(華東理工大學化學與分子工程學院 分析測試中心，上海 200237)

米卡芬凈鈉是一種新型水溶性半合成脂肽類化合物，是繼卡泊芬凈之后美國FDA批準的第2種棘白菌素類抗真菌藥物[1]，能夠非競爭性抑制1,3-?-D葡萄糖合成酶的活性從而抑制真菌細胞壁的合成[2]。它對深部真菌感染的主要致病真菌曲霉菌屬和念珠菌屬有廣譜抗真菌活性[3]，因此對真菌細胞有較高的特異性[4]，因而對人體正常細胞影響不大[5,6]，相比于比傳統(tǒng)兩性霉素 B、伏立康唑、伊曲康唑等有較少的副作用。

鹽酸羥胺是一種重要的工業(yè)有機化合物，常常作為藥物的中間體或原料[7,8]，也是合成米卡芬凈鈉的一個重要原料。鹽酸羥胺本身有毒性，對皮膚有刺激性。半數致死量(小鼠經口)408mg/kg，有腐蝕性。因此對米卡芬凈鈉成品中鹽酸羥胺的殘留需要嚴格控制。

鹽酸羥胺的常用檢測方法有滴定法[9]、分光光度計法[10-12]、光譜法[13,14]等，上述方法操作繁瑣、靈敏度低、重復性差。鹽酸羥胺也可以衍生后用液相色譜和氣相色譜分析[15，16]，但操作要求高。作為有機陽離子，也可以直接用離子色譜電導檢測器檢測，但靈敏度無法滿足藥物殘留的分析，且易受干擾。根據鹽酸羥胺的特性，采用離子色譜陽離子分離，柱后補堿，用脈沖安培檢測，則靈敏度比電導法提高幾個數量級，干擾少，特異性好。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Dionex ICS5000雙系統(tǒng)多功能離子色譜儀(含AS-DP自動進樣器，DC模塊(脈沖安培檢測器)，DP-5雙泵)、Dionex IonPac CG16保護柱(4*50mm)、Dionex IonPac CS16分析柱(4*250mm)；Chromeleon6.8色譜工作站(Thermo Fisher Scientific，美國)；甲基磺酸(99.5%)；阿拉??；鹽酸羥胺對照品(98.5%)；北京百靈威科技有限公司；氫氧化鈉溶液(50%)，Merck。

1.2 溶液的配制

1.2.1 淋洗液、衍生液的配制

準確量取5.2 mL甲磺酸，加水稀釋至4000 mL，搖勻，即得30mmol/L甲磺酸溶液淋洗液；精密量取50%氫氧化鈉溶液80 mL，加水稀釋至2000 mL，搖勻，即得500mmol/L氫氧化鈉衍生液。

1.2.2 對照品儲備液的配制

精密稱取鹽酸羥胺對照品25.36mg，置100mL容量瓶中，加淋洗液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置200 mL容量瓶中，用淋洗液稀釋至刻度，搖勻，作為鹽酸羥胺對照品儲備溶液(1.25μg/ mL)。

1.2.3 標準溶液的配制

精密量取鹽酸羥胺對照品儲備溶液3 、1 、1 、3 、2 mL，于100 、20 、10 、20 、10 mL容量瓶中，用淋洗液稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，配成0.0375、0.0625、0.1250、0.1875、0.2500 μg/mL系列標準溶液。

1.2.4 供試品溶液的配制

精密稱取供試品約250mg，置10mL容量瓶中，加淋洗液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

1.3 色譜條件

分析柱：Dionex IonPac CS16 (4*250mm)；保護柱：Dionex IonPac CG16 (4*50mm)；淋洗液：30mmol/L 甲磺酸溶液；稀釋劑：同淋洗液；柱后衍生液：500mmol/L 氫氧化鈉；進樣量：25μL；柱溫：30℃；淋洗液流速：1.0mL/min，衍生液流速：0.3mL/min，檢測器：安培檢測器，脈沖安培(糖四電位波形)，金電極，Ag/AgCl參比電極。

2 結果與討論

2.1 實驗原理

鹽酸羥胺屬于有機陽離子，在強堿性條件下，采用糖的電位有很高的靈敏度，但是有機陽離子的分離，只能采用陽離子模式，因此，采用陽離子分離，柱后補堿方式，同時解決了分離和靈敏度的問題，鹽酸羥胺只在酸性條件下穩(wěn)定，中性和堿性不穩(wěn)定，因此鹽酸羥胺樣品應在酸性溶液條件下保存。

2.2 專屬性

在同一色譜條件下，對空白溶液、對照儲備液、供試品溶液進樣，所得色譜圖如圖1。由圖1可知空白溶液的色譜圖在鹽酸羥胺峰位置處，并無干擾峰，故淋洗液不干擾供試品的檢測。

圖1 空白、對照儲備液、供試品色譜圖

2.3 線性關系

用1.2.3配置的溶液，連續(xù)進樣，得到線性關系Y=6.4773x-0.0236。相關系數r2為0.9999，Y截距絕對值0.0236<0.7936×20%(100%點峰面積的20%)，符合要求，說明在0.0125μg/mL～0.25μg/mL范圍內，線性良好。

2.4 檢出限和定量限

取0.0375μg/mL作為定量限溶液，并且連續(xù)進樣6次；精密量取對照品儲備液1mL，置于100mL容量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為檢出限溶液。以信噪比分別為3和10 計算，得到鹽酸羥胺檢出限及定量限見表1 。

表1 檢出限和定量限的結果

2.5 回收率

精密稱取約250mg的供試品于10mL的容量瓶中，再加入一定量的對照溶液，定容，配置成回收率溶液。按上述條件連續(xù)進樣，所得結果見表2。由表2可知鹽酸羥胺的回收率為97.5%，在80.0%～120.0%之間；RSD為2.8%，小于10.0%，說明本方法的準確度較好。

表2 回收率測定結果

2.6 進樣精密度

取回收率項下對照品溶液作為進樣精密度溶液，連續(xù)進樣6針，得到鹽酸羥胺含量的平均值為0.0005%，RSD為2.1%(n=6)，說明進樣精密度較好。

2.7 溶液穩(wěn)定性

將專屬項下對照品溶液在室溫下放置0h、12h、20h、24h再檢測。精密精密稱取供試品(No161201)251.5mg，置10mL量瓶中，精密量取鹽酸羥胺對照品儲備溶液1mL上述量瓶中，用淋洗液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液穩(wěn)定性溶液，于室溫放置，在0h、12h、20h、24h檢測定。其結果如表3，從表3可以看出，在室溫下放置不同時間后，無論是對照品溶液還是供試品溶液，峰面積變化非常小，因此溶液穩(wěn)定性良好。

表3 溶液穩(wěn)定性結果

2.7 樣品測定

精密稱取批號No161201、No161202、 No161203分別為 249.8mg、248.5mg、251.2mg，置于10mL容量瓶中，加淋洗液溶解并稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件，連續(xù)進樣。從表4中可看出，3批樣品中均為檢測出鹽酸羥胺，說明米卡芬凈鈉中未含有殘留的鹽酸羥胺。

表4 樣品中鹽酸羥胺的含量

3 結論

上述實驗結果表明，通過離子色譜柱后補液-脈沖安培法能準確地分析米卡芬凈鈉中殘的痕量鹽酸羥胺的含量，而且此方法靈敏度高、穩(wěn)定性好、重復性滿足實驗要求。

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