羅曉蓮,秦風雪△,林 珍,李永良

(青海省交通醫(yī)院:1.婦產(chǎn)科；2.普外科，西寧 810001)

卵巢癌(OC)是最常見的婦科惡性腫瘤之一，大多數(shù)OC患者一經(jīng)發(fā)現(xiàn)就已處于癌癥晚期了。它具有較高的病死率，是引起女性癌癥死亡的第五大原因[1]。目前，診斷為OC的患者仍然在逐年增加[2]。在過去20年，雖然通過更好的手術和更多可選擇的化療方式使得晚期OC患者的生存率有所增加，但是藥物治療所帶來的細胞毒性是非選擇性的，經(jīng)常導致顯著的毒性和短期的抗腫瘤反應[3-4]。此外，大多數(shù)患有OC的女性在一線治療后將遭受很大的腫瘤復發(fā)的風險，并且腫瘤均會產(chǎn)生對化療藥物的抗藥性，從而降低患者預后，影響患者的生存狀態(tài)，乃至導致OC患者死亡[5]。據(jù)統(tǒng)計，由于耐藥性的存在，在轉移性OC患者中5年生存率僅為5%[6-8]。雖然目前一些靶向治療藥物可以在一定程度上降低患者復發(fā)，改善預后，但是其對于OC的治愈率也僅為15%～20%，對于很多惡性OC仍然無法治愈[9]。所以鑒定驅動OC生長轉移的分子生物學事件對于發(fā)展最佳的治療策略是至關重要的。

對于眾多OC的化療藥物，雷替曲塞作為一種有效的胸苷酸合酶(TS)抑制劑，在OC的治療中發(fā)揮著重要的作用。雷替曲塞是一種CB3717的水溶性類似物，而CB3717是一種在20世紀80年代最初研究的基于喹唑啉的抗葉酸類似物。由于雷替曲塞具有良好的水溶性，所以它不會引起腎臟毒性反應[10]。此外，該化合物通過還原的葉酸鹽載體進入細胞，并通過葉酰聚谷氨酸合成酶(FPGS)進行快速聚谷氨酸化，因而具有良好的治療效果[11]。然而，也有研究報道，雷替曲塞作為化療藥物在某些OC患者中也同樣會引起腫瘤的耐藥性變化，隨之而來的便是腫瘤的惡化復發(fā)和浸潤轉移。

惡性腫瘤轉移的過程會發(fā)生上皮-間質轉化(EMT)，越來越多的研究表明它與上皮細胞惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關系密切，并且受到了高度的關注[12]。由于腫瘤細胞 EMT 是上皮樣腫瘤細胞獲得遷移能力的有效方式，所以在成體中成為占惡性腫瘤 90% 以上的上皮細胞癌浸潤轉移的一個重要途徑。目前體內和體外試驗證據(jù)都表明，EMT 在包含OC在內的多種惡性腫瘤的原發(fā)性浸潤和繼發(fā)性轉移中起著舉足輕重的作用。也有研究證明，EMT是一個潛在的腫瘤耐藥機制，其相關基因的表達對于腫瘤的耐藥起著非常重要的作用[13]。

因此，探究OC轉移相關基因及EMT相關的基因對于OC耐藥性及治療的研究具有重要意義。然而，到目前為止，并沒有更多的研究揭示雷替曲塞化療與OC復發(fā)惡化的關系，也沒有研究在此過程中OC部分轉移相關基因表達譜的變化。本研究探討了OC患者相關OC轉移相關基因的異常表達，并以此為基礎分析了OC轉移相關基因的異常表達與OC耐藥的相關性，以及OC轉移相關基因的異常表達對OC預后及生存的影響，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1材料 所有材料均來自于NCBI的GEO數(shù)據(jù)庫，見表1。

表1 研究中所用到的GES數(shù)據(jù)集

1.2方法

1.2.1表達量分析 基于數(shù)據(jù)庫特定研究標本數(shù)據(jù)集中特定目標基因的表達量的相對值進行表達量的分析，所有數(shù)據(jù)都經(jīng)過對數(shù)轉換和中位數(shù)中心化處理。根據(jù)表達量處理后數(shù)據(jù)進行聚類和差異分析。為了檢測OC轉移相關基因及EMT對于OC的發(fā)生、發(fā)展關系，筆者選取了3個參與EMT過程的OC轉移相關基因，分別為Snai1、Twist1和SIP1，據(jù)以往在其他腫瘤中的相關研究表明，它們在EMT的過程中表達量上調，并且在此過程中發(fā)揮著重要的作用。文中熱圖由HemⅠ軟件制作，比較差異分析圖由GraphPad Prism 5軟件制作。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

1.2.2生存分析 基于數(shù)據(jù)庫特定研究標本數(shù)據(jù)集中特定目標基因的表達量的相對值及對應標本的總生存(OS)和無疾病生存(DFS)信息進行生存分析，所有數(shù)據(jù)都經(jīng)過對數(shù)轉換和中位數(shù)中心化處理，并采用Kaplan-Meier分析方法進行分析。

1.2.3相關性分析 基于數(shù)據(jù)庫特定研究標本數(shù)據(jù)集中特定目標基因的表達量的相對值進行相關性分析，所有數(shù)據(jù)都經(jīng)過對數(shù)轉換和中位數(shù)中心化處理。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義，r<0表示呈負相關，r>0表示呈正相關。

2 結 果

2.1OC轉移相關基因在OC患者中的表達分析 OC標本和正常卵巢組織標本的相關基因表達譜的聚類分析結果表明，Snai1、Twist1和SIP1在OC標本中均存在高表達，見圖1。

圖1 OC數(shù)據(jù)集中OC轉移相關基因的表達譜分析

2.2OC轉移相關基因對OC患者生存及預后的影響 在OC患者中，Snai1的高表達會導致OC患者的總生存率明顯降低(P<0.05)，并且在OC患者中，Snai1的高表達也同樣會導致OC患者的無疾病生存率明顯降低(P<0.05)。與此類似，也在同樣的數(shù)據(jù)集中對Twist1的高表達對OC患者的總生存率和無疾病生存率進行了分析，結果表明，Twist1的高表達同樣會導致OC患者的總生存率和無疾病生存率明顯降低(P<0.05)，見圖2。

2.3OC轉移相關基因在雷替曲塞治療后的表達分析 結果表明，與在OC患者中的表達情況相似，Snai1和Twist1在藥物治療后的OC患者中也有明顯的高表達情況(Snai1，P<0.05；Twist1，P<0.05)；而與上述結果不同的是，在藥物治療后的OC患者中，SIP1的表達量變化差異無統(tǒng)計學意義(SIP1，P>0.05)，見圖3。

圖2 OC轉移相關基因的表達與OC患者生存狀態(tài)的Kaplan-Meier分析

圖3 OC轉移相關基因在耐藥性OC患者中的表達差異比較

2.4OC轉移相關基因在OC患者中表達的相關性分析 Snai1和Twist1在OC患者中的表達呈正相關(r=0.452，P<0.01)，見圖4。

圖4 OC轉移相關基因在耐藥性OC患者中的表達相關性分析

3 結 論

腫瘤細胞轉移的進行由多個生物學過程組成，該過程的實現(xiàn)對于惡性腫瘤的多種惡化事件都具有促進作用，包括腫瘤復發(fā)、浸潤、轉移和藥物耐受等。因此，這些過程需要眾多細胞內分子參與發(fā)揮作用，其中包括一些生長因子、激酶受體和轉錄因子等在此過程中發(fā)揮著重要的作用[14-15]。據(jù)此，本研究以Snai1、Twist1和SIP1 3個腫瘤轉移相關的因子為基礎，針對OC轉移和雷替曲塞耐藥進行了相關性分析。雖然，近年來OC治療方式有所轉變，但是化療仍然是OC治療的支柱，所以對于OC耐藥相關的研究仍具有重要的價值。此外，上述這些轉移相關的調節(jié)因子對于腫瘤的調控存在著不同的模式，這與EMT在惡性腫瘤的早期階段所存在的時間和空間上的異質性有關，同時也對腫瘤耐藥性的出現(xiàn)有著不同的調控機制。因此，腫瘤轉移相關的調節(jié)因子的鑒定和研究是必要的。目前，隨著腫瘤耐藥性研究的不斷深入，其在OC轉移復發(fā)中發(fā)揮的作用也不斷地被發(fā)現(xiàn)，耐藥性產(chǎn)生的分子機制也不斷地被揭示。本研究中，著重于3個已知的OC轉移相關基因在OC組織中表達的研究，這些調節(jié)因子對于OC的發(fā)生、發(fā)展、轉移、耐藥及預后生存都有著重要的作用，探討他們與OC的關系，對于OC的診斷和治療都具有重要的意義。

本研究分析表明，Snai1、Twist1和SIP1在OC患者中存在明顯的高表達，這些基因的表達異常與OC患者的生存及預后有著密切的關系，這與以往的一些研究結果相一致?；诖耍P者又對耐藥性標本進行分析，發(fā)現(xiàn)部分OC轉移相關基因在耐藥性OC患者中也表現(xiàn)出明顯的異常表達，該結果證明多因子調控的腫瘤轉移過程，不僅對于OC的發(fā)生、發(fā)展有重要的促進作用，而且對于OC的耐藥性也具有一定的作用。

最后，通過對OC轉移相關基因在OC患者中的相關性分析表明，OC轉移相關基因的異常表達之間存在明顯的相關性，某些促進OC轉移的調節(jié)因子會抑制某些促凋亡因子的表達，同時促進某些促增殖因子的表達。隨后，筆者分析了OC轉移相關基因的異常表達對OC患者預后生存的影響。單一變量分析顯示，Snai1、Twist1和SIP1的高表達降低了OC患者的總生存期，同時促進了OC患者治療后疾病的復發(fā)。盡管沒有研究表明Twist與OC患者預后相關，但是Twist作為一個重要的細胞內轉錄因子，通過轉錄抑制E-cadherin的表達，使得E-cadherin所介導的細胞間連接缺失，促進細胞運動轉移。本研究分析結果同樣也與這一結論相一致，包括Twist在內的部分OC轉移相關基因對于OC的轉移和惡化都存在促進作用。最終，筆者提出部分OC轉移相關基因的高表達會導致OC患者總生存期降低，同時也會使得患者的無復發(fā)生存期降低。

綜上所述，本研究評估了多種參與腫瘤轉移的基因在OC惡化、復發(fā)及耐藥性產(chǎn)生中的可能作用，同時也在一定程度上揭示了多因子調控的腫瘤轉移過程與OC患者的預后生存等存在著密切的聯(lián)系。這將為OC相關標志物的選擇和OC患者的診斷治療提供一定理論基礎。

[1]SIEGEL R L,MILLER K D,JEMAL A.Cancer statistics,2015[J].CA Cancer J Clin,2015,65(1):5-29.

[2]AGHAJANIAN C,GOFF B,NYCUM L R,et al.Final overall survival and safety analysis of OCEANS,a phase 3 trial of chemotherapy with or without bevacizumab inpatients with platinumsensitive recurrent ovarian cancer[J].Gynecol Oncol,2015,139(1):10-16.

[3]PUJADE-LAURAINE E,HILPERT F,WEBER B,et al.Bevacizumab combined with chemotherapy for platinum-resistant recurrent ovarian cancer:the AURELIA open-label randomized phase Ⅲ trial[J].J Clin Oncol,2014,32(13):1302-1308.

[4]STOCKLER M R,HILPERT F,FRIEDLANDER M,et al.Patient-reported outcome results from the open-labelphase Ⅲ AURELIA trial evaluating bevacizumab-containing therapy for platinumresistant ovarian cancer[J].J Clin Oncol,2014,32(13):1309-1316.

[5]MONK B J,POVEDA A,VERGOTE I,et al.Anti-angiopoietin therapy with trebananib for recurrent ovarian cancer(TRINOVA-1):a randomised,multicentre,double-blind,placebo-controlled phase 3 trial[J].Lancet Oncol,2014,15(8):799-808.

[6]盧丹，王志學，陶小壓.卵巢癌組織中多藥耐藥基因蛋白表達及其臨床價值[J].腫瘤防治雜志，2004，11(5) :512-514.

[7]DU BOIS A,FLOQUET A,KIM J W,et al.Incorporation of pazopanib in maintenance therapy of ovarian cancer[J].J Clin Oncol,2014,32(30):3374-3382.

[8]LEDERMANN J A,CANEVARI S,THIGPEN T.Targeting the folate receptor:diagnostic and therapeutic approaches to personalizecancer treatments[J].Ann Oncol,2015,26(10):2034-2043.

[9]GONEN N Y,ASSARAF G.Antifolates in cancer therapy:structure,activity and mechanisms of drug resistance[J].Drug Resistance Updates,2012,15(4):183-210.

[10]劉國艷,王城,于小華,等.耐藥相關蛋白與卵巢惡性腫瘤[J].國外醫(yī)學婦產(chǎn)科學分冊,2000,279(8):230-234.

[11]NAUMANN R W,COLEMAN R L,BURGER R A,et al.Precedent:a randomized phase Ⅱ trial comparing vintafolide(EC145) and pegylated liposomal doxorubicin(PLD) in combination versus PLD alone in patients with platinum-resistantovarian cancer[J].J Clin Oncol,2013,31(35):4400-4406.

[12]NETWORK T C.Integrated genomic analyses of ovarian carcinoma[J].Nature,2011,474(7353):609-615.

[13]劉丙立，李子榮，孫偉,等．酒精性股骨頭壞死與亞甲基四氫葉酸還原酶677C/T單核苷酸多態(tài)性的關系[J]．中國修復重建外科雜志，2009,23(9)：1079-1108.

[14]VISVADER J E， LINDEMAN G J.Cancer stem cells in solid tumours:accumulating evidence and unresolved questions[J].Nat Rev Cancer,2008,8(10):755-768.

[15]IWATSUKI M,MIMORI K,YOKOBORI T,et al.Epithelial-mesenchymal transition in cancer development and its clinical signifi cance[J].Cancer Sci,2010,101(2):293-299.