郭曉純 陳衍欽 高婷婷

(1.廣東省中醫(yī)院 藥學(xué)部，廣東 廣州 510120；2.南方醫(yī)科大學(xué)，廣東 廣州 510515)

糖尿病是一種代謝性疾病，是引起眾多病發(fā)病的主要元兇，包括慢性腎病、糖尿病腎病、心血管疾病、以及視網(wǎng)膜病變等[1]。WHO預(yù)測，到2030將達(dá)到4.39億人患糖尿病，嚴(yán)重威脅到人類的健康，因此，研究糖尿病的治療藥物具有重大意義。疏肝健脾顆粒主要有黃芪黨參、丹參等組成，具有補(bǔ)氣健脾、滋養(yǎng)津血、疏肝理氣、活血通絡(luò)之效，研究表明其有治療高脂血癥的作用[2]。因此，本課題將對于疏肝健脾顆粒對于糖尿病小鼠糖脂代謝的影響進(jìn)行研究。

1 材料與儀器

1.1 材料

SPF級C57BL/6J小鼠，雄性，體重18～22g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK(粵)2015-0001。

健脾疏肝顆粒(由黃芪、炒蒼術(shù)各30g，丹參20g，黨參、麥芽、太子參、川芎各15g，當(dāng)歸12g等組成)，運(yùn)用現(xiàn)代工藝加工成顆粒劑。鏈脲佐菌素(STZ)(購于美國Sigma公司，批號：040M1367)，臨用時以pH4.5的0.1mol/L枸櫞酸緩沖液溶解。鹽酸二甲雙胍(默克雪蘭諾，批號：AAH5770)。高脂飼料配方組成：基礎(chǔ)飼料52%，酪蛋白12%，蔗糖10%，豬油24%，磷酸氫鈣2%，復(fù)合多維0.1%，礦物質(zhì)0.4%，鹽0.2%，共100.7%。由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心加工提供。

1.2 儀器

BS224S萬分之一電子天平(德國SARTORTUS)；UV-2501PC型紫外分光光度計(日本SHIMADZU)；Bio-RAD 550全波長酶標(biāo)儀(美國伯樂公司)；JTS-3WQ電子秤(深圳鈺恒電子有限公司)。血糖儀(安妥超越，RV1104，Abbott)；全自動生化分析儀(日立，型號：7180)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 造模及動物分組

小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，隨機(jī)分為正常組(10只)和造模組(40只)，造模組給予高脂喂養(yǎng)4周后，小鼠禁食6小時后腹腔注射STZ50mg/kg，連續(xù)5天，一周后用血糖儀檢測空腹血糖，將血糖≥16.7mmol/L的小鼠為成模。將成模的小鼠分為模型組、鹽酸二甲雙胍組、健脾疏肝顆粒低劑量組、健脾疏肝顆粒高劑量組，每組10只。

2.2 劑量設(shè)置

鹽酸二甲雙胍給藥量為0.2g/kg，健脾疏肝顆粒低劑量組、健脾疏肝顆粒高劑量組分別采用9.3g/kg、18.6g/kg的藥液灌胃，STZ給予同體積的生理鹽水，每日一次，給藥4周。

2.3 指標(biāo)檢測

血糖指標(biāo)檢測：給藥之前以及給藥2周、給藥4周進(jìn)行血糖檢測。血清指標(biāo)檢測：給藥結(jié)束后分別進(jìn)行糖耐量(OGTT)實(shí)驗(yàn)、空腹血糖(FBG)、血清胰島素水平(FINS)、血脂[甘油三脂(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)]檢測，并計算胰島素敏感性指數(shù)(ISI，ISI=Ln[1/(FINS×FBG)])和胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR，HOMA-IR=(FBG×FINS)/22.5)。OGTT檢測方法：給小鼠灌服葡萄糖溶液(1g/kg)后0、30、60、120min，尾靜脈取血，測定各個時間點(diǎn)的血糖值，并計算血糖曲線下面積(AUC，AUC=0.25×(0h血糖值+4×0.5h血糖值+3×2h血糖值))。

2.4 實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計方法

3 結(jié)果

3.1 疏肝健脾顆粒對小鼠一般癥狀的改善

給藥4周后，各治療組小鼠多飲、多尿等癥狀及精神狀態(tài)均較模型組有一定程度的改善，且疏肝健脾顆粒的低、高劑量組體重低于模型組(p<0.01)。體重數(shù)據(jù)見表1。

表1 疏肝健脾顆粒對糖尿病小鼠體重的影響

注：與模型組比較，*p<0.05，**p<0.01。

3.2 疏肝健脾顆粒對小鼠血糖的改善

表2結(jié)果表明，與正常組比較，給藥前，各組造模小鼠血糖值均顯著升高(P<0.01)，血糖值≥16.7mmol/L，表明糖尿病小鼠造模成功。與模型組比較，給藥后鹽酸二甲雙胍組、疏肝健脾顆粒低、高劑量組小鼠血糖值均明顯降低(P<.05或P<0.01)。

表2 疏肝健脾顆粒對糖尿病小鼠血糖的影響

注：與正常組比較，##p<0.01，與模型組比較，**p<0.01。

3.3 疏肝健脾顆粒對小鼠胰島素敏感和抵抗的影響

表3實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各給藥均無促進(jìn)胰島素分泌作用。與正常組比較，模型組FBS、FINS明顯升高，ISI顯著下降，HOMA-IR顯著增加(p<0.01)。與模型組比較，鹽酸二甲雙胍和疏肝健脾顆粒低、高劑量均可以顯著降低FBG、FINS以及改善胰島素敏感性，改善胰島素抵抗的作用(p<0.01)，見表3。

表3 疏肝健脾顆粒對糖尿病小鼠胰島素敏感和抵抗的影響

注：與正常組比較，##p<0.01；與模型組比較，**p<0.01。

3.4 疏肝健脾顆粒對小鼠血脂的影響

表4結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組小鼠血清TG、TC水平明顯升高，HDL-C水平降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01或p<0.05)。與模型組比較，鹽酸二甲雙胍組、疏肝健脾顆粒低、高劑量組血清TG、TC顯著降低(p<0.01或p<0.05)，LDL-C水平升高(p<0.05)，見表4。

表4 疏肝健脾顆粒對糖尿病小鼠胰島素敏感和抵抗的影響

注：與正常組比較，##p<0.01，#p<0.05；與模型組比較，**p<0.01，*p<0.05。

3.5 疏肝健脾顆粒對小鼠糖耐量的影響

由表5結(jié)果可知，口服相同劑量的葡萄糖后，所有小鼠血糖均呈現(xiàn)先升高，后逐步下降，呈現(xiàn)葡萄糖吸收代謝的過程。糖負(fù)荷后，與正常組比較，模型組小鼠血糖各時間點(diǎn)均有顯著的升高(p<0.01)；與模型組比較，糖負(fù)荷后，各給藥組小鼠血糖均明顯較低(p<0.01或p<0.05)。見表5。

表5 疏肝健脾顆粒對糖尿病小鼠OGTT的影響

注：與正常組比較，##p<0.01；與模型組比較，**p<0.01，*p<0.05。

4 討論

糖尿病已成為影響全球健康的疾病之一，其患病率逐年上升，其是一種常見內(nèi)分泌代謝疾病，具有遺傳易感性[3，4]。糖尿病在中醫(yī)屬“消渴”范疇，2型糖尿病發(fā)病的根本原因是肝脾腎三臟的功能失調(diào)，多屬虛實(shí)夾雜，正虛多以氣陰兩虛為主，邪實(shí)多以氣滯、挾瘀、挾濕為主，故治療重在協(xié)調(diào)三臟關(guān)系[5]。糖代謝紊亂是糖尿病患者血糖失衡的重要原因之一[6]。糖尿病的代表生化特征是高血糖，是由于肝臟外周組織對葡萄糖的利用減少、肝糖生成增多導(dǎo)致的。

本實(shí)驗(yàn)采用STZ聯(lián)合高脂誘導(dǎo)建立糖尿病小鼠模型[7]，實(shí)驗(yàn)期間小鼠出現(xiàn)“三多一少”癥狀，血糖水平升高、糖耐量異常、高血脂、胰島素抵抗增加，敏感性降低，因此需要采取降糖、降脂改善癥狀。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，疏肝健脾顆粒能夠有效降低STZ所導(dǎo)致的糖尿病小鼠血糖，改善糖耐量異常，提高小鼠機(jī)體胰島素的敏感性和降低胰島素抵抗，且能夠調(diào)節(jié)血脂水平使其恢復(fù)正常水平。

綜上，疏肝健脾顆粒能夠通過改善糖脂代謝提高胰島素敏感性發(fā)揮治療糖尿病作用。

[1]王紅梅，閆雅更，董鳳麗，呂和，張琳，郭曉微.糖尿病患者發(fā)生慢性并發(fā)癥的危險因素分析[J].醫(yī)學(xué)綜述，2018，24(01)：175-178+183.

[2]嚴(yán)正松，宋康，徐素美，王苗娟.疏肝健脾顆粒治療高脂血癥的臨床觀察[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2011，35(04)：492-493+495.

[3]中國2型糖尿病防治指南(2013年版)[J].中國糖尿病雜志，2014，22(08)：2-42.

[4]侯清濤，李蕓，李舍予，田浩明.全球糖尿病疾病負(fù)擔(dān)現(xiàn)狀[J].中國糖尿病雜志，2016，24(01)：92-96.

[5]趙丹丹，李小可，于娜，方心，穆倩倩，秦培潔，莫芳芳，趙保勝，高思華.降糖消渴顆粒對2型糖尿病大鼠糖脂代謝的影響[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19(24)：172-176.

[6]張世奇.辣椒素對I型糖尿病大鼠糖代謝的影響及其降糖機(jī)制的研究[D].西南大學(xué)，2017.

[7]FURMAN B L.Streptozotocin-Induced Diabetic Models in Mice and Rats[J].CurrProtocPharmacol，2015，70(5 47 1-20).