李明遠(yuǎn) 陳東亮 李雪梅 王玲玲 黃叢林

2016年10月6日，我和實(shí)驗(yàn)室的幾位同事去北京順義的花卉基地。辦完事兒之后就到毗鄰的一個(gè)花木公司的切花菊溫室參觀，想欣賞一下他們的切花菊。

他們的切花菊溫室是連棟玻璃溫室，看上去又高又大，面積大約有0.5 hm2。自從建成一直在種植切花菊。而且是一茬接著一茬，即在同一個(gè)時(shí)間里可以見(jiàn)到扦插在穴盤(pán)里的菊花苗、剛剛栽在土里的菊花植株、尚未現(xiàn)蕾的菊花、已經(jīng)開(kāi)放的花朵、收獲完的殘株以及尚未定植的白地，周年不斷。這樣種植已經(jīng)有五六年了。

公司管銷(xiāo)售的孫師傅，陪我在里面轉(zhuǎn)了轉(zhuǎn)?？瓷先?，切花菊長(zhǎng)的似乎很好，已經(jīng)收獲的幾個(gè)品種擺放在過(guò)道里，搭配在一起，十分美麗。我問(wèn)孫師傅這里的切花菊是不是也有病蟲(chóng)害？他說(shuō)：“哪能沒(méi)有？而且十分嚴(yán)重，常見(jiàn)的害蟲(chóng)有薊馬、葉螨，病害的癥狀有爛頭和死苗。今年夏天死苗就很?chē)?yán)重，有的品種加在一起死苗能有1/3?！薄?/p>

聽(tīng)說(shuō)還有病蟲(chóng)害，我很感興趣，就問(wèn)他是什么病、怎么防治的、效果如何？他說(shuō)：“用藥噴過(guò)，也用藥灌過(guò)，但是最后拔掉的也不少。因?yàn)橛玫乃幱泻脦追N，得問(wèn)我們這里的技師?！?/p>

我又問(wèn)他現(xiàn)在是否還可以見(jiàn)到死苗？他說(shuō)還能找到一棵半棵。說(shuō)著便走進(jìn)地里幫我尋找。還不錯(cuò)，沒(méi)有花太長(zhǎng)時(shí)間就找到2棵葉片萎蔫的植株。我拔下了這2棵病株，看到病株的根及根頸部變黑，和此前見(jiàn)到的菊花立枯病十分相似，我就說(shuō)有可能是立枯病。

看完死苗，孫師傅說(shuō)：“還有一種‘爛頭病，不知道是什么?。磕o看看”。說(shuō)著他便領(lǐng)我到一塊品種名為‘斯翠薩（Stressa）的小區(qū)。這個(gè)小區(qū)的植株長(zhǎng)得不大整齊，仔細(xì)看可以發(fā)現(xiàn)有些矮化植株（圖1）頂部下垂、葉片萎蔫；還有的病株葉片正常，而在莖的上部出現(xiàn)一段褐色水浸狀的病斑，嚴(yán)重的還可使莖腐爛、凹陷，引起上端嫩莖折倒（圖2）。這時(shí)孫師傅對(duì)我說(shuō)：“這就是我說(shuō)的‘爛頭病”。我發(fā)現(xiàn)在這個(gè)品種中病株很多。一般每株僅有一處腐爛，個(gè)別的在其上端還有一處腐爛。也有些植株并不折倒，僅在莖部出現(xiàn)一些褐色的條斑。還發(fā)現(xiàn)病原也可以侵染葉片，形成邊緣不明顯的暗褐色的葉斑，葉斑多自邊緣向內(nèi)發(fā)展，嚴(yán)重時(shí)會(huì)使整個(gè)葉片枯死（圖3），特別是發(fā)生在植株的頂端時(shí)，會(huì)引起頂部一些葉片萎縮、枯死（圖4）。因?yàn)楦癄€是細(xì)菌常見(jiàn)的癥狀。我猜測(cè)可能是一種細(xì)菌性病害，因?yàn)槲乙彩堑谝淮我?jiàn)到，沒(méi)有看到病原，不敢亂說(shuō)，只說(shuō)可能是一種傳染性病害，具體是什么病也不清楚。我請(qǐng)他幫我采集了一些病枝，又從不同的角度拍了些照片就離開(kāi)了玻璃溫室。

回到實(shí)驗(yàn)室我對(duì)病莖進(jìn)行了保濕，因?yàn)椴≈陮?duì)高濕毫無(wú)反應(yīng)，就開(kāi)始進(jìn)行組織分離。按習(xí)慣，分離時(shí)還在使用的PDA培養(yǎng)基中加了乳酸。做完后在25℃下放了2天，什么也沒(méi)長(zhǎng)。我后悔加了乳酸，因?yàn)槿樗釙?huì)抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，如果是細(xì)菌病害，有可能分離不出來(lái)病原。但是第3天，發(fā)現(xiàn)有幾個(gè)組織塊長(zhǎng)出了細(xì)菌，菌落邊緣不整齊，但是很純，做的5皿菌落的形態(tài)都基本相同。很像是以前我見(jiàn)到的歐氏桿菌（Erwinia sp.）。根據(jù)所見(jiàn)又去查資料，首先查閱的是韓金聲編著的《花卉病害防治》[1]，根據(jù)此書(shū)的介紹，此病最明顯的癥狀是莖上部腐爛，導(dǎo)致末梢枯萎和死亡，剖開(kāi)病部，可發(fā)現(xiàn)病梢基部變?yōu)楹稚蚝谏?，病害偶爾出現(xiàn)葉緣枯焦的癥狀，和我所見(jiàn)完全一樣。所以我認(rèn)為所謂的“爛頭病”就是菊花細(xì)菌性枯萎?。‥rwinia crysanthemi）。后來(lái)又在方中達(dá)主編的《中國(guó)農(nóng)業(yè)植物病害》[2]上查到了對(duì)菊花細(xì)菌性枯萎病的癥狀描述，也和我們這里所見(jiàn)比較吻合。

但是要肯定它是病原菌，必須通過(guò)侵染性試驗(yàn)驗(yàn)證。為此我便采用離體葉片法在無(wú)菌條件下將含有菌液的脫脂棉貼在葉片的傷口上。放在有光的定溫箱中讓它發(fā)病。1周過(guò)去，沒(méi)有反應(yīng)。又過(guò)了1周，接種和對(duì)照葉都腐爛了，說(shuō)明回接失敗。即我們得到的分離物不是菊花細(xì)菌性枯萎病。

2017年1月，我又和陳東亮博士去了一趟這個(gè)花木公司的溫室，想知道前幾次見(jiàn)到的菊花“爛頭病”在冬季是否還在發(fā)展。一進(jìn)門(mén)遇到主管這片菊花的陳經(jīng)理，據(jù)介紹，他們目前正在防治菊花“爛頭病”，采取的措施就是換土。把溫室里已收完花的那部分土地的土壤移走，換上無(wú)病的大田土。再就是對(duì)未換茬的白地，進(jìn)行藥劑處理，使用的農(nóng)藥是包括多菌靈、百菌清、鏈霉素、鋅硫磷在內(nèi)的“四合一”。據(jù)說(shuō)僅換了半個(gè)溫室的土就花了5萬(wàn)元。但是由于處理時(shí)溫室里仍有不少剛定植和現(xiàn)蕾的植株，遺留在溫室里的病株仍然不少。

交談中我們知道陳經(jīng)理并不認(rèn)為他們溫室里發(fā)生的菊花“爛頭病”是由細(xì)菌引起，他們的種苗是從荷蘭購(gòu)入，據(jù)荷蘭專(zhuān)家說(shuō)這里發(fā)生的有可能是由薊馬傳播的番茄斑萎?。═SWV），換土是為了給菊花創(chuàng)造一個(gè)無(wú)病蟲(chóng)的環(huán)境。

但是，當(dāng)時(shí)我們并沒(méi)有將荷蘭專(zhuān)家的看法當(dāng)回事兒，因?yàn)樵诜焉系姆寻呶《疚乙?jiàn)到過(guò)，沒(méi)有出現(xiàn)爛頭的這種癥狀，仍認(rèn)為目前這里發(fā)生的更像是一種細(xì)菌病害。為了證明我們的看法，就又采集了一些病株回來(lái)，做了1次分離和回接。這次分離病菌使用的方法和上次不同的是不加乳酸。經(jīng)過(guò)在PDA平板上劃線(xiàn)，得到了8個(gè)單菌落。從菌落的形態(tài)上看，與上次不同，多為乳白色，有光澤，邊緣比較整齊。然后將其再次接種到菊花上。接種的方法有3種，其一是將病菌用噴接法接種在酈邑貢菊的一種茶菊上（每株剪掉2個(gè)葉片造成傷口，接種40 h放回溫室養(yǎng)護(hù)）。與此同時(shí)，我們還在酈邑貢菊上使用針刺法（在葉基針刺后，用消毒脫脂棉蘸菌液敷在傷口上面，保濕40 h）接種了一些苗子，還用酈邑貢菊離體莖、葉（在消毒培養(yǎng)皿中疊放3片消毒濾紙，將潔凈的莖、葉放入，針刺后用消毒脫脂棉蘸菌液敷在上面保濕）在消毒培養(yǎng)皿里進(jìn)行接種。到第7天，我發(fā)現(xiàn)接種4號(hào)細(xì)菌的植株有2片葉子發(fā)病，而且葉片附近的莖變黑（圖5）。我當(dāng)時(shí)十分高興，以為通過(guò)一番努力終于有了結(jié)果。但是，我們將發(fā)病的植株放在人工氣候箱里，將溫度設(shè)定為18、28℃各12 h，

每天光照12 h，濕度80%繼續(xù)處理3周后，發(fā)現(xiàn)病害沒(méi)有發(fā)展，此時(shí)變黃的那個(gè)葉片已枯死，而變黑的莖卻返綠。更令人驚訝的是在病葉處卻長(zhǎng)出了一個(gè)新枝，說(shuō)明植株又變好了。

此外，在這段時(shí)間，陳東亮博士等還對(duì)病菌進(jìn)行了PCR檢測(cè)，得知我們分離到的病菌有2種，除第9號(hào)為芽孢桿菌外，多數(shù)為假單胞桿菌。同時(shí)，從文獻(xiàn)上還看到有一篇報(bào)道[3]，說(shuō)菊花可發(fā)生一種由Pseudomonas cichorii引起的菊花細(xì)菌病害，和我們田間見(jiàn)到的病害有些相似。但是，由于回接沒(méi)有成功，這個(gè)病害仍不能得到確認(rèn)。為了明確這種病害的病原，我們課題組除了做了許多工作外，又請(qǐng)了2位專(zhuān)門(mén)研究細(xì)菌的朋友幫我分離鑒定，但是2個(gè)月過(guò)去了，仍無(wú)進(jìn)展。

2017年3月，我們第4次來(lái)到發(fā)病現(xiàn)場(chǎng)，發(fā)現(xiàn)隨著天氣的轉(zhuǎn)暖，溫室里薊馬的數(shù)量有所增多。同時(shí)進(jìn)入花期的切花菊的“爛頭病”也有些加重。多數(shù)品種的癥狀和以前看到的相同，仍是爛頭。但是有一種開(kāi)粉色花的品種病害的表現(xiàn)是花葉型癥狀，而且在莖上也有黑色的條斑，這倒像是一種病毒病（圖6）。還發(fā)現(xiàn)一些病株雖然病變集中在植株的上部，形成所謂的爛頭，但是在莖的一側(cè)自下而上會(huì)斷續(xù)的出現(xiàn)黑褐色線(xiàn)狀的條斑，這種條斑并不傷及皮下的髓部，和番茄的條斑病毒（ToMV）有些相像（圖7）。而且還發(fā)現(xiàn)了有些矮化病株花色異常，正常的花應(yīng)當(dāng)是紫紅色，但是這種病花部分的花瓣顏色變淺、變黃（圖8）；還有的菊花瓣扭曲，瓣數(shù)變少（圖9），越來(lái)越多的癥狀表現(xiàn)都說(shuō)明這里發(fā)生的很像是由病毒引起的病害，我們對(duì)這個(gè)病害的認(rèn)識(shí)發(fā)生了改變。

為了搞清楚這個(gè)問(wèn)題，我們將“爛頭病”和田間見(jiàn)到的花葉型的病株一起使用PCR的方法進(jìn)行了檢測(cè)[4]。還根據(jù)文獻(xiàn)，使用摩擦接種病毒的方法，對(duì)采到的病樣做了侵染試驗(yàn)[5]。即將田間采到的病樣，使用0.01M的磷酸緩沖液+0.1%亞硫酸鈉（pH=7.2）研碎后，加上500目的金剛砂，接種在健康的菊花上。

使用PCR方法測(cè)得的結(jié)果說(shuō)明這里發(fā)生的是番茄斑萎病毒[Tomato spotted wilt virus（TSWV）]。而且使用摩擦接種處理的植株在3周后，除接種葉枯死，莖部還出現(xiàn)了壞死斑。表現(xiàn)出和“爛頭病”類(lèi)似的癥狀（圖10）證明了它具有侵染性。

就在此時(shí)，我們從文獻(xiàn)上看到一篇關(guān)于番茄斑萎病毒的報(bào)道[4]。文章說(shuō)：“菊花感染了斑萎病毒的癥狀表現(xiàn)確實(shí)有2個(gè)類(lèi)型，即黃化斑駁和葉脈的損傷。這些癥狀在晚期引起芽和上部葉片的凋萎。此外在一些品種上（如SIMMA）可以出現(xiàn)褪綠和壞死斑，在部分植株上還會(huì)出現(xiàn)枯萎及莖部壞死”。和我們這里見(jiàn)到的一樣。也證明了所謂的菊花“爛頭病”有可能是由番茄斑萎病毒（TSWV）引起。

此后，陳東亮博士等對(duì)該病作了深入的研究，補(bǔ)充了相關(guān)的試驗(yàn)，將其發(fā)表在《Plant disease》雜志上[6]。

通過(guò)這次對(duì)菊花番茄斑萎病毒的鑒定，我更加堅(jiān)定的認(rèn)為，鑒定一個(gè)未知的植物病害，一定要用病原說(shuō)話(huà)，僅用癥狀來(lái)識(shí)別病害并不可靠。

關(guān)于菊花的番茄斑萎病毒的防治，最為重要的是做好植物檢疫工作。目前有一些菊花的生產(chǎn)企業(yè)不經(jīng)檢疫，直接從國(guó)外進(jìn)口菊花插穗扦插繁殖，十分危險(xiǎn)。這些進(jìn)口種苗往往是轉(zhuǎn)口培育的。例如供應(yīng)商是荷蘭，實(shí)際上插穗來(lái)自生產(chǎn)條件較差的非洲某個(gè)國(guó)家，帶毒機(jī)率較高。經(jīng)過(guò)本地薊馬的傳播，很快就會(huì)蔓延開(kāi)來(lái)，造成很大損失。因此，必須有一套嚴(yán)格的檢疫辦法，防患于未然。

一旦發(fā)生了該病，目前看比較現(xiàn)實(shí)的方法就是殺滅傳毒介體薊馬。北京地區(qū)菊花上發(fā)生的薊馬主要是西花薊馬[Frankliniella occidentalis（Pergande）]，而西花薊馬很易產(chǎn)生抗藥性。在防治時(shí)應(yīng)當(dāng)幾種不同類(lèi)型的殺蟲(chóng)劑輪換使用。例如目前不少人使用6%乙基多殺菌素（艾綠士）懸浮劑20 mL/667 m2防治薊馬，這是個(gè)不錯(cuò)的選擇。但是連用3次以后，防治效果會(huì)明顯下降。必須多準(zhǔn)備幾種對(duì)薊馬有效的殺蟲(chóng)劑與它輪換。例如25%噻蟲(chóng)嗪水分散粒劑1500倍、10%蟲(chóng)螨腈懸浮劑2000倍液、10%吡蟲(chóng)啉可濕性粉劑1000倍液、5%啶蟲(chóng)脒可濕性粉劑1500倍液等輪換使用，才可取得持久的效果。

使用藍(lán)色黏蟲(chóng)板也是防治薊馬的一種選擇。但是最好能將藍(lán)色黏蟲(chóng)板和藥劑防治結(jié)合起來(lái)使用，在化學(xué)農(nóng)藥殺死大部分薊馬后用藍(lán)板來(lái)殺滅殘余的薊馬。

夏季換茬的時(shí)候利用高溫消滅田間殘存的薊馬，也是防治薊馬不可少的一項(xiàng)措施。即在菊花定植前將棚里的土壤旋耕1次，徹底的清除田間雜草，使用高溫悶棚的方法處理完畢，1周后再定植。特別是在連棟玻璃溫室里，往往一茬接著一茬種植，應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)臅r(shí)機(jī)，對(duì)整棚土壤同時(shí)處理。

實(shí)際上不同品種的菊花對(duì)番茄斑萎病毒的抗病性差異十分明顯，利用抗病品種防治病害應(yīng)當(dāng)是不錯(cuò)的選擇。但是考慮到目前的品種多不抗病，而花朵的多樣性是菊花觀賞性的基本要求。因此，僅種植少數(shù)抗病品種來(lái)應(yīng)對(duì)病害，會(huì)影響賣(mài)相，目前在實(shí)踐中并不可行。

參考文獻(xiàn)

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[4] Chung B N， Pak H S， Jung J A， et al. Occurrence of Tomato spotted wilt virus in Chrysanthemum （Dendranthema grandiflorun） in Korea[J]. The Plant Pathology Journal， 2006，22（3）：230-234.

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[6] Chen D L， Zhang L， Hua L， et al. First Report of Chrysanthemum Stem Blight and Dieback Caused by Tomato spotted wilt virus in China[J].Plant Disease， https：//doi.org/10.1094/PDIS-07-17-1088-PDN.