趙紅瓊，張 丹，孟坤杰

（新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052）

苦豆子（Sophora alopecuroides L.）屬于豆科多年生草本植物，主要生長于荒漠和半荒漠區(qū)域的沙質(zhì)土壤中，耐鹽堿、耐干旱，其植株群落喜連片生長?？喽棺又饕锘钚猿煞譃樯飰A，如苦參堿、槐果堿等，其提取液或生物活性成分具有影響中樞興奮性、降血壓、抗菌以及平喘、鎮(zhèn)咳和祛痰等作用［1］。 張丹等［2-3］研究證明，苦豆子植株的豆子、豆莢、豆葉和頂須醇提液具有不同程度抑制小鼠離體小腸運(yùn)動的作用，而這些部位中有機(jī)物、干物質(zhì)、粗蛋白、粗脂肪、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、鈣和磷等主要營養(yǎng)成分的含量存在差異［4］。該試驗旨在探究苦豆子植株的豆子、豆莢、豆葉和頂須對家兔離體血液的抗凝效果，以期為開發(fā)苦豆子在抗凝血方面的藥用價值提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物：家兔，雄性，4 只，（2.1±0.6）kg，購買于新疆醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心。1 d飼喂2次（10：00 和 19：00 左右）家兔顆粒飼料（購買于新疆醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心），水自由飲用。

1.1.2 試驗藥材：苦豆子植株的豆莢枝、嫩葉枝和頂端干死的頂須于秋天采集于新疆維吾爾自治區(qū)烏蘇市四棵樹鎮(zhèn)棉田周邊田埂。豆莢枝陰干后剝出豆子，同時留下莢殼；嫩葉枝用自來水沖洗3遍后晾干，剪下干葉留用；干死的頂須完全陰干后留用。

1.2 方法

1.2.1 苦豆子植株各部位醇提液原液的制備：將苦豆子植株陰干的豆子、莢殼、干葉和頂須分別用800 mL搖擺式中藥粉碎機(jī)粉碎，然后用70%乙醇室溫超聲提取3次，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀抽真空后濃縮至1 g生藥1 mL藥液，即1∶1生藥醇提液的豆子、豆莢、豆葉和頂須的原液，高壓滅菌后4℃保存?zhèn)溆茫?］。

1.2.2 苦豆子植株各部位對離體血液抗凝效果檢測：該試驗采用平板血凝法測定凝血時間。首先，在6孔白瓷凝集板的孔中分別加入10 μL 0.9%氯化鈉（抗凝陰性對照）、3.8%檸檬酸鈉（抗凝陽性對照），以及豆子、豆葉、豆莢和頂須原液。然后，用一次性注射器采集家兔心臟血液2 mL（從血液進(jìn)入注射器開始秒表計時），迅速將90 μL血液加入凝集板含藥液各孔，輕輕混勻后用干凈的竹牙簽（每孔用一根牙簽）不停挑起血液，觀察是否有凝血絲（纖維蛋白）出現(xiàn)，當(dāng)?shù)谝淮斡^察到有凝血絲出現(xiàn)的時候讀取秒表時間，計為凝血時間。在血液離體后15 min、30 min和60 min時間點持續(xù)觀察是否有凝血絲出現(xiàn)，如果依然無血絲出現(xiàn)，即為未凝固。該檢測在20℃室溫進(jìn)行，用4只家兔進(jìn)行重復(fù)。

1.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計：凝血時間結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（n=4）表示。不同藥液處理之間凝血時間差異顯著性分析用SPSS 15.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果和分析

凝集板各孔加苦豆子植株各部位醇提液原液后離體家兔血液凝血時間見表1。由表1可知，添加3.8%檸檬酸鈉（抗凝陽性對照）孔血液在觀察時間內(nèi)未出現(xiàn)血液凝固現(xiàn)象，而0.9%氯化鈉（抗凝陰性對照）孔血液凝固時間為（282±11）s。 添加豆子孔血液在觀察時間內(nèi)也未出現(xiàn)血液凝固現(xiàn)象，而添加豆葉、豆莢和頂須孔凝血時間均極顯著慢于0.9%氯化鈉孔（P＜0.01），苦豆子植株這3個部位凝血時間由快到慢順序為：頂須＞豆莢＞豆葉。

表1 苦豆子植株各部位醇提液對家兔離體血液凝血時間的影響

3 討論

該試驗結(jié)果表明，苦豆子植株的豆葉、豆莢和頂須醇提液均具有延緩家兔離體血液凝固時間的作用，且其豆子具有抗凝血作用。目前尚未見對苦豆子植株抗凝血效果的有關(guān)報道。機(jī)體血液凝固包括凝血酶原激活物的形成、凝血酶原變?yōu)槟负屠w維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白3個基本過程，其中，VK和鈣離子在血液凝固的過程中發(fā)揮重要作用［5］。一般來說，藥物抗凝機(jī)理一般包括沉淀或螯合血液凝固多步驟需要的鈣離子，例如檸檬酸鈉、草酸鉀和乙二胺四乙酸二鈉等；或者是頡頏VK的作用，如雙香豆素。苦豆子植株成分研究目前主要集中在其生物堿種類和含量研究［6］，或者其營養(yǎng)成分（包括礦物質(zhì)含量）的研究［4，6］。 該試驗中，苦豆子植株各部分具有延緩血液凝固或抗凝血作用，必定是其中某些有效成分參與阻斷血液凝固的這3個基本過程。據(jù)《新疆維吾爾藥志》記載，苦豆子莖葉含草酸鹽棱晶［1］。同時，香豆素類似物也普遍在豆科植物中含有。因此推測，苦豆子植株各部分具有的延緩血液凝固或抗凝作用可能同含有這類抗凝物質(zhì)有關(guān)，且將來有必要開展苦豆子植株中與影響血液凝固有關(guān)成分的研究。

該試驗結(jié)果表明，相對苦豆子植株的豆葉、豆莢和頂須，其豆子具有更加強(qiáng)的抗凝血作用。陳曉麗等［6］采用等離子體原子發(fā)射光譜法研究了不同生育期（營養(yǎng)期、現(xiàn)蕾期、盛花期、盛莢期和成熟期）苦豆子根、莖、葉和種子中常量、微量礦質(zhì)元素含量變化，發(fā)現(xiàn)這些元素含量因生育時期不同在植株不同部位存在明顯差異?？喽棺又仓瓴课徊煌淇鼓πТ嬖诓町?，提示其植株不同部位抗凝血活性成分含量也存在差異。同樣，冷曉紅等［7］采用HPLC法對5—7月中不同物候期苦豆子植株地上部分主要生物堿的量進(jìn)行監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)苦豆子中不同生物堿的量隨物候期呈現(xiàn)不同規(guī)律的變化。張福寶等［8］用指紋圖譜法檢測發(fā)現(xiàn)苦豆子葉和莖不同采摘期化學(xué)成分存在差異。該試驗使用的苦豆子植株采集于秋季，屬于苦豆子的成熟期，那么不同生育期，苦豆子植株同一部位的抗凝血效果是否存在差異還有待于進(jìn)一步探究。同時，針對苦豆子的體內(nèi)抗凝作用及其抗凝機(jī)理也有待于進(jìn)一步深入開展。

4 小結(jié)

該試驗結(jié)果顯示，苦豆子植株的豆葉、豆莢和頂須醇提液均具有延緩離體血液凝固的作用，且其豆子具有完全抗凝血作用，提示苦豆子植株的有效活性成分有望用于防止血栓形成或制備抗凝劑原料。

參考文獻(xiàn)：

［1］劉勇明，沙吾提·伊克木.維吾爾藥志［M］.烏魯木齊：新疆人民出版社，1985：237-240.

［2］張丹，石剛，周玉東，等.苦豆子植株不同部位醇提液對大鼠離體小腸運(yùn)動的影響 ［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2016，43（1）：164-170.

［3］張丹.苦豆子對鼠小腸和子宮運(yùn)動影響的研究［D］.烏魯木齊：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)，2016.

［4］趙紅瓊，張丹，李鳳鳴，等.秋季苦豆子植株不同部位主要營養(yǎng)成分分析［J］.新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，53（10）：1894-1899.

［5］朱大年，王庭槐.生理學(xué)［M］.8版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013.

［6］陳曉麗，吳艷，鄭雷，等.苦豆子不同生育時期礦質(zhì)元素分析［J］.光譜學(xué)與光譜分析，2012，32（10）：2831-2833.

［7］冷曉紅，馬玲，王俊卿，等.不同物候期苦豆草中主要生物堿量的動態(tài)變化研究［J］.中草藥，2011，42（10）：2110-2113.

［8］張福寶，王漢卿.用指紋圖譜檢測寧夏苦豆子各器官不同物候期的成分 ［J］. 寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2014，36（8）：705-706.