秦 鳳，樊建民

(山東省菏澤市鄆城縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 274700)

肺癌是一種發(fā)病率和致死率極高的惡性腫瘤，近年來我國(guó)肺癌發(fā)病率逐漸上升，總體發(fā)病率高達(dá)0.061%，加上肺癌本身治療的復(fù)雜性和長(zhǎng)期性，不論是在我國(guó)還是國(guó)外，肺癌都是病死率最高的腫瘤之一[1]。非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)是肺癌的一種常見類型，在肺癌患者中大約80%為NSCLC[2]。NSCLC的種類大致分為鱗癌、大細(xì)胞癌和腺癌[3]?？咕娜祟愱栯x子抗菌蛋白18(hCAP18)來源于先天性的免疫細(xì)胞，可以消滅部分細(xì)菌和真菌細(xì)胞，hCAP18能夠在肺癌和結(jié)直腸癌等腫瘤中高度表達(dá)，并且加速癌細(xì)胞的增長(zhǎng)。早期的NSCLC會(huì)出現(xiàn)發(fā)熱、胸痛、氣促、咳嗽等現(xiàn)象，但是這些癥狀并不明顯，很難判斷其準(zhǔn)確率，大多數(shù)患者被發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)進(jìn)入中后期，這時(shí)治療成功率很低，所以，NSCLC的早期診斷對(duì)治療該病以及減少病死率有重大作用[4]。NSCLC相比于小細(xì)胞肺癌來說，惡性程度較低，因而致死率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于小細(xì)胞肺癌，但是由于早期診斷的困難，依然是醫(yī)學(xué)研究的難題。本研究通過對(duì)照，分析hCAP18在NSCLC患者血清中的水平，以及其在輔助診斷、早期診斷和判斷預(yù)后中的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2014年4 月至2015年6月收治的48例NSCLC患者及48例同期體檢健康者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)患者符合NSCLC病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)年齡>18歲，性別不限、自愿參與研究者；(3)無嚴(yán)重心腦血管及軀體疾?。?4)無精神障礙和交流障礙，能夠配合醫(yī)生研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)意識(shí)障礙、理解力低下不能進(jìn)行有效溝通者；(2)肝腎功能障礙、嚴(yán)重精神障礙或失語癥狀、不能配合本研究者。本研究的試驗(yàn)程序已通過地區(qū)倫理學(xué)相關(guān)機(jī)構(gòu)的批準(zhǔn)。兩組研究對(duì)象基本資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1分組方法 將48例NSCLC患者作為觀察組，48例同期體檢健康者作為對(duì)照組。觀察組中男21例、女27例，年齡30～79歲、平均(48±5)歲；對(duì)照組中男21例、女27例，年齡32～80歲、平均(52±7)歲。

1.2.2研究方法 在早晨分別空腹采集對(duì)照組及觀察組術(shù)前和術(shù)后30 d靜脈血5 mL，借助離心直徑為24 cm，轉(zhuǎn)速為3 000 r/min的儀器離心10 min來提取血清，將提取后的血清放置于-80 ℃的低溫下進(jìn)行保存。對(duì)治療后的觀察組患者進(jìn)行隨訪，采用電話、住院或者門診觀察的方式來訪查，隨訪時(shí)間為兩年，頻率為每月1次。通過觀察CT圖像，分析腫瘤標(biāo)志物和病理特征情況來判斷腫瘤復(fù)發(fā)狀況。

1.2.3試劑與儀器 hCAP18酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)試劑盒采購(gòu)于杭州恒奧專業(yè)檢測(cè)卡研發(fā)公司，Bio-Rad680酶標(biāo)儀采購(gòu)于海甘薇生物科技有限公司，自動(dòng)洗板機(jī)使用北京譽(yù)朗諾科技有限公司AT-828自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)。細(xì)胞角蛋白19(CyFRA21-1)檢測(cè)采用德國(guó)Roche公司的e601電化學(xué)發(fā)光儀及配套的試劑盒,癌胚抗原(CEA)ELISA試劑盒采購(gòu)于北京華美生物工程有限公司。

1.2.4檢測(cè)方法 血清hCAP18檢測(cè)：hCAP18抗體包被微孔板分別加標(biāo)準(zhǔn)品、空白對(duì)照、各組等待檢測(cè)的血清各100 μL,在恒溫37 ℃下孵育60 min。通過自動(dòng)洗板機(jī)進(jìn)行洗滌，洗滌3次之后在微孔板加入酶標(biāo)二抗100 μL，在恒溫37 ℃下孵育30 min。通過自動(dòng)洗板機(jī)進(jìn)行洗滌，洗滌3次，在微孔中加入底物90 μL，放置在陰暗處，在恒溫37 ℃下孵育15 min，最后加入終止液50 μL，將檢測(cè)物放于450 nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)[5]。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者h(yuǎn)CAP18指數(shù)比較 觀察組患者血清hCAP18水平明顯高于對(duì)照組，但低于術(shù)后，兩組患者血清hCAP18水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組患者血清hCAP18水平比較

2.2不同腫瘤標(biāo)志物對(duì)NSCLC檢測(cè)的靈敏度和特異度比較 血清hCAP18對(duì)于NSCLC檢測(cè)的靈敏度和特異度明顯高于其他兩種腫瘤標(biāo)志物，三者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 血清hCAP18、CEA、CyFRA21-1對(duì)NSCLC檢測(cè)的靈敏度和特異度[n(%)，n=48]

2.3血清不同hCAP18水平NSCLC患者術(shù)后復(fù)發(fā)率比較 術(shù)后血清中hCAP18≤(390．0±37.6)μg/L的NSCLC患者復(fù)發(fā)率明顯低于hCAP18>(390．0±37.6)μg/L的NSCLC患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 血清中不同水平hCAP18復(fù)發(fā)率比較

2.4血清中不同hCAP18水平NSCLC患者預(yù)后評(píng)估 隨訪2年后，術(shù)后血清中hCAP18≤(390．0±37.6)μg/L的NSCLC患者復(fù)發(fā)率和變化明顯低于血清中hCAP18>(390．0±37.6)μg/L的NSCLC患者，其復(fù)發(fā)情況差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖1。

圖1 血清hCAP18檢測(cè)對(duì)NSCLC患者預(yù)后分析

3 討 論

目前，對(duì)于肺癌的檢測(cè)手段，最常見的是CT、X線片及各類支氣管鏡和痰脫落細(xì)胞檢查，然而，胸片類檢測(cè)在NSCLC的診斷中靈敏性較差，至于支氣管鏡類檢查則是侵入性方式，對(duì)患者身體有所損害[6]。CT檢查的靈敏性高，但正是因?yàn)槠溥^高的靈敏性反而更容易引起假陽性的結(jié)果。有研究提出，采用更少劑量的螺旋CT來作為診斷肺癌的常用手段，但這種方式尚處于研究階段，不夠成熟。同時(shí)，利用腫瘤標(biāo)志物對(duì)NSCLC進(jìn)行輔助診斷、早期診斷、預(yù)后判斷和療效監(jiān)測(cè)具有更高的使用價(jià)值，但是現(xiàn)在比較常用的腫瘤標(biāo)志物如CEA、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、CyFRA21-1、鱗狀細(xì)胞癌抗原(SCC)、糖類抗原125(CA125)等在肺癌的各種診斷中尚存在不足，對(duì)于NSCLC的檢測(cè)存在局限性[7]。所以，找到新型且具有更高靈敏度和特異度的腫瘤標(biāo)志物是當(dāng)今臨床醫(yī)學(xué)所急需的。

hCAP18來源于免疫細(xì)胞自身分泌的一種肽，據(jù)相關(guān)研究指出，hCAP18能夠在肺癌中具備較高的表達(dá)性，加速人體內(nèi)癌細(xì)胞的增加[8]。陽離子抗菌肽作用機(jī)制多種多樣，即使細(xì)胞膜孔不完全，陽離子抗菌肽也能發(fā)揮作用。陽離子抗菌肽能夠讓細(xì)菌的細(xì)胞膜自身的滲透性增強(qiáng)，從而發(fā)揮增殖癌細(xì)胞的作用。陽離子抗菌肽對(duì)溫度具有較高的抵抗性，很容易與水相融，并且能夠殺死細(xì)菌，對(duì)病毒原體、各類真菌具有高殺傷力，抗菌肽人類陽離子抗菌蛋白對(duì)人體的常規(guī)細(xì)胞不會(huì)造成損傷，基本不會(huì)出現(xiàn)耐藥菌株[9]。陽離子抗菌肽能夠借助人體的靜電作用來穿過細(xì)胞膜孔，促成離子通道的出現(xiàn)，導(dǎo)致人體內(nèi)的水溶性物質(zhì)溢出細(xì)胞，促使人體三磷酸腺苷的水平減少，進(jìn)而阻礙細(xì)胞的正常呼吸，從而殺死細(xì)菌[10]。因?yàn)槿梭w的真核細(xì)胞膜上存在豐富的膽固醇，能夠讓細(xì)胞膜的穩(wěn)定性大幅度提高，因此hCAP18不會(huì)溶解細(xì)胞的外膜，也就不會(huì)損害人體的真核細(xì)胞。

相關(guān)研究指出，hCAP18在人體肺癌細(xì)胞中高度的表達(dá)，能夠促進(jìn)癌細(xì)胞的不斷增加和移動(dòng)。hCAP18具備組織結(jié)構(gòu)的特異屬性，當(dāng)hCAP18具備外源性和內(nèi)源性的高度表達(dá)性時(shí)，它就能促進(jìn)肺癌細(xì)胞的迅速增加，hCAP18的主要來源是肺癌細(xì)胞和其他的炎癥性細(xì)胞群。hCAP18能夠通過多種途徑加速癌細(xì)胞的增殖，它能促使人體內(nèi)癌細(xì)胞Wnt/β-catenin的蘇醒，以及借助其他方式來為癌細(xì)胞創(chuàng)造適合腫瘤生存增長(zhǎng)的微環(huán)境。本研究通過對(duì)比NSCLC患者和健康體檢者血清hCAP18水平，發(fā)現(xiàn)NSCLC患者血清hCAP18明顯高于對(duì)照組。同時(shí)，通過對(duì)NSCLC患者手術(shù)前后血清中hCAP18水平分析發(fā)現(xiàn)，腫瘤切除后患者血清hCAP18水平為(423.5±37.6)μg/L，明顯低于術(shù)前的(6 823.0±751.8)μg/L。當(dāng)hCAP18水平增加時(shí)，能夠通過激活Wnt/β-catenin來為癌細(xì)胞創(chuàng)造出適合其迅速增長(zhǎng)的微環(huán)境，增強(qiáng)細(xì)胞膜的滲透作用，促進(jìn)炎性反應(yīng)的發(fā)生，進(jìn)而召集炎性細(xì)胞因子，對(duì)腫瘤微環(huán)境中相應(yīng)的血管生成，實(shí)現(xiàn)對(duì)癌細(xì)胞的增殖，而癌細(xì)胞的增加也為hCAP18的轉(zhuǎn)化增生提供了條件，兩者存在互利共生關(guān)系，一者的上升或下降會(huì)影響另一者的數(shù)量水平。

hCAP18主要來源于巨噬細(xì)胞等炎癥免疫細(xì)胞，而這些細(xì)胞可以產(chǎn)生炎癥因子，從而推動(dòng)腫瘤的生成[11]。NSCLC患者體內(nèi)癌細(xì)胞分泌的硫酸軟骨素蛋白聚糖能夠使巨噬細(xì)胞蘇醒，借助TLR2信號(hào)途徑實(shí)現(xiàn)對(duì)巨噬細(xì)胞內(nèi)hCAP18基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，之后在癌細(xì)胞的微環(huán)境中出現(xiàn)，當(dāng)肺癌細(xì)胞出現(xiàn)時(shí)，炎癥細(xì)胞能夠使hCAP18高度表達(dá)，從而顯示出更高的靈敏性[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，血清hCAP18檢測(cè)的NSCLC靈敏度為93.75%，特異度為95.83%，相比于診斷肺癌常用的CEA和CyFRA21-1來說，靈敏度和特異度更高，說明血清hCAP18對(duì)于檢測(cè)肺癌具有較好的診斷價(jià)值。借助對(duì)術(shù)后的NSCLC患者進(jìn)行為期2年的隨訪觀察，發(fā)現(xiàn)血清hCAP18≤(390．0±37.6)μg/L的NSCLC患者的復(fù)發(fā)率為12.5%(4/32),而血清hCAP18>(390．0±37.6)μg/L的NSCLC患者的復(fù)發(fā)率為50.0%(8/16)，低水平的NSCLC患者復(fù)發(fā)率和病情變化明顯低于高水平的NSCLC患者，說明檢測(cè)hCAP18水平改變有助于在肺癌術(shù)后病理情況的監(jiān)測(cè)和預(yù)后分析。

綜上所述，血清hCAP18檢測(cè)對(duì)NSCLC的輔助診斷具有良好的靈敏度和特異度，對(duì)于NSCLC的輔助診斷和早期診斷有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。

[1]錢桂生，余時(shí)滄．肺癌流行病學(xué)最新資料與啟示[J]．中華結(jié)核和呼吸雜志，2012，35(2)：86-89．

[2]羅磊，王永坤，李世康．香芹酚誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌1299細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[J]．天津醫(yī)藥，2016，44(12)：1418-1422．

[3]昌盛，代敏，任建松，等．中國(guó)2008年肺癌發(fā)病、死亡和患病情況的估計(jì)及預(yù)測(cè)[J]．中華流行病學(xué)雜志，2012，33(4)：391-394．

[4]姚曉軍，劉倫旭．肺癌的流行病學(xué)及治療現(xiàn)狀[J]．現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2014，24(8)：1982-1986．

[5]李冬，權(quán)文強(qiáng)，李澤兵，等．抗菌肽 hCAP18在非小細(xì)胞肺癌患者血清中的表達(dá)及其臨床應(yīng)用價(jià)值[J]．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2016，39(8)：595-598．

[6]晉家智．血清腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)在肺癌診斷中的價(jià)值分析[J]．中外醫(yī)療，2013，32(6)：188-189．

[7]劉鳳霞．腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)在肺癌診斷中的臨床價(jià)值[J]．中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)，2014，6(2)：107-108,117．

[8]洪軍，胡建業(yè)．陽離子抗菌肽的殺菌及抗藥性機(jī)制的研究進(jìn)展[J]．中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2012，39(11)：140-144．

[9]陳武，黎定軍，丁彥，等．抗菌肽理化性質(zhì)的研究進(jìn)展[J]．湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2012，38(2)：150-155．

[10]劉勃，尹鵬濱，張立海，等．真核細(xì)胞自噬現(xiàn)象及其對(duì)骨重塑的作用[J]．武警醫(yī)學(xué)，2016，27(11)：1157-1159．

[11]陳宇平，穆傳勇，翁根龍，等．非小細(xì)胞肺癌組織MIP-1表達(dá)及其與樹突狀細(xì)胞浸潤(rùn)的關(guān)系[J]．江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2008，18(5)：440-443．

[12]王麗飛，陳剛，王東昌，等．腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在肺癌中的研究進(jìn)展[J]．國(guó)際呼吸雜志，2016，36(22)：1735-1739．