張俊英,楊叔哲，鄧 耀，賀葦軍

(四川省成都市婦女兒童中心醫(yī)院檢驗(yàn)科 610031)

高危型人乳頭狀瘤病毒(HPV)感染可能造成女性高風(fēng)險(xiǎn)的宮頸癌病變。調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，HPV16、18是世界范圍內(nèi)主要感染的基因亞型,可導(dǎo)致70%宮頸癌病例，排名3～8位的基因型分別是HPV33、45、31、58、52、35，而亞洲地區(qū) HPV52/58為常見感染的基因亞型[1-2]。CHAN等[3]統(tǒng)計(jì)全世界 HPV52/58所致的宮頸病變Meta分析指出亞洲 HPV52/58 所致宮頸病變高于其他地區(qū)(美洲、歐洲、非洲、大洋洲)，東亞HPV52/58感染顯著高于亞洲其他地區(qū)(東南亞、南亞、西亞)。本文回顧分析2012年7月至2016年6月成都地區(qū)女性HPV宮頸癌篩查生殖道標(biāo)本共58 650例，旨在對(duì)宮頸癌的篩查和相關(guān)疫苗的開發(fā)起到一定的作用,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2012年7月至2016年6月來本院做孕前檢查或常規(guī)體檢女性58 650例，年齡13～78歲，平均年齡32.56歲， 以20～29歲居多占39.60%。

1.2儀器與試劑 儀器包括Hema9600梯度基因擴(kuò)增儀、YN-H16恒溫雜交儀，采用亞能生物公司人乳頭瘤病毒基因分型(23型)檢測(cè)試劑盒(PCR反向點(diǎn)雜交法)。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集 采用亞能公司提供的專用HPV取樣器深入宮頸口內(nèi)2～3 cm采集女性宮頸脫落細(xì)胞，順時(shí)針旋轉(zhuǎn) 3～5周，停留10 s后慢慢取出取樣器放入裝有保存液的標(biāo)本管中，旋緊管蓋，送檢。

1.3.2檢測(cè)目的 HPV基因分型采用基因芯片檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)23種HPV基因型，包括18種高危型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83型)和5種低危型(6、11、42、43、81型)。

1.3.3試驗(yàn)步驟與結(jié)果判斷 嚴(yán)格按試劑盒的操作規(guī)程進(jìn)行，首先提取標(biāo)本中的 HPV-DNA，再進(jìn)行PCR體外擴(kuò)增，隨后將擴(kuò)增產(chǎn)物與固定在膜上的23種HPV亞型探針進(jìn)雜交，再通過洗膜,然后顯色,最后結(jié)果判斷。通過肉眼判斷雜交信號(hào)的有無確定是否存在HPV感染，陽性點(diǎn)為藍(lán)色，每一條膜條上都有PCR反應(yīng)質(zhì)控點(diǎn)和雜交顯色點(diǎn)各一個(gè),質(zhì)控點(diǎn)不顯色提示試劑失效或操作有誤，需重新試驗(yàn),出現(xiàn)多個(gè)陽性點(diǎn)判為多重感染。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Excel2007統(tǒng)計(jì)處理數(shù)據(jù)，組間標(biāo)本率的比較采用χ2檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.158 650例宮頸脫落細(xì)胞HPV52/58檢出結(jié)果 共12 399例受檢者感染HPV，總感染率21.14%，18種高危型感染率排例前5位的依次是HPV52(4.91%)、HPV16(2.92%)、HPV58(2.46%)、HPV53(1.96%)、HPV51(1.84%)，HPV52和HPV58順序分別為第1位和第3位。

2.2HPV52/58隨年齡分布情況

2.2.1不同年齡HPV52/58檢出結(jié)果 在<20歲、20～<30歲、30～<40歲、40～49歲、50～<60歲、≥60歲年齡段女性HPV52感染率分別為7.86%、5.38%、4.57%、4.36%、4.89%、8.13%，HPV58感染率分別為6.29%、2.53%、2.21%、2.47%、2.82%、6.16%，<20歲和≥60歲年齡組的HPV52/58感染率高于其他年齡組(均P<0.05)，HPV52/58感染率隨年齡曲線呈U型分布，具有兩個(gè)感染高峰年齡段是<20歲和≥60歲。

2.2.2不同年齡組HPV52/58單一感染及與高危型和低位型混合感染情況 HPV52單一感染中，在 30～<50歲一重感染率最高(均P<0.05)，30～<40歲和40～<50歲與其他年齡比較(均P>0.05)，<20歲和≥60歲年齡組感染率最低(均P<0.05)；HPV58一重感染隨年齡先低后升高最后降低(<20歲最低，在30～<40歲最高，在≥60歲降到最低點(diǎn))，HPV58一重感染在30～<60歲(HPV58在30～<40歲、40～<50歲、50～<60歲比較，均P>0.05)感染率高于其他年齡(均P<0.05)，<20歲和≥60歲感染率最低(均P<0.05)。HPV52/58與高危型和低位型混合感染中，HPV52高危型混合感染在≥60歲感染率最高(均P<0.01)，HPV52低危型混合感染率隨年齡分布曲線差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，HPV58高危型混合感染率隨年齡曲線差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，HPV58低危型混合感染在<20歲感染率高于其他年齡(均P<0.05)，見表1。

表1 HPV52/58不同年齡組不同感染模式的感染率[n(%)]

2.3HPV52/58的感染模式 HPV52感染2 878例，最多十重感染，沒有九重感染病例，具體為：一重1 708例(59.35%)，二重737例(25.61%)，三重279例(9.69%)，四重96例(3.34%)，五重32例(1.11%)，六重13例(0.45%)，七重7例(0.24%)，八重2例(0.07%)，十重4例(0.14%)。 HPV58感染1 444例，最多九重感染，沒有八重感染病例，具體為：一重737例(51.04%)，二重555例(38.43%)，三重95例(6.58%)，四重32例(2.22%)，五重13例(0.90%)，六重7例(0.48%)，七重1例(0.07%)，九重4例(0.28%)。HPV52和HPV58皆以一重感染為主，HPV52和HPV58多重感染中以二重感染為主分別為62.99%(737/1 170)和78.50%(279/707)，多重感染率隨合并感染的型別數(shù)增加逐漸下降。HPV52多重感染處在前5位基因型依次為16、58、81、53、51，每個(gè)基因型分別為215、191、182、153、149例；HPV58多重感染處在前5位的是52、16、81、53、51，每個(gè)基因型分別為191、105、91、78、64例。

3 討 論

本研究18種高危型感染基因型與來自3個(gè)省大樣本數(shù)據(jù)都證明了HPV52/58是我國(guó)女性宮頸分泌物HPV感染中排在前3位的位置，HPV52感染率高于HPV58感染率[4-6]。中國(guó)地域?qū)拸V，受到地理位置和民族生活習(xí)慣影響，HPV基因型的流行型別會(huì)有差異，本研究HPV52感染率為4.91%與重慶[4]4.55%、無錫[5]3.09%和山東[6]4.22%基本一致；本研究HPV58感染率為2.46%，與重慶[4]3.13%、山東[6]3.86%和無錫[5]1.92%相比,與重慶基本一致而比無錫稍高一些，說明成都HPV52/58感染率與重慶比較接近，可能與地理位置相近有關(guān)。中國(guó)的HPV52/58感染率比GUAN等[7]所報(bào)道的東亞稍低一些,東亞HPV52感染率為6.1%，2倍于其他地區(qū)(東南亞、南亞、西亞)；HPV58感染率為10.2%，4～12倍于其他地區(qū)(東南亞、南亞、西亞)。

HPV感染已被公認(rèn)是宮頸癌發(fā)生的確切病因[8],HPV感染宿主細(xì)胞，病毒DNA以不同程度整合到宿主細(xì)胞，關(guān)于HPV52/58整合狀態(tài)與宮頸病變的關(guān)系。袁艷[9]指出HPV52/58整合狀態(tài)與宮頸病變之間無顯著性關(guān)系；HPV52/58所致的宮頸癌中的E6、E7常常發(fā)生堿基的突變，這種基因突變可能在宮頸鱗狀上皮病變和浸潤(rùn)癌的進(jìn)展中發(fā)揮重要功能，正是因?yàn)镠PV的E6、E7通過使宿主抑癌基因p53與和Rb失去活性，被認(rèn)為是重要的致癌因子。

HPV52/58與宮頸病變的關(guān)系，馮余寬等[10]分析來自成都地區(qū)1 226例宮頸病變患者的基因型，在高危型病毒感染中，HPV58是造成宮頸炎和宮頸濕疣主要的基因型，HPV52同樣也是造成宮頸炎主要的基因型，HPV52/58同HPV16一起是造成宮頸癌前病變的最主要的3個(gè)基因型，特別在CINⅡ和CINⅢ，HPV58和HPV16的感染更為突出。CHAN等[3]分析了HPV52/58在全世界女性ICC病變中感染率，HPV52和HPV58亞洲感染率分別為4.9%和7.9%，明顯高于其他地區(qū)(美洲、歐洲、非洲、大洋洲)，并且HPV52/58感染率從CINⅡ到ICC病變的過程中東亞顯著高于亞洲其他地區(qū)(東南亞、南亞、西亞)，東亞HPV52在CINⅡ、CINⅢ、ICC感染率分別為17.8%、15.2%、4.6%，東亞HPV58在CINⅡ、CINⅢ、ICC感染率分別為18.1%、18.0%、7.9%。為何亞洲女性HPV52/58感染高于其他地區(qū)，一方面因?yàn)檫z傳因素，亞洲女性存在HPV52和HPV58的遺傳易感性[11]，另一方面亞洲女性存在HPV52和HPV58基因變種。CHAN等[12]指出在含E7基因突變患者中有HPV58感染的婦女發(fā)生宮頸癌的可能性約為無HPV58感染婦女的27倍，HPV58攜帶E720i/g63s基因突變的婦女比不攜帶該突變的婦女增加6.9倍的患癌率。

面對(duì)HPV52/58如此高的感染率，預(yù)防性疫苗是降低宮頸癌的最重要的途徑，我國(guó)處在東亞的地理位置更應(yīng)該重視HPV52/58對(duì)女性的感染，2017年1月首次在我國(guó)大陸進(jìn)行HPV16和HPV18疫苗預(yù)防宮頸癌，對(duì)其他基因型感染僅只是有限交叉保護(hù)，對(duì)HPV52/58交叉保護(hù)更小[13]。因此我國(guó)疫苗的覆蓋類型有必要考慮到HPV52/58，可能覆蓋HPV52/58的九價(jià)疫苗比較符合我國(guó)的國(guó)情。

HPV52/58感染率隨年齡不同,總體來說<20歲和≥60歲是感染的兩個(gè)高峰期；這與重慶[6]研究結(jié)果一致，<20歲感染率高，可能跟此年齡段性行為活躍、免疫系統(tǒng)未被致敏有關(guān)。中老年人較高的感染率認(rèn)為與機(jī)體免疫力下降有關(guān)。本研究中HPV52/58皆以一重感染為主，分析一重感染在不同年齡段的感染率，HPV52在30～<50歲一重感染率最高，但在≥60歲HPV52與高危型發(fā)生混合感染最高。HPV58在30～<60歲一重感染率最高，在<20歲HPV58與低位型發(fā)生混合感染率最高。我國(guó)首次獲批準(zhǔn)的疫苗是9～25歲，如果在沒有感染HPV的女性中放寬年齡，充分考慮到高危年齡段那部分女性獲得免疫疫苗的使用，也許更能有效降低宮頸癌的發(fā)生率，同時(shí)根據(jù)年齡段HPV感染特征加強(qiáng)高危年齡段女性預(yù)防HPV知識(shí)的培訓(xùn)和宮頸癌篩查，也能有效降低HPV感染率。

本研究HPV52/58多重感染中以二重感染為主，多重感染率隨合并感染的型別數(shù)增加逐漸下降，符合高危型多重感染的一般特征，與其他研究一致[4-6]。多重感染是否增加宮頸癌的發(fā)生率，目前說法不一。SANDRI等[14]報(bào)道宮頸病變嚴(yán)重程度與HPV多重感染不相關(guān)，與HPV亞型密切相關(guān)，2/3的CIN患者的HPV16陽性。LEE等[15]研究顯示，單一HPV感染可使宮頸癌患病風(fēng)險(xiǎn)增加19.9倍，而多重HPV感染使其風(fēng)險(xiǎn)增加31.8倍。HPV52/58多重感染也可能增加宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)，值得重視。

綜上所述，HPV52/58是我國(guó)最常見的基因型，我國(guó)疫苗有必要考慮到HPV52/58覆蓋；HPV52和HPV58一重感染高發(fā)年齡段分別為30～<50歲和30～<60歲，同時(shí)應(yīng)重視多重感染嚴(yán)重性。

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