高 凱，李曉東，王 震，韓東魁，姜 洋，張 敏

（延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院，吉林延吉 133002）

隨著生活水平的提高，人們對(duì)畜禽產(chǎn)品品質(zhì)的要求越來越高，新型綠色飼料添加劑的開發(fā)應(yīng)用越來越受到重視。中藥添加劑是一種可代替抗生素的綠色無殘留的新型飼料添加劑，可提高雞的采食量和消化率，促進(jìn)其免疫器官的發(fā)育[1-2]。而硫磺負(fù)離子制劑不僅能提高蛋雞血液中免疫球蛋白的含量，改善蛋雞的抗氧化性能，還可促進(jìn)蛋雞對(duì)日糧中氮、磷的吸收，降低排泄物對(duì)環(huán)境的污染[3-4]。復(fù)合制劑中的有機(jī)硒由乳酸菌發(fā)酵富集Na2SeO3制得，有機(jī)鍺是由酵母菌發(fā)酵富集GeO2制得。有機(jī)硒比無機(jī)硒更易吸收、毒性更低、效果更好[5]，有試驗(yàn)證實(shí)，在蛋雞日糧中添加富硒乳酸菌可提高雞蛋品質(zhì)和血清IgG含量，改善抗氧化酶活性[6]。?obanová等[7]在綿羊日糧中添加Na2SeO3和酵母硒，發(fā)現(xiàn)2種補(bǔ)硒飼料都可提高血液和組織中谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性，提高吞噬細(xì)胞活性，但酵母硒補(bǔ)硒飼料能顯著提高肝臟和回腸黏膜的硫氧還原蛋白還原酶活性，降低肝臟和十二指腸黏膜中的丙二醛（MDA）含量。有機(jī)鍺具有提高機(jī)體抵抗力、刺激組織細(xì)胞再生功能、消除氧化自由基等生理特性[8]，且在家禽生產(chǎn)中的應(yīng)用較為普遍。前人研究表明，在降低蛋雞血脂和提高生產(chǎn)性能方面，有機(jī)鍺的作用效果明顯優(yōu)于無機(jī)鍺[9-11]。酵母和乳酸菌培養(yǎng)物還具有酵母菌和乳酸菌自身物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與未知生長因子，因此在提高蛋雞的生產(chǎn)性能和雞蛋品質(zhì)、改善蛋雞腸道菌群平衡方面起到了積極的作用[12-15]。本試驗(yàn)在前人研究的基礎(chǔ)上使用0.5%中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑研究其對(duì)蛋雞生理機(jī)能及免疫抗氧化性能的影響，為該添加劑的推廣提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑由延邊大學(xué)飼料研究所提供，由中藥制劑、硫磺負(fù)離子制劑、乳酸硒和酵母鍺按照科學(xué)配比混合制成。中藥制劑是將紅棗、山藥、神曲粉碎后，按科學(xué)比例混合制成；硫磺負(fù)離子制劑是通過對(duì)硫磺礦物粉、電氣石粉等進(jìn)行特殊加工制成；乳酸硒[16]是由乳酸菌富集發(fā)酵Na2SeO3，經(jīng)低溫（65℃）烘干后，粉碎（150目）制成，經(jīng)檢測有機(jī)硒含量為7.46 mg/L。酵母鍺[17]是由啤酒酵母富集發(fā)酵GeO2，經(jīng)低溫（65℃）烘干后，粉碎（150目）制成，經(jīng)檢測有機(jī)鍺含量為11.83 mg/kg。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)成分

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理 選取200只28周齡的健康海蘭褐蛋雞，隨機(jī)分成2組，每組100只雞，4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)25只，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組飼喂基礎(chǔ)日糧+0.5%中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑。預(yù)試期7 d，正試期42 d，共49 d。

試驗(yàn)蛋雞進(jìn)行階梯式籠養(yǎng)，試驗(yàn)開始前對(duì)雞舍進(jìn)行徹底的清掃和嚴(yán)格的消毒。雞舍采取自然通風(fēng)和機(jī)械通風(fēng)相結(jié)合，保證空氣清新流動(dòng)，降低有害氣體、粉塵濃度。保證舍溫25℃左右、濕度75%左右、光照16 h。每天06:00和18:00進(jìn)行飼喂，保證蛋雞自由飲水與采食。同時(shí)按照計(jì)劃進(jìn)行常規(guī)免疫，也要避免各種因素刺激產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，影響試驗(yàn)結(jié)果。

1.3 試驗(yàn)樣品的采集與測定 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，每組每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取5只雞，空腹12 h后，用一次性注射器進(jìn)行翼下靜脈采血，采血量為10 mL/只，注入普通采血管，靜置4 h，用XYJ80-2型電動(dòng)離心機(jī)（3 500 r/min、10 min）離心，分離出血清樣，放在低溫冰箱（-20℃）中保存。

生理機(jī)能指標(biāo)中，血清總蛋白（TP）采用考馬斯亮藍(lán)法測定；白蛋白（ALB）采用溴甲酚綠法測定；球蛋白（GLO）=TP—ALB；血清尿素氮（BUN）采用二乙酰肟比色法測定；總膽固醇（TC）和甘油三酯（TG）采用單試劑GPO-PAP法測定；高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）采用雙試劑直接法測定；谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）采用紫外比色法測定。

免疫和抗氧化指標(biāo)中，免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）采用免疫比濁法測定；超氧化物歧化酶（SOD）采用羥胺法測定；MDA采用TBA法測定；GSH-Px采用比色法測定。

以上指標(biāo)測定所需試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，由北京華英生物技術(shù)研究所完成檢測。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)采用SPSS20.0軟件處理，差異顯著性檢驗(yàn)采用單因素方差分析，并進(jìn)行獨(dú)立性T檢驗(yàn)分析，統(tǒng)計(jì)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑對(duì)蛋雞血液含氮物的影響 由表2可知，試驗(yàn)組的血清TP含量略高于對(duì)照組（P＞0.05）；ALB含量與ALB/GLO分別比對(duì)照組顯著升高了8.33%、11.11%（P＜0.05）；血清中的BUN與對(duì)照組差異不顯著(P＞0.05)。

表2 中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑對(duì)蛋雞血液含氮物的影響

2.2 中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑對(duì)蛋雞血液脂類影響 由表3可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組TC含量顯著下降了8.68%（P＜0.05），HDL含量顯著升高了8.24%（P＜0.05）。試驗(yàn)組TG和LDL含量低于對(duì)照組（P＞0.05）。

表3 中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑對(duì)蛋雞血液脂類影響mmol/L

2.3 中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑對(duì)蛋雞血液轉(zhuǎn)氨酶的影響 由表4可知，試驗(yàn)組GOT、GPT與對(duì)照組無顯著差異（P＞0.05）。

表4 中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑對(duì)蛋雞血液轉(zhuǎn)氨酶的影響 IU/L

2.4 中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑對(duì)蛋雞血液中免疫球蛋白的影響 由表5可知，試驗(yàn)組血清IgG含量比對(duì)照組顯著升高了4.89%（P＜0.05）；而IgM、IgA在2組間差異不顯著（P＞0.05）。

表5 中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑對(duì)蛋雞血液中免疫球蛋白的影響 g/L

2.5 中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑對(duì)蛋雞血液中抗氧化酶的影響 由表6可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組血清SOD和GSH-Px活性分別極顯著升高了23.49%、17.82%（P＜0.01）；血清MDA含量極顯著下降了32.08%（P＜0.01）。

表6 中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑對(duì)蛋雞血液中抗氧化酶的影響

3 討 論

3.1 中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑對(duì)蛋雞生理機(jī)能的影響 血清TP包括血清GLO和血清ALB。血清GLO由免疫系統(tǒng)刺激淋巴產(chǎn)生，可以清除體內(nèi)病菌。血清ALB由動(dòng)物肝臟合成，具有運(yùn)輸養(yǎng)分、修補(bǔ)組織、維持血液膠體滲透壓等作用。血清BUN主要由肝臟合成，經(jīng)腎臟排泄。血清BUN含量表示蛋雞對(duì)含氮物的代謝水平以及沉積蛋白質(zhì)的能力，間接影響雞蛋的品質(zhì)，反映蛋雞肝臟和腎功能的健全與否。乳酸菌和酵母菌菌體及其代謝產(chǎn)物可改善蛋雞腸道微生物環(huán)境，而有機(jī)硒、有機(jī)鍺和中藥負(fù)離子成分可增強(qiáng)肝功能，且中藥中的紅棗具有明顯的安神抗應(yīng)激功能，山藥和神曲提高脾胃的消化功能，因此復(fù)合制劑可通過有效地調(diào)節(jié)蛋雞消化系統(tǒng)，促進(jìn)蛋雞對(duì)飼料蛋白的吸收利用，提高蛋雞對(duì)蛋白質(zhì)的代謝水平[18-20]。本試驗(yàn)中，添加0.5%中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑可提高血清TP、血清ALB與ALB/GLO，血清BUN的含量有降低趨勢，不會(huì)對(duì)蛋雞肝臟及腎臟產(chǎn)生不良影響。

血漿中TG是主要的能源物質(zhì)，可為蛋雞機(jī)體提供必需脂肪酸，具有運(yùn)輸養(yǎng)分的功能，能促進(jìn)蛋雞體內(nèi)脂溶性維生素的吸收利用，同時(shí)也是構(gòu)成血漿脂蛋白的成分。膽固醇在蛋雞機(jī)體中廣泛存在，是細(xì)胞膜的重要構(gòu)成因素，可以增強(qiáng)細(xì)胞膜韌性，維護(hù)細(xì)胞正常生理功能；同時(shí)膽固醇是合成膽汁酸的重要原料，可維護(hù)蛋雞肝功能。內(nèi)源性膽固醇酯和內(nèi)源性膽固醇磷脂都由肝細(xì)胞和組織細(xì)胞水解，但LDL轉(zhuǎn)運(yùn)內(nèi)源膽固醇酯通過細(xì)胞膜上的受體介導(dǎo)進(jìn)入組織細(xì)胞，速度較慢容易沉積，HDL轉(zhuǎn)運(yùn)內(nèi)源性膽固醇磷脂直接進(jìn)入肝細(xì)胞內(nèi)，轉(zhuǎn)運(yùn)速度較快，具有清理血液中膽固醇的功能[21]。本試驗(yàn)中，添加0.5%中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑顯著降低了蛋雞的血清TC，TG也有下降趨勢，說明該制劑具有促進(jìn)蛋雞機(jī)體脂質(zhì)代謝，降低蛋雞血液膽固醇的功能。但添加0.5%中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑顯著提高了蛋雞血清HDL含量，有降低蛋雞血清LDL含量的趨勢，與王佳藝等[3]、王慧明等[22]報(bào)道的硫磺負(fù)離子可以降低動(dòng)物機(jī)體血清HDL和血清LDL含量有所不同，這可能是由于復(fù)合物制劑中的有機(jī)硒、有機(jī)鍺促進(jìn)了蛋雞機(jī)體脂代謝，刺激機(jī)體分泌HDL，使其在血液中的含量增加，由于蛋雞體脂代謝較為復(fù)雜，具體機(jī)理還需進(jìn)一步研究。

GOT與GPT主要存在于肝臟的組織細(xì)胞中，在肝細(xì)胞受損時(shí)釋放入血中，肝臟病變會(huì)引起GOT與GPT活力明顯升高，因此蛋雞血清中GOT和GPT活力高低可以反映肝臟是否受損[23]。本試驗(yàn)中，蛋雞日糧中添加0.5%中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑對(duì)蛋雞血清GOT和GPT含量沒有顯著影響，表明該復(fù)合制劑不會(huì)對(duì)蛋雞肝臟造成不良影響。

3.2 中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑對(duì)蛋雞免疫和抗氧化性能的影響 血清IgG是血液主要抗體，可以通過抑制和中和作用以及補(bǔ)體結(jié)合殺滅多種病毒和微生物，因此血清IgG含量可以代表蛋雞的免疫水平。血清IgM是免疫反應(yīng)的早期抗體，在抵抗微生物方面具有高效能，對(duì)革蘭陰性菌殺菌能力極強(qiáng)。血清IgA含量僅次于血清IgG，血清型IgA可結(jié)合抗原，清除體內(nèi)毒素，分泌型IgA主要存在于體液（如初乳）和黏膜（如胃腸道黏膜）中。本試驗(yàn)中，蛋雞日糧中添加0.5%中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑可以顯著提高蛋雞血清IgG含量，主要是復(fù)合制劑中的有機(jī)硒和有機(jī)鍺刺激蛋雞相關(guān)免疫器官的漿細(xì)胞產(chǎn)生，提高了血清中免疫球蛋白含量[24-25]，此外酵母和乳酸菌自身所含有的代謝產(chǎn)物與未知因子也起到了調(diào)節(jié)免疫的作用；但血清IgM與IgA含量基本無差異，可能與復(fù)合制劑添加量及IgA和IgM自身特性和體內(nèi)分布有關(guān)，具體機(jī)制需進(jìn)一步研究。

SOD具有強(qiáng)氧化性，可以清除蛋雞體內(nèi)細(xì)胞代謝產(chǎn)生的超氧陰離子自由基，降低自由基對(duì)蛋雞機(jī)體的損傷。MDA是自由基膜脂過氧化的最終產(chǎn)物，作為一種氧自由基水平的指標(biāo)。GSH-Px是動(dòng)物機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化酶之一，其活力大小也反映機(jī)體含硒的水平。本試驗(yàn)中，蛋雞日糧中添加0.5%中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑，極顯著提高血清SOD和血清GSH-Px活性，降低了血清MDA的含量，主要是由于復(fù)合生物制劑中的負(fù)離子成分結(jié)合了蛋雞體內(nèi)的超氧自由基，降低了機(jī)體內(nèi)有害自由基的濃度，進(jìn)而提高了蛋雞自身的抗氧化性能。此外，復(fù)合制劑中所含的硒元素也具有很好的抗氧化能力[25]。

4 結(jié) 論

在蛋雞基礎(chǔ)日糧中添加0.5%的中藥負(fù)離子硒鍺復(fù)合生物制劑，可改善蛋雞的生理機(jī)能，增強(qiáng)蛋雞免疫力和抗氧化性能，且對(duì)蛋雞肝臟無不良影響。

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