯著性差異。外周血嗜中性粒細(xì)胞或嗜酸性粒細(xì)胞是反映細(xì)菌感染的有效指標(biāo)。通過組織切片病理分析，未發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組的臟器實(shí)質(zhì)性病變、炎性細(xì)胞和相應(yīng)淋巴細(xì)胞的增多以及結(jié)構(gòu)疏松和水腫等，并且與對照組無明顯病理差異，說明植物乳桿菌WEI-70沒有引起產(chǎn)蛋雞的感染或病理反應(yīng)。

腸道黏膜在阻止?jié)撛谥虏【蛴卸疚镔|(zhì)侵襲全身組織上發(fā)揮重要的屏障作用。本研究的植物乳桿菌WEI-70對試驗(yàn)組產(chǎn)蛋雞的十二指腸和空腸的腸道黏膜的完整性沒有不良影響，不會造成黏膜上皮細(xì)胞脫落、固有層裸露、固有層疏松以及淋巴細(xì)胞浸潤造成炎性反應(yīng)等，說明植物乳桿菌WEI-70沒有感染性和致病性。Giannenas等[17]在研究屎腸球菌（Enterococcus faecium）對育肥豬的腸道黏膜影響的毒性評價(jià)時也得出相似的結(jié)論。

4 結(jié) 論

植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）WEI-70凍干菌粉應(yīng)用于蛋雞生產(chǎn)中，能顯著提高平均蛋重，顯著降低料蛋比，提高飼料消化率，顯著提高雞蛋的哈氏單位和蛋黃顏色，同時顯著提高空腸腸絨毛的高度和完整性，表明植物乳桿菌WEI-70可顯著提高產(chǎn)蛋雞的生產(chǎn)性能和蛋白質(zhì)。蛋雞的心、肝、脾的臟器重量和臟器指數(shù)均沒有明顯變化，植物乳桿菌WEI-70也沒有造成蛋雞的心臟、肝臟、脾臟、十二指腸和空腸的器質(zhì)性病變，表明植物乳桿菌WEI-70具有良好的安全性。

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