陳新丹，伍源鶴，朱 勇，張 京，徐維娜，徐建雄

（1.上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院，上海市獸醫(yī)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200240；2.上海市崇明區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 202150）

對(duì)于反芻動(dòng)物而言，妊娠后期及泌乳前期是一段關(guān)鍵時(shí)期[1]。一方面，由于胎兒生長(zhǎng)發(fā)育的需求和母體代謝增加，母羊妊娠后期及泌乳期激增的自由基破壞了機(jī)體的穩(wěn)衡體系，導(dǎo)致氧化應(yīng)激和氧化損傷[2]。而集約化養(yǎng)殖條件以及一些環(huán)境應(yīng)激又加重了母羊的氧化應(yīng)激，增加了早產(chǎn)、先兆子癇、胎兒發(fā)育阻滯和流產(chǎn)的發(fā)生率[3]。另一方面，出生1～2周內(nèi)的羔羊生長(zhǎng)發(fā)育迅速，但是適應(yīng)環(huán)境能力較差，母乳作為主要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，直接影響羔羊的健康及其生長(zhǎng)發(fā)育[4]。為了減緩妊娠后期及泌乳期母羊的氧化損傷，預(yù)防疾病的發(fā)生，同時(shí)保證羔羊的健康發(fā)育，在飼糧中添加適量的抗氧化劑已成為現(xiàn)階段的研究熱點(diǎn)之一。

大豆異黃酮（Soybean Isoflavones，SIF）是大豆及其加工制品中存在的一類異黃酮類植物雌激素，大量研究證明其具備良好的抗氧化作用[5-7]。天然的SIF可分為糖苷型大豆異黃酮（約占大豆異黃酮總量的97%～98%）和苷元型大豆異黃酮（約占大豆異黃酮總量的2%～3%），而只有后者能直接被小腸吸收，效果更佳[8]。苷元型大豆異黃酮包括大豆黃酮（Daidzein）、染料木素（Genistein）和黃豆黃素（Glycitein）。有關(guān)SIF的抗氧化性能在單胃動(dòng)物上的研究居多，但有關(guān)苷元型大豆異黃酮在反芻動(dòng)物上尤其是干預(yù)母羊氧化應(yīng)激的報(bào)道較少。本試驗(yàn)以崇明白山羊?yàn)檠芯繉?duì)象，探討苷元型大豆異黃酮對(duì)母羊氧化應(yīng)激、乳中免疫球蛋白和羔羊生長(zhǎng)的影響，為苷元型大豆異黃酮在母羊上的應(yīng)用提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及日糧 本試驗(yàn)選用33只年齡、體重、胎次（2～4胎）相近的妊娠100 d的崇明白山羊，隨機(jī)分為3組，分別為C0組（11只）、T1組（9只）和T2組（13只）。試驗(yàn)于2016年12月—2017年3月在上海市崇明白山羊保種基地進(jìn)行，母羊飼喂全混合日糧（TMR）并制成顆粒。C0組母羊飼喂基礎(chǔ)日糧（表1），T1和T2組分別在基礎(chǔ)日糧中添加20 mg/kg和30 mg/kg苷元型大豆異黃酮。基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。

苷元型大豆異黃酮由大豆異黃酮粗制品與豆粕和糖蜜經(jīng)復(fù)合益生菌固體厭氧發(fā)酵獲得，按高效液相色譜法測(cè)得發(fā)酵物中苷元型大豆異黃酮總量為2 374.70 mg/kg。羔羊補(bǔ)料配方見(jiàn)表2。

1.2 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)從母羊妊娠100 d開(kāi)始，至羔羊60日齡斷奶結(jié)束。試驗(yàn)羊舍為半開(kāi)放式，半漏縫地板。各組的飼養(yǎng)環(huán)境保持一致，每日08:00和16:00各喂料1次，定量飼喂（2.7 kg），自由飲水。重胎羊及哺乳期母羊每日每只額外補(bǔ)充100 g精料。每日清理1次料槽和水槽，保持羊舍清潔。對(duì)出生后1～2 h內(nèi)的羔羊，輔助其吮食初乳；1～7日齡的羔羊，隨母自由吮乳，之后每日3次定時(shí)吮乳；15日齡開(kāi)始投補(bǔ)料，自由采食。

1.3 樣品采集與指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 繁殖性能測(cè)定 在母羊分娩及羔羊斷奶當(dāng)天，記錄母羊的窩產(chǎn)羔數(shù)、斷奶羔數(shù)以及母羊和羔羊的體重。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分

表2 羔羊補(bǔ)料組成及營(yíng)養(yǎng)成分

1.3.2 血清的采集與制備 分娩當(dāng)日及泌乳21 d從母羊前腔靜脈采集血樣（10 mL/只），4℃靜置30 min后，3 000 r/min離心15 min，取上清分裝于1.5 mL EP管中，-20℃保存待測(cè)。

1.3.3 乳樣的采集與制備 分娩當(dāng)日及泌乳21 d采集乳樣，4℃ 3 000 r/min離心20 min，取上清分裝于1.5 mL EP管中，用于測(cè)定免疫球蛋白A（IgA）含量。

1.3.4 測(cè)定指標(biāo)與方法 血清指標(biāo)包括過(guò)氧化氫（H2O2）、總抗氧化能力（T-AOC）和總超氧化物歧化酶（T-SOD）、丙二醛（MDA）。其中，H2O2濃度和T-AOC采用比色法測(cè)定，T-SOD活性采用羥胺法測(cè)定，MDA含量采用TBA法測(cè)定。以上試劑盒均購(gòu)自南京建成生物有限公司，具體步驟參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。乳清中IgA含量按上海源葉生物科技有限公司羊IgA ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)通過(guò)Excel 2013初步統(tǒng)計(jì)后，采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-Way ANOVA），并用LSD法進(jìn)行多重比較。試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤來(lái)表示，以P＜0.05作為顯著性差異判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 苷元型大豆異黃酮對(duì)母羊繁殖性能的影響 由表3可知，T1和T2組的窩產(chǎn)羔數(shù)顯著高于C0組（P＜0.05）。3組的斷奶羔數(shù)差異不顯著（P＞0.05），但T1和T2組羔羊的存活率較C0組顯著降低（P＜0.05）。母羊在分娩至斷奶期間，體重普遍下降。T1和T2組羔羊初生重、斷奶重與C0組無(wú)顯著差異（P＞0.05）。C0組的初生窩重、斷奶窩重、窩日增重顯著低于T1和T2組（P＜0.05）。

2.2 苷元型大豆異黃酮對(duì)母羊血清中氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響 由表4可知，在分娩當(dāng)日，T2組母羊血清中H2O2含量顯著低于C0和T1組（P＜0.05）。與T1和T2組相比，C0組血清中T-SOD活性最高（P＜0.05），T-AOC最低（P＜0.05），3組的MDA無(wú)顯著差異（P＞0.05）。在泌乳21 d，T2組母羊血清中H2O2含量顯著低于C0和T1組（P＜0.05）；與C0和T2組相比，T1組血清中T-SOD活性最高（P＜0.05）；3組的T-AOC和MDA無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

2.3 苷元型大豆異黃酮對(duì)母羊乳中IgA的影響 由表5可知，在初乳中，T1和T2組的IgA含量與C0組相比分別顯著提高了42.96%和73.41%（P＜0.05）。在常乳中，3組間的IgA水平差異不顯著（P＞0.05）。

表3 苷元型大豆異黃酮對(duì)母羊繁殖性能的影響

表4 苷元型大豆異黃酮對(duì)母羊血清中氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響

表5 苷元型大豆異黃酮對(duì)母羊乳中IgA的影響 μg/mL

3 討 論

3.1 苷元型大豆異黃酮對(duì)繁殖母羊氧化應(yīng)激的影響 苷元型大豆異黃酮結(jié)構(gòu)上含有多個(gè)酚羥基，具有較強(qiáng)的抗氧化作用，可以通過(guò)清除自由基、減少抗氧化酶的消耗、提高抗氧化酶的活性等來(lái)增強(qiáng)母體的抗氧化能力，減緩氧化損傷，預(yù)防妊娠疾病的發(fā)生[9]。超氧化物歧化酶（SOD）是一種抗氧化酶，能消除體內(nèi)多余的自由基，反映了機(jī)體清除自由基的能力；MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程中的產(chǎn)物之一，其含量間接反映了機(jī)體受到自由基攻擊的程度[10]。在本試驗(yàn)中，T2組母羊分娩當(dāng)日及泌乳21 d血清H2O2自由基含量顯著降低，MDA含量有下降的趨勢(shì)，表明T2組母羊清除自由基的能力較強(qiáng)，受到自由基攻擊的程度較輕，氧化損傷程度較低，因此苷元型大豆異黃酮在飼料中的添加量以30 mg/kg為佳。在分娩當(dāng)日，與T1和T2組相比，C0組血清中T-SOD活性最高，T-AOC最低；在泌乳21 d，與C0和T2組相比，T1組血清中T-SOD活性最高。劉春龍等[5]研究表明，一定濃度范圍內(nèi)的大豆黃酮和染料木素作用于體外培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞，可上調(diào)T-SOD活性并降低MDA含量；方洛云等[6]研究發(fā)現(xiàn)，在日糧中添加SIF能夠顯著提高奶牛血清的抗氧化酶活性，改善產(chǎn)奶性能；遲曉星等[11]發(fā)現(xiàn)，添加SIF能夠顯著提高雌性大鼠體內(nèi)的SOD活性，顯著降低MDA含量。以上試驗(yàn)結(jié)果均表明，一定量的苷元型大豆異黃酮對(duì)于減緩繁殖動(dòng)物的氧化損傷具有很好的效果，可有效降低氧化應(yīng)激水平。

3.2 苷元型大豆異黃酮對(duì)母羊乳中免疫球蛋白和羔羊生長(zhǎng)的影響 在妊娠后期及泌乳期母羊日糧中添加適量的抗氧化劑來(lái)改善母乳品質(zhì)，對(duì)羔羊的生長(zhǎng)發(fā)育有重要影響[12]。陳豐等[7]研究發(fā)現(xiàn)，在泌乳期母豬飼糧中添加15 mg/kg SIF能夠提高母豬的抗氧化性能和泌乳性能，提升哺乳仔豬的生長(zhǎng)性能。本試驗(yàn)中，添加苷元型大豆異黃酮能夠顯著提高母羊的窩產(chǎn)羔數(shù)、羔羊的初生窩重、斷奶窩重和窩日增重，而羔羊的存活率有所降低。這可能是因?yàn)槟秆蛉焉锲诘难趸瘧?yīng)激引起母體胎盤血管功能障礙，胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞分化異常，最終導(dǎo)致胎盤血流減少和胎兒的組織損傷，影響動(dòng)物的存活率及初生重[13]，窩產(chǎn)活仔數(shù)越多，母羊體內(nèi)的氧化應(yīng)激水平越高，出生羔羊個(gè)體越小，成活率也低。Suttner等[14]研究表明，大豆黃酮能夠提高母體的排卵率和產(chǎn)仔數(shù)；尹艷云等[15]研究發(fā)現(xiàn)，SIF能夠顯著提高雌鼠的窩產(chǎn)仔數(shù)。以上結(jié)果與本試驗(yàn)結(jié)果基本一致。免疫球蛋白是一種有抗體活性的動(dòng)物蛋白，能夠提升免疫力[16]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，苷元型大豆異黃酮能夠顯著提高母羊初乳中的IgA含量，這與朱志寧等[17]的試驗(yàn)結(jié)果一致。大量研究證實(shí)，SIF通過(guò)發(fā)揮類雌激素樣作用來(lái)影響機(jī)體內(nèi)分泌，提高動(dòng)物機(jī)體的特異性及非特異性免疫[18]。SIF與內(nèi)源性雌激素的競(jìng)爭(zhēng)平衡作用決定了雌激素效應(yīng)或抗雌激素效應(yīng)的發(fā)揮，即當(dāng)體內(nèi)雌激素水平較低時(shí)，SIF直接與雌激素受體結(jié)合發(fā)揮弱雌激素效應(yīng)，在妊娠期促進(jìn)胚胎著床，使產(chǎn)仔數(shù)增加，并在泌乳期促進(jìn)乳腺發(fā)育，反之，當(dāng)體內(nèi)雌激素水平過(guò)高時(shí)，SIF會(huì)與雌激素競(jìng)爭(zhēng)受體發(fā)揮抗雌激素效應(yīng)[19]。綜上，本試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明苷元型大豆異黃酮能夠提高母羊乳中免疫球蛋白含量，進(jìn)而促進(jìn)羔羊生長(zhǎng)。

4 結(jié) 論

在妊娠后期及泌乳期母羊飼糧中添加一定量的苷元型大豆異黃酮可有效減緩母羊的氧化損傷，提高初乳中免疫球蛋白含量，促進(jìn)羔羊生長(zhǎng)發(fā)育，且添加量以30 mg/kg效果更顯著。

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