劉亞敏，蘇錦敏

(海南省三亞市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科 572000)

近年來，隨著社會生活節(jié)奏的加快及環(huán)境質量的下降，我國已婚夫婦不孕不育癥的發(fā)生率越來越高。不孕不育病因十分復雜，任何影響排卵、受精、著床的因素都會導致該病的發(fā)生。排卵障礙，輸卵管疾病，免疫紊亂，骨盆粘連/子宮內膜異位癥是引起女性不孕的主要原因。其中免疫因素導致不孕的發(fā)病率近年來呈急劇上升趨勢，不孕癥中大約有20%為免疫因素所造成[1]。已知特異性T輔助細胞(Th)及其細胞因子參與不育階段，而不孕癥與抗精子抗體(AsAb)、抗人絨毛膜促性腺激素抗體(AhCGAb)、抗卵巢抗體(AoAb)也有一定的關系,是造成不孕癥的重要免疫因素，但是Th細胞因子與相關抗體的關系卻很少有人研究[2-3]。因此，本研究通過檢測免疫不孕癥患者外周血中Th細胞因子及AhCGAb、AsAb、AoAb抗體表達水平，探討Th細胞因子與AhCGAb、AsAb、AoAb抗體的關系，為臨床免疫不孕癥的診治提供新的臨床依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年2月至2015年12月在本院就診的58例免疫不孕癥患者作為試驗組。所有入選患者均經(jīng)過至少12個月沒有避孕的正常性生活而未妊娠(WHO標準)，同時排除炎癥及其他器質性病變造成的不孕?；颊吣挲g27～42歲，平均(33.5±2.64)歲。同時期選取60例孕育功能正常的健康婦女為對照組，年齡26～40歲，平均(31.2±2.17)歲。兩組研究對象在研究前3個月內均未服用過性激素類藥物，而且無其他自身免疫性疾病。兩組研究對象一般資料進行比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。試驗前，所有受試者均簽署了知情同意書。

1.2方法

1.2.1采集標準 所有受試對象在月經(jīng)第2天早晨空腹時進行肘靜脈采血5 mL。血液標本在常溫下靜置30 min，3 000 r/min離心10 min，轉移血清，凍存于-20 ℃冰箱待測。

1.2.2細胞因子檢測 采用酶聯(lián)吸附免疫測定(ELISA)對各組血清中細胞因子進行檢測，試劑盒購于長沙安迪生物科技有限公司，試驗操作均嚴格按說明書進行。

1.2.3自身抗體檢測 AhCGAb、AsAb、AoAb等抗體也采用ELISA進行檢測，抗體檢測試劑盒購于浙江伊利康生物技術有限公司，試驗操作均嚴格按試劑盒說明書進行。

2 結 果

2.1細胞因子檢測結果 與對照組相比，試驗組Th1型細胞因子白細胞介素(IL)-2、IL-21、干擾素-γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；Th2型細胞因子IL-4、IL-6、IL-10水平也高于對照組,但僅有IL-4和IL-6指標差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組血清中細胞因子含量比較

表2 兩組血清AhCGAb、AsAb、AoAb相關抗體陽性表達率[n(%)]

2.2抗體檢測結果 抗體結果顯示，試驗組各相關抗體陽性率明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表2。

2.3Th1和Th2細胞因子與AhCGAb、AsAb、AoAb抗體的相關性分析 將試驗組血清中各細胞因子的水平與AhCGAb、AsAb、AoAb抗體陽性表達的蛋白量分別進行相關性分析。結果顯示，IL-21與AhCGAb、AsAb、AoAb的產(chǎn)生呈正相關(r=0.612、0.603、0.726，P<0.05);IL-6與AhCGAb、AsAb、AoAb的產(chǎn)生呈正相關(r=0.426、0.479、0.616，P<0.05)。TNF-α與AoAb的產(chǎn)生呈負相關(r=-0.544，P<0.05)，見表3。

表3 細胞因子水平與AhCGAb、AsAb、AoAb抗體相關性[r(P)]

3 討 論

Th根據(jù)其分泌的細胞因子不同可分為Th1和Th2兩種亞群，Th1細胞主要分泌IL-2、IL-21、IFN-γ、TNF-α；Th2細胞主要分泌IL-4、IL-6和IL-10。Th1型細胞因子主要介導細胞免疫，參與炎性反應。Th2型細胞因子主要介導體液免疫應答，輔助B細胞增殖分化。

Th1/Th2 的平衡對于維持正常的妊娠過程起著重要的作用，如果平衡被打破，比值變化偏向Th1時，Th1介導的細胞免疫反應增強，巨噬細胞活化，可能對滋養(yǎng)層細胞產(chǎn)生細胞毒作用而形成免疫損傷，影響胚胎著床及發(fā)育，甚至會引起妊娠丟失[4-5]。CHAOUAT等[6]研究顯示，將IL-2、IFN-γ和TNF-α注入孕鼠體內，孕鼠的妊娠過程將會被終止，說明Th1型細胞因子IL-2、IFN-γ和TNF-α對妊娠組織而言具有細胞毒效應。體外試驗證明IFN-γ能夠抑制滋養(yǎng)層的生長，和TNF-α協(xié)同作用，還可抑制胚胎的發(fā)育[7]。TNF-α和IL-2共同作用會促使NK樣細胞轉化成LAK細胞，也會損害胎盤組織[8]。IL-21能通過STAT3通路引起B(yǎng)細胞分化成漿細胞，產(chǎn)生大量自身抗體，引起自身免疫疾病，對女性來說，常會導致免疫不孕癥[9]。Th2型細胞因子對胎兒的生長發(fā)育有一定的正向促進作用。有研究表明，妊娠成功的母胎界面以Th2型細胞因子表現(xiàn)為主，Th2型細胞可維持母胎界面的免疫耐受[10]。IL-4對細胞的生長、分化有一定的調節(jié)作用，能夠抑制NK細胞黏附于血管內皮細胞，并抑制其進一步的活化[11]。IL-6可以抑制Th1細胞和調節(jié)性T細胞的產(chǎn)生和分化，在漿細胞的產(chǎn)生及自身抗體的分泌過程中也起重要作用。IL-10則可以通過選擇性抑制IL-6、IL-2、TNF-α等細胞因子的合成，直接抑制免疫應答。本研究結果顯示，Th1型細胞因子IL-2、IL-21、IFN-γ、TNF-α水平均明顯高于對照組(P<0.05)，而Th2型細胞因子僅有IL-4、IL-6水平高于對照組，IL-10增高不明顯，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究發(fā)現(xiàn)，雖然與對照組相比，Th1和Th2型細胞因子水平都有所增加，但是Th1型細胞因子水平差異更為顯著。正是因為Th1型細胞因子的過度表達，導致Th1/Th2 比例失衡，進而引起一系列異常免疫反應，影響胚胎著床及發(fā)育，引起妊娠損失，進而導致不孕，這與安利峰等[12]研究結果一致。

免疫不孕癥主要是由免疫因素引起，Th細胞功能的紊亂也會引起B(yǎng)細胞抗體分泌的異常。近年來，大量研究表明，不孕癥與AhCGAb、AsAb、AoAb有一定關系,是造成不孕癥的重要免疫因素。AhCGAb具有阻斷hCG的作用，導致妊娠不能維持，使得受精卵不能著床，引起RSA或胚胎停止發(fā)育等不良妊娠結局。AsAb是最早被肯定的抗生育抗體，它不僅能干擾精子的代謝和獲能，而且還影響受精卵著床和胚胎發(fā)育過程，最后導致不孕和流產(chǎn)的發(fā)生。卵巢組織成分，如卵母細胞、顆粒細胞和黃體細胞等，會在感染、創(chuàng)傷或手術等情況下刺激機體產(chǎn)生AoAb,從而引起自身免疫反應，導致孕酮、孕激素合成分泌不足，影響卵泡發(fā)育，加快卵巢閉鎖，引起不良妊娠結局。本研究結果顯示，試驗組AhCGAb、AsAb、AoAb等抗體陽性率明顯高于對照組(P<0.05)，說明3種抗體均參加了免疫性不孕的病理過程，且在生理期呈高表達，因此3種抗體也可以用來作為新的診斷指標來篩選免疫不孕癥。

另外，本研究還對Th1和Th2細胞因子與AhCGAb、AsAb、AoAb等抗體做了相關性分析，結果顯示IL-21和IL-6與AhCGAb、AsAb、AoAb的產(chǎn)生均呈正相關，這說明IL-21和IL-6可能通過促進B淋巴細胞增殖分化為漿細胞進而分泌AhCGAb、AsAb、AoAb抗體來發(fā)揮作用，而IL-6則可能是通過誘導IL-21的產(chǎn)生來促進T細胞輔助B細胞的能力，進而促進B細胞產(chǎn)生抗體。此外，研究結果還顯示TNF-α與AoAb的產(chǎn)生呈負相關，說明TNF-α可能在AoAb的產(chǎn)生過程中發(fā)揮著相反的作用，至于具體原因還有待進一步研究。

綜上所述，免疫不孕癥的發(fā)生與Th1和Th2型細胞因子水平變化及AhCGAb、AsAb、AoAb等抗體的高表達有著密切的關系，但是具體機制還有待進一步研究。從另一方面來說，免疫不孕癥患者血清中AhCGAb、AsAb、AoAb的高表達還提示，這3種抗體可以用來作為篩選免疫不孕癥新的診斷指標。

[1]BRAZDOVA A,SENECHAL H,PELTRE G,et al.Immune aspects of female infertility[J].Int J Fertil Steril,2016,10(1):1-10.

[2]RESTREPO B,CARDONA-MAYA W.Antisperm antibodies and fertility association[J].Actas Urol Esp,2013,37(9):571-578.

[3]AN L F,ZHANG X H,SUN X T,et al.Unexplained infertility patients have increased serum IL-2,IL-4,IL-6,IL-8,IL-21,TNFalpha,IFNgamma and increased Tfh/CD4 T cell ratio:increased Tfh and IL-21 strongly correlate with presence of autoantibodies[J].Immunol Invest,2015,44(2):164-173.

[4]CHALLIS J R,LOCKWOOD C J,MYATT L,et al.Inflammation and pregnancy[J].Reprod Sci,2009,16(2):206-215.

[5]徐澄,陸啟濱.Th1/Th2細胞因子失衡致復發(fā)性流產(chǎn)的機制及治療[J].長春中醫(yī)藥大學學報,2014,30(5):934-936.

[6]CHAOUAT G,ZOURBAS S,OSTOJIC S,et al.A brief review of recent data on some cytokine expressions at the materno-foetal interface which might challenge the classical Th1/Th2 dichotomy[J].J Reprod Immunol,2002,53(1/2):241-256.

[7]ZOU G M,REZNIKOFF-ETIEVANT M F,HIRSCH F,et al.IFN-gamma induces apoptosis in mouse embryonic stem cells,a putative mechanism of its embryotoxicity[J].Dev Growth Differ,2000,42(3):257-264.

[8]郭輝,王慶榮,張朝霞,等.反復流產(chǎn)的免疫學研究進展[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2008,16(2):127-129.

[9]DUAN Y G,YU C F,NOVAK N,et al.Immunodeviation towards a Th17 immune response associated with testicular damage in azoospermic men[J].Int J Androl,2011,34(6 Pt 2):e536-545.

[10]張建平.NK細胞與復發(fā)性自然流產(chǎn)母胎免疫紊亂[J].中山大學學報(醫(yī)學科學版),2010,31(4):451-456,481.

[11]齊衛(wèi)紅.反復自然流產(chǎn)患者外周血及母胎界面中白細胞介素10、8及腫瘤壞死因子-α的表達[J].生殖醫(yī)學雜志,2007,16(1):52-53.

[12]安利峰,勝利,趙霏,等.不孕癥患者外周血中Th1、Th2細胞因子與自身抗體產(chǎn)生的相關性[J].細胞與分子免疫學雜志,2014，30(5):527-529.