倪冬冬，徐祥波，賀斌，王藹明

(1.第二軍醫(yī)大學(xué)，上海 200433；2.海軍總醫(yī)院，北京 100048；3. 國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委科學(xué)技術(shù)研究所，北京 100081)

宮腔粘連(intrauterine adhesion，IUA)是指任何創(chuàng)傷引起的子宮內(nèi)膜基底層的損傷導(dǎo)致子宮內(nèi)膜纖維化從而形成子宮腔前后壁粘連。宮腔粘連的發(fā)生有多種，但最常見(jiàn)的原因是由機(jī)械性刮宮引起的子宮內(nèi)膜基底層損傷，比如人工流產(chǎn)等宮腔內(nèi)手術(shù)操作等。其臨床表現(xiàn)為月經(jīng)異常、繼發(fā)性不孕等[1]。隨著臨床宮腔操作的增多以及宮腔鏡技術(shù)的應(yīng)用，IUA的發(fā)病率和診斷率顯著上升[2-3]。目前研究已發(fā)現(xiàn)多種與宮腔粘連發(fā)生相關(guān)的因素，但宮腔粘連的發(fā)病機(jī)制尚不清楚[4]，對(duì)較重的子宮內(nèi)膜纖維化也無(wú)有效的治療方法。宮腔粘連的本質(zhì)是子宮內(nèi)膜基底層損傷后導(dǎo)致的子宮內(nèi)膜纖維化[5]。成九梅等[6]通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)IUA患者的子宮內(nèi)膜中有大量細(xì)胞外基質(zhì)沉積，子宮內(nèi)膜逐漸被纖維結(jié)締組織取代，最終形成IUA。賴(lài)氨酰氧化酶(1ysyl oxidase，LOX)是由細(xì)胞分泌的、作用于細(xì)胞外基質(zhì)膠原和彈性蛋白的賴(lài)氨酸殘基從而產(chǎn)生分子交聯(lián)的一種胺氧化酶，參與膠原纖維與彈性纖維共價(jià)交聯(lián)的形成過(guò)程[7-8]。共價(jià)交聯(lián)的形成對(duì)膠原纖維的穩(wěn)定至關(guān)重要[9-10]，它在肝臟、肺臟等多個(gè)器官纖維化的過(guò)程中發(fā)揮重要作用[11]。β-氨基丙腈作為賴(lài)氨酰氧化酶抑制劑能夠逆轉(zhuǎn)肝臟的纖維化[12]。因此探索β-氨基丙腈是否對(duì)大鼠子宮內(nèi)膜纖維化有逆轉(zhuǎn)作用以及最佳的使用劑量，將為宮腔粘連的發(fā)生機(jī)制及治療方法的研究提供重要實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

材料與方法

一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及試劑

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：8周齡雌性Wistar大鼠(北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司)，體重180～230 g，大鼠飼養(yǎng)于國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委科學(xué)技術(shù)研究所SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，環(huán)境溫度20～22℃，光照/黑暗周期為12/12 h，自由進(jìn)食正常飼料。所有大鼠實(shí)驗(yàn)操作均遵守國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委科學(xué)技術(shù)研究所倫理委員會(huì)的相關(guān)規(guī)定。

2.主要試劑：β-氨基丙腈(beta-aminopropionitrile，BAPN)(Sigma，美國(guó))；Masson染色試劑(北京索萊寶)；羥脯胺酸試劑盒(南京建成生物)。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組：54只雌性Wistar大鼠用隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組(6只)，不給予任何處理；對(duì)照組(12只)，建立大鼠子宮機(jī)械損傷致宮腔纖維化粘連模型；實(shí)驗(yàn)組(36只)，建立大鼠子宮機(jī)械損傷致宮腔粘連模型，并立即腹腔注射β-氨基丙腈。

2.β-氨基丙腈劑量組：曾有研究采用100 mg/kg/d劑量β-氨基丙腈作為賴(lài)氨酰氧化酶抑制劑來(lái)研究賴(lài)氨酰氧化酶在大鼠的不同作用[13-14]。因此，我們以100 mg/kg/d劑量為實(shí)驗(yàn)用最低劑量，按照每天注射β-氨基丙腈劑量不同分為3個(gè)劑量組：100 mg/kg、200 mg/kg、300 mg/kg，每組12只。

3.大鼠子宮機(jī)械損傷致宮腔纖維化粘連模型的建立及標(biāo)本收集：將大鼠用2%戊巴比妥鈉(2 ml/kg)麻醉后，在超凈工作臺(tái)上實(shí)施刮宮手術(shù)，在雙側(cè)背部備皮消毒后切開(kāi)，取出子宮，在子宮角近卵巢約5 mm處剪開(kāi)一小口，用12-18號(hào)不銹鋼針頭自制刮勺，探入宮腔反復(fù)搔刮子宮，至刮出子宮內(nèi)膜碎屑宮腔面粗糙，縫合子宮，逐層縫合關(guān)閉大鼠背部切口。對(duì)照組自然愈合，實(shí)驗(yàn)組搔刮后立即腹腔每日一次注射 100 mg/kg、200 mg/kg、300 mg/kg的β-氨基丙腈。對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組分別于搔刮后72 h、7 d用0.2%苯巴比妥麻醉后每組各取6只大鼠雙側(cè)子宮，觀察記錄子宮大體形態(tài)后，部分損傷子宮4%多聚甲醛固定，部分損傷子宮液氮冷凍后放入-80℃冰箱保存，取材后大鼠斷頸處死。

4.蘇木精-伊紅(HE)染色：選取正常組、對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組損傷子宮中段組織，常規(guī)石蠟包埋，5 μm連續(xù)切片，切片常規(guī)脫蠟、水化，蘇木素染液中浸染5 min后用清水洗去多余染液，用1%鹽酸酒精將組織切片分化30 s，流水沖洗返藍(lán)，放入伊紅染液中浸染20～30 s，清水洗去多余伊紅染液，將組織切片常規(guī)梯度脫水、透明，最后用中性樹(shù)膠封片。

5.Masson染色：將組織切片常規(guī)脫蠟至水，用配制好的Weigert鐵蘇木素染色液染色5～10 min，用酸性乙醇分化液分化5～15 s，水洗后Masson藍(lán)化液返藍(lán)3～5 min，蒸餾水洗1 min；麗春紅品紅染色液染色5～10 min，用弱酸工作液洗1 min，磷鉬酸溶液洗1～2 min后再用弱酸工作液洗1 min；放入苯胺藍(lán)染色液中染色1～2 min后弱酸工作液洗1 min，95%乙醇快速脫水，無(wú)水乙醇脫水3次，每次5～10 s，最后用二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。

6.大鼠子宮膠原含量檢測(cè)：羥脯氨酸是膠原蛋白中特有的氨基酸，通過(guò)羥脯氨酸的測(cè)定，可以反映膠原蛋白的含量。取大鼠子宮凍存組織100 mg，等分兩份。一份組織剪碎后放入試管中，加入5 mg/ml的胃蛋白酶和0.5 mol/L的三氯乙酸4℃過(guò)夜消化后以2 000 rpm、4℃低溫離心，上清含有可溶性膠原，離心后的沉淀含有不可溶性膠原[13]。用羥脯胺酸測(cè)試盒按說(shuō)明書(shū)操作檢測(cè)上清液中羥脯胺酸含量。簡(jiǎn)要操作步驟：將離心后的上清液中加水解液1 ml，混勻，加蓋后放入95 ℃或沸水中20 min，調(diào)pH值至6.0～6.8，取3～4 ml稀釋的水解液加適量活性炭(約20～30 mg，以上清液離心后澄清無(wú)色為準(zhǔn))，3 500 rpm離心10 min，然后取上清1 ml在550 nm處檢測(cè)吸光度，用測(cè)得的OD值按公式計(jì)算出羥脯胺酸含量從而得到可溶性膠原含量。然后將另一份等量大鼠子宮組織，剪碎后直接加入水解液1 ml，之后按上述相同方法測(cè)得上清液中的羥脯胺酸含量來(lái)計(jì)算出總膠原的含量，最后用總膠原量減去可溶性膠原量即得到不可溶性膠原量。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、大鼠一般情況

在子宮搔刮后及愈合過(guò)程中，對(duì)照組大鼠一般情況良好；實(shí)驗(yàn)組大鼠中給予β-氨基丙腈100 mg/kg、200 mg/kg劑量組大鼠一般情況及精神狀態(tài)均良好，給予300 mg/kg劑量組大鼠一般狀況差，大鼠消瘦、精神狀態(tài)萎靡，運(yùn)動(dòng)遲緩；實(shí)驗(yàn)過(guò)程中β-氨基丙腈300 mg/kg劑量組有1只死于第5天，2只死于第7天。

二、大鼠子宮大體形態(tài)學(xué)結(jié)果

子宮大體形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果顯示：與大鼠正常組未損傷子宮(圖1A)相比，對(duì)照組子宮搔刮損傷后72 h呈現(xiàn)輕微攣縮且子宮表面凸凹不平結(jié)節(jié)樣(圖1B)，至7 d時(shí)子宮僵硬攣縮明顯且子宮表面蒼白(圖1C)。

與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組各劑量組在子宮搔刮損傷后72 h時(shí)大體外觀基本正常，無(wú)明顯萎縮、淤血，有輕度水腫(圖1D、E、F)；至7 d時(shí)，實(shí)驗(yàn)組各劑量組大鼠子宮與正常大鼠子宮(圖1A)未見(jiàn)明顯差異，色澤紅潤(rùn)，組織彈性好(圖1G、H、I)。

三、大鼠子宮組織形態(tài)學(xué)結(jié)果

HE染色結(jié)果顯示，與正常組未損傷子宮(圖2A)相比，對(duì)照組大鼠子宮搔刮損傷后72 h可見(jiàn)損傷的子宮腔被上皮細(xì)胞完全覆蓋，但子宮內(nèi)膜很薄(圖2B)；至搔刮損傷后7 d，對(duì)照組大鼠子宮腔萎縮最嚴(yán)重，內(nèi)膜薄，腺體少，宮腔狹小，內(nèi)膜基質(zhì)纖維組織增生(圖2C)。

搔刮損傷后72 h，實(shí)驗(yàn)組BAPN 100 mg/kg劑量組大鼠子宮腔被上皮細(xì)胞完全覆蓋，子宮內(nèi)膜較厚，內(nèi)膜基質(zhì)纖維組織增生較對(duì)照組少，腺體數(shù)量較對(duì)照組多(圖2D)；BAPN 200 mg/kg劑量組大鼠子宮腔被上皮細(xì)胞完全覆蓋，子宮內(nèi)膜較其他實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組大鼠子宮內(nèi)膜厚，內(nèi)膜基質(zhì)纖維組織增生少，腺體數(shù)量較100 mg/kg劑量組多(圖2E)；300 mg/kg劑量組大鼠子宮內(nèi)膜薄，腺體數(shù)量較200 mg/kg劑量組少(圖2F)。

至搔刮損傷后7 d時(shí)，實(shí)驗(yàn)組100 mg/kg劑量組大鼠子宮腔大部分被上皮細(xì)胞覆蓋，子宮內(nèi)膜較薄，腺體數(shù)量較200 mg/kg劑量組少(圖2G)；200 mg/kg劑量組大鼠子宮內(nèi)膜較其他實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組大鼠子宮內(nèi)膜厚，腺體數(shù)量較多(圖2H)；300 mg/kg劑量組大鼠子宮內(nèi)膜薄，腺體數(shù)量減少，腺腔狹小(圖2I)。

A：正常大鼠子宮；B：搔刮損傷后72 h對(duì)照組大鼠子宮；C：搔刮損傷后7 d對(duì)照組大鼠子宮；D、E、F：分別是100 mg/kg、200 mg/kg、300 mg/kg劑量組連續(xù)給藥72 h的實(shí)驗(yàn)組大鼠子宮；G、H、I：分別是100 mg/kg、200 mg/kg、300 mg/kg劑量組連續(xù)給藥7 d的實(shí)驗(yàn)組大鼠子宮圖1 各組大鼠子宮的大體形態(tài)結(jié)果

四、Masson染色結(jié)果

與正常組未損傷子宮(圖3A)相比，對(duì)照組搔刮損傷后72 h(圖3B)及7 d時(shí)(圖3C)子宮內(nèi)膜組織中藍(lán)染膠原纖維逐漸增多，提示在子宮損傷后愈合過(guò)程中伴有明顯的纖維化。與對(duì)照組相比，在子宮搔刮損傷后72 h，實(shí)驗(yàn)組各劑量組(圖3D、E、F)子宮內(nèi)膜組織中藍(lán)染膠原纖維含量減少，以200 mg/kg及300 mg/kg劑量組較為明顯；至7 d時(shí)，實(shí)驗(yàn)組各劑量組(圖3G、H、I)子宮內(nèi)膜組織中藍(lán)染膠原纖維含量比對(duì)照組(圖3C)明顯減少。

五、羥脯胺酸試劑盒檢測(cè)膠原含量結(jié)果

羥脯氨酸檢測(cè)結(jié)果顯示，在子宮搔刮損傷后72 h，對(duì)照組不可溶膠原纖維含量[(5.61±0.31) μg/mg]顯著高于實(shí)驗(yàn)組三個(gè)劑量組(P<0.01)，而實(shí)驗(yàn)組中200 mg/kg劑量組不可溶膠原纖維含量低于100 mg/kg劑量組[(1.88±0.33) μg/mg vs.(3.59±0.27)μg/mg，P<0.05)]，但與300 mg/kg劑量組[(1.91±0.21)μg/mg]無(wú)顯著差異(P>0.05)(表1)。

搔刮損傷后第7天，對(duì)照組大鼠子宮不可溶膠原纖維含量[(6.18±0.23)μg/mg]顯著高于正常組(P<0.01)；實(shí)驗(yàn)組三個(gè)劑量組盡管也高于正常組(P<0.05)，但顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，其中實(shí)驗(yàn)組200 mg/kg劑量組不可溶膠原纖維含量顯著低于100 mg/kg組[(1.90±0.31)μg/mg vs.(3.98±0.22)μg/mg，P<0.05)]，但與300 mg/kg劑量組無(wú)顯著差異(P>0.05)(表1)。

對(duì)照組和300 mg/kg劑量組的可溶性膠原含量在損傷后72 h和7 d時(shí)顯著高于正常組(P<0.05)，而對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組間、實(shí)驗(yàn)組各劑量組間的可溶性膠原含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(表1)。

A：正常大鼠子宮；B：搔刮損傷后72 h對(duì)照組大鼠子宮；C：搔刮損傷后7 d對(duì)照組大鼠子宮；D、E、F：分別是搔刮損傷后72 h實(shí)驗(yàn)組100 mg/kg、200 mg/kg、300 mg/kg劑量組的大鼠子宮；G、H、I：分別是搔刮損傷后7 d實(shí)驗(yàn)組100 mg/kg、200 mg/kg、300 mg/kg劑量組的大鼠子宮圖2 各組大鼠子宮橫切面組織學(xué)結(jié)果(HE染色，×100)

組別72h7d可溶性膠原不可溶性膠原可溶性膠原不可溶性膠原正常組0.90±0.121.11±0.401.10±0.091.23±0.27對(duì)照組1.40±0.19a5.61±0.31a1.81±0.17a6.18±0.23a實(shí)驗(yàn)組 100mg/kg1.18±0.143.59±0.27abc1.41±0.183.98±0.22abc 200mg/kg1.22±0.091.88±0.33ab1.32±0.111.91±0.31ab 300mg/kg1.64±0.11a1.91±0.21ab1.73±0.15a2.21±0.37ab

注：與正常組比較，aP<0.05；與對(duì)照組比較，bP<0.05；與實(shí)驗(yàn)組中其他劑量組比較，cP<0.05

A：正常大鼠子宮；B：搔刮損傷后72 h對(duì)照組大鼠子宮；C：搔刮損傷后7 d對(duì)照組大鼠子宮；D、E、F：分別是搔刮損傷后72 h實(shí)驗(yàn)組100 mg/kg、200 mg/kg、300 mg/kg劑量組的大鼠子宮；G、H、I：分別是搔刮損傷后7 d實(shí)驗(yàn)組100 mg/kg、200 mg/kg、300 mg/kg劑量組的大鼠子宮圖3 各組大鼠子宮橫切面Masson染色結(jié)果(×200)

討 論

IUA是由于各種原因?qū)е碌淖訉m內(nèi)膜基底層損傷。IUA主要發(fā)生于妊娠期的宮腔操作后及其他疾病行宮腔手術(shù)治療之后[14]。宮腔粘連可導(dǎo)致不孕、月經(jīng)量減少、閉經(jīng)、腹痛等癥狀[15]。目前宮腔粘連的發(fā)病機(jī)制不清楚，重度宮腔粘連的治療效果差。因此，探索 IUA 的發(fā)病機(jī)制，尋求有效治療靶點(diǎn)來(lái)阻斷子宮內(nèi)膜纖維化的發(fā)生、預(yù)防宮腔粘連的形成顯得尤為重要。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)大鼠子宮機(jī)械性搔刮損傷建立大鼠子宮搔刮損傷后纖維化修復(fù)模型，在此基礎(chǔ)上探討β-氨基丙腈在抑制大鼠子宮內(nèi)膜損傷后纖維化中的作用及最佳使用劑量。賴(lài)氨酰氧化酶(lysyl oxidase，LOX)是一種細(xì)胞外依賴(lài)銅的氨基酸氧化酶，參與細(xì)胞外基質(zhì)中膠原和彈性蛋白賴(lài)氨酸殘基交聯(lián)，在膠原和彈性蛋白由可溶性單體轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄岳w維過(guò)程的初始階段發(fā)揮重要作用，對(duì)維持細(xì)胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能正常、組織器官發(fā)育、創(chuàng)傷修復(fù)、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)等都具有重要意義[16]。β-氨基丙腈通過(guò)與賴(lài)氨酰氧化酶家族的活性位點(diǎn)形成共價(jià)加合物來(lái)抑制賴(lài)氨酰氧化酶家族的活性從而導(dǎo)致其無(wú)法催化膠原交聯(lián)的形成，是特異性的、不可逆的LOX抑制劑[17-18]。研究表明賴(lài)氨酰氧化酶家族在多個(gè)器官纖維化過(guò)程中發(fā)揮重要作用[12，19-21]。

本文以BAPN抑制賴(lài)氨酰氧化酶，探索β-氨基丙腈在抑制子宮內(nèi)膜纖維化中的作用以及最佳使用劑量。因此，我們以100 mg/kg/d劑量為實(shí)驗(yàn)用最低劑量，并同時(shí)研究其二倍及三倍劑量在抑制子宮內(nèi)膜纖維化中的作用效果，尋找最佳抑制大鼠子宮內(nèi)膜纖維化的β-氨基丙腈用量。我們的研究結(jié)果表明大鼠子宮內(nèi)膜損傷后使用不同劑量的賴(lài)氨酰氧化酶抑制劑β-氨基丙腈后，在各觀察時(shí)間點(diǎn)，大鼠子宮大體形態(tài)學(xué)都有改善，好于對(duì)照組，組織學(xué)觀察也發(fā)現(xiàn)用藥后子宮內(nèi)膜恢復(fù)更好，腺體數(shù)量較對(duì)照組增加。Masson染色結(jié)果也表明用藥組的膠原含量較對(duì)照組低，而且以200 mg/kg劑量給藥效果最佳。同時(shí)，組織器官內(nèi)的膠原主要包括可溶性與不可溶性膠原，其中不可溶性膠原在組織器官的纖維化形成中發(fā)揮重要作用，不可溶性膠原的過(guò)多沉積可引起組織器官纖維化形成。羥脯胺酸為膠原所特有，約占膠原蛋白的13.4%，測(cè)定羥脯胺酸的含量可以反映出膠原蛋白的含量。因此，我們定量檢測(cè)了正常組，實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組大鼠子宮的不可溶性膠原的含量，結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組的不可溶性膠原含量低于對(duì)照組，且以200 mg/kg β-氨基丙腈腹腔注射對(duì)大鼠子內(nèi)膜不可溶性膠原纖維的抑制作用最佳，而300 mg/kg劑量組的不可溶性膠原與200 mg/kg劑量組無(wú)差異，但300 mg/kg劑量組盡管有改善子宮纖維化的作用，但給藥后大鼠子宮內(nèi)膜較薄，腺體數(shù)量較少而且此劑量導(dǎo)致大鼠死亡率明顯上升，而且對(duì)膠原纖維的抑制作用并不優(yōu)于200 mg/kg劑量組。以上結(jié)果說(shuō)明β-氨基丙腈能夠較好抑制大鼠子宮內(nèi)膜機(jī)械性損傷后導(dǎo)致的膠原沉積，減輕纖維化。

我們推測(cè)β-氨基丙腈用量過(guò)大可能會(huì)影響大鼠機(jī)體正常功能從而導(dǎo)致組織修復(fù)能力下降，治療效果差。因此我們認(rèn)為β-氨基丙腈可以有效抑制Wistar大鼠子宮內(nèi)膜纖維化，200 mg/kg給藥量對(duì)機(jī)械刮宮后大鼠子宮內(nèi)膜纖維化的抑制效果最佳。同時(shí)我們的研究結(jié)果也表明LOX家族可能參與了機(jī)械損傷后大鼠子宮內(nèi)膜的纖維化過(guò)程。這些發(fā)現(xiàn)為進(jìn)一步研究賴(lài)氨酰氧化酶家族與宮腔粘連的相關(guān)性以及賴(lài)氨酰氧化酶家族在機(jī)械損傷后大鼠子宮內(nèi)膜纖維化過(guò)程中的作用機(jī)制，為宮腔粘連的治療和發(fā)生機(jī)制的研究奠定了基礎(chǔ)，提供了新的研究思路和方向。

【參考文獻(xiàn)】

[1] Conforti A，Alviggi C，Mollo A，et al. The management of Asherman syndrome：a review of literature[J]. Reprod Biol Endocrinol，2013，11：118.

[2] March CM. Management of Asherman’s syndrome[J/OL]. Reprod Biomed Online，2011，23：63-76.

[3] 曹興鳳，王藹明，趙勇，等. 宮腔操作對(duì)育齡女性的影響[J]. 生殖醫(yī)學(xué)雜志，2014，23：435-441.

[4] 劉彩姣，王藹明，趙勇. 細(xì)胞因子在宮腔粘連發(fā)病機(jī)制中的作用[J]. 生殖醫(yī)學(xué)雜志，2017，25：575-579.

[5] Yu D，Wong YM，Ying C，et al. Asherman’s syndrome-one century later[J]. Fertil Steril，2008，89：759-779.

[6] 成九梅，段華，夏恩蘭.宮腔粘連患者子宮內(nèi)膜基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)表達(dá)的研究[J].中國(guó)婦幼保健，2007，22：2574-2576.

[7] Kagan HM，Li W. Lysyl oxidase： properties，specificity and biological roles inside and outside of the cell[J]. J Cell Biochem，2003，88：660-672.

[8] Csiszar K. Lysyl oxidases： a novel multifunctional amine oxidase family[J]. Prog Nucleic Acid Res Mol Biol，2001，70：1-32.

[9] Fogelgren B，Polgár N，Szauter K M，et al. Cellular fibronectin binds to lysyl oxidase with high affinity and is critical for its proteolytic activation[J]. J Biol Chem，2005，280：24690-24697.

[10] Kumari S，Panda TK，Pradhan T. Lysyl oxidase： its diversity in health and diseases[J]. Indian J Clin Biochem，2017，32：134-141.

[11] Kagan HM. Lysyl oxidase： mechanism，regulation and relationship to liver fibrosis[J]. Pathol Res Pmct，1994，190：910-919.

[12] Barryhamilton V，Spangler R，Marshall D，et al. Allosteric inhibition of lysyl oxidase-like-2 impedes the development of a pathologic microenvironment[J]. Nature Medicine，2010，16：1009-1017.

[13] Miana M，Galán M，Martínez-Martínez E，et al. The lysyl oxidase inhibitor β-aminopropionitrile reduces body weight gain and improves the metabolic profile in diet-induced obesity in rats[J]. Dis Model Mech，2015，8：543-551.

[14] Martínez-Martínez E，Rodríguez C，Galán M，et al. The lysyl oxidase inhibitor(β-aminopropionitrile) reduces leptin probrotic effects and ameliorates cardiovascular remodeling in diet-induced obesity in rats[J]. J Mole Cell Cardiol，2016，92：96-104.

[15] Xia XD，Lee J，Khan S，et al. Suppression of phosphatidylinositol 3-kinase/akt signaling attenuates hypoxia-induced pulmonary hypertension through the downregulation of lysyl oxidase[J]. DNA Cell Biol，2016，35：599-606.

[16] Dalton VK，Saunders NA，Harris IH，et a1.Intrauterine adhesions after manual vacuum aspiration for early pregnancy failure[J]. Fertil Steril，2006，85：1823.e1-3.

[17] Schenker JG，Margalioth EJ. Intrauterine adhesions： an updated appraisal[J].Fertil Steril，1982，37：593-610.

[18] Payne SL，Hendrix MJ，Kirschmann DA. Paradoxical roles for lysyl oxidases in cancer--a prospect[J]. J Cell Biochem，2007，101：1338-1354.

[19] Tang SS，Trackman PC，Kagan HM. Reaction of aortic lysyl oxidase with beta-aminopropionitrile[J]. J Biol Chem，1983，258：4331-4338.

[20] Ho YY，Lagares D，Tager AM，et al. Fibrosis--a lethal component of systemic sclerosis[J]. Nat Rev Rheumatol，2014，10：390-402.

[21] Van Bergen T，Marshall D，Van de Veire S，et al. The role of LOX and LOXL2 in scar formation after glaucoma surgery[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci，2013，54：5788-5796.