陳小美 梁建嫦

廣東省云浮市衛(wèi)生學(xué)校，廣東云浮 527300

血小板計數(shù)在各種出血性與血栓性疾病診斷中具有重要意義，是一項重要的血液常規(guī)檢查，目前已逐漸應(yīng)用于臨床診斷疾病。乙肝、肝硬化均為我國高發(fā)疾病，防治任務(wù)艱巨，由于肝病患者肝臟功能明顯受損，無法發(fā)揮合成與清除功能，常出現(xiàn)PLT異常[1]。因此，加強(qiáng)PLT含量的檢測，提高計數(shù)真確性，對早期發(fā)現(xiàn)疾病，評估疾病進(jìn)展顯得尤為重要。近年來血細(xì)胞分析儀器隨著科技的進(jìn)步而得到快速發(fā)展，并因其檢測準(zhǔn)確、快速、可重復(fù)性等優(yōu)點而廣泛應(yīng)用于臨床實驗室[2]，其檢測的血液標(biāo)本抗凝劑選用EDTA-K2，但EDTA-K2可引起PLT凝集，從而造成PLT假性減少現(xiàn)象，加之PLT聚集與部分紅細(xì)胞體積較小等因素的干擾，導(dǎo)致PLT計數(shù)存在一定缺陷[3]。故本研究探討手工顯微鏡計數(shù)法復(fù)核血細(xì)胞分析儀計數(shù)在PLT計數(shù)中的應(yīng)用價值?，F(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1　一般資料

選取我院2017年1～8月住院患者血液標(biāo)本548份，所有標(biāo)本PLT計數(shù)均經(jīng)血液細(xì)胞分析儀檢測不足50×109/L，且根據(jù)PLT計數(shù)范圍548份標(biāo)本分為兩組，A組：PLT計數(shù)（20～50）×109/L，B組：PLT計數(shù)＜20×109/L。所有患者均知曉并同意參與本研究，自愿簽署知情同意書，獲我院倫理委員會審核通過。

1.2　方法

儀器與試劑：采用貝克曼庫爾特Act5diffal5分類全自動分析儀與配套試劑、EDTA-K2真空管、稀釋液中EDTA-K2含量0.2g/L、全血質(zhì)控物。血液標(biāo)本取自患者晨起空腹靜脈血，約3mL，經(jīng)EDTAK2抗凝測定PLT計數(shù)，混勻至標(biāo)本無血凝塊或溶血，但避免應(yīng)用振搖器。顯微鏡PLT計數(shù)稀釋液為草酸銨，嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行檢測，采用細(xì)滴管吸取1滴懸液至計數(shù)池內(nèi)，注意避免外溢或有氣泡。水平靜置20min后，借助高倍鏡手工計數(shù)PLT數(shù)。血涂片法：取干凈載片做血液標(biāo)本推片，將其晾干后，采用瑞士染色，閱片。

1.3　觀察指標(biāo)

不同計數(shù)方法PLT計數(shù)結(jié)果，PLT假性減少標(biāo)準(zhǔn)：PLT＜50×109/L，無黏膜或淺表皮膚出血。染色后經(jīng)油鏡下閱片顯示，PLT聚集成堆。

1.4　統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1　不同PLT計數(shù)方式結(jié)果比較

經(jīng)計數(shù)發(fā)現(xiàn)，10例為PLT假性減少，其余538例可分為A組（350例）與B組（188例）兩組。A組顯微鏡計數(shù)、血涂片計數(shù)及儀器計數(shù)結(jié)果與B組三種計數(shù)結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.951、1.181、0.826，P＞0.05）；而在B組計數(shù)中，顯微鏡計數(shù)與血涂片計數(shù)均明顯多于儀器計數(shù)（t=10.005、11.788，P＜0.05），血涂片與顯微鏡計數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.694，P＞0.05）。見表1。

表1　不同PLT計數(shù)方式結(jié)果比較（x ± s ，×109/L）

2.2　PLT假性減少標(biāo)本計數(shù)結(jié)果

儀器計數(shù)結(jié)果為（15.86±5.29）×109/L，顯微鏡計數(shù)結(jié)果為（190.51±28.76）×109/L，顯微鏡計數(shù)PLT明顯多于儀器計數(shù)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=18.887，P＜ 0.05）。

3　討論

PLT是一種具有生理活性及酶的無核細(xì)胞，產(chǎn)生于巨核細(xì)胞脫落顆粒，具有生理性止血功能，常作為凝血與止血障礙的重要指標(biāo)。PLT由骨髓釋放至外周血，可經(jīng)歷5～7d的半衰期，其凝血功能與分布寬度、平均體積呈正相關(guān)，PLT曲線平滑度可有效判斷標(biāo)本凝結(jié)與否，曲線終點位置可對骨髓造血功能進(jìn)行判斷[4]。目前，我國衛(wèi)生部門規(guī)定流式細(xì)胞術(shù)檢測由單克隆抗體標(biāo)記的全血PLT與紅細(xì)胞比值為PLT計數(shù)方法，但其操作過于繁瑣，且價格高昂，不利于臨床廣泛應(yīng)用[5]。因此，積極選取簡單精確的PLT計數(shù)方法稱為臨床關(guān)注的焦點之一。

近年來，國內(nèi)血液檢驗學(xué)界對國際血液學(xué)組織建議采用顯微鏡復(fù)檢的標(biāo)準(zhǔn)給予了密切關(guān)注，其內(nèi)容主要包括：復(fù)查標(biāo)本、復(fù)核儀器報告、人工分類涂片、確認(rèn)標(biāo)本，檢查儀器運行狀態(tài)[6]，血細(xì)胞分析儀對PLT進(jìn)行計數(shù)雖可有效縮短計數(shù)時間，實現(xiàn)簡單、快速計數(shù)PLT的目的，其具有可重復(fù)性等優(yōu)點，同時可減輕醫(yī)務(wù)人員工作強(qiáng)度，便于批量檢測。但臨床實際檢測過程中受諸多因素影響常常發(fā)生PLT假性減低等現(xiàn)象，且PLT凝集常被計數(shù)為白細(xì)胞，進(jìn)而導(dǎo)致白細(xì)胞假性增多[7-8]。兩者均可在一定程度上造成醫(yī)療隱患，指導(dǎo)錯誤治療，一旦引發(fā)醫(yī)療事故，后果不堪設(shè)想。基于此情況，本研究采用顯微鏡計數(shù)法對血細(xì)胞分析儀計數(shù)PLT進(jìn)行復(fù)核。研究結(jié)果顯示，PLT＞20×109/L時，顯微鏡計數(shù)、儀器計數(shù)及血涂片計數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但PLT＜20×109/L時，顯微鏡計數(shù)可達(dá)到與血涂片計數(shù)法相近的結(jié)果，同時PLT計數(shù)明顯高于儀器計數(shù)法，提示儀器計數(shù)法可信度不足，應(yīng)采用顯微鏡計數(shù)復(fù)核，確保計數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確度。同時顯示血涂片法亦具有一定的優(yōu)點：能夠?qū)LT形態(tài)進(jìn)行準(zhǔn)確的識別，將可疑物質(zhì)如雜物、細(xì)胞碎片等排除，避免對PLT計數(shù)造成影響，有助于降低PLT計數(shù)假性降低，且能夠減少異常PLT漏檢事件的發(fā)生。而自動血細(xì)胞分析儀計數(shù)PLT的原理在于散射光、電阻抗法與熒光法結(jié)合進(jìn)行PLT計數(shù)，通過低頻電流對PLT體積進(jìn)行準(zhǔn)確分析，繪制PLT直方圖，從而對PLT進(jìn)行計數(shù)[9]。該測定原理的局限為：干擾PLT計數(shù)的因素較多，尤其是血小板、大血小板聚集、紅細(xì)胞碎片、小紅細(xì)胞等，影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性[10-11]。手工計數(shù)檢測結(jié)果相對準(zhǔn)確則是由于其干擾因素較少，應(yīng)用草酸銨稀釋液可增強(qiáng)紅細(xì)胞破壞能力，清晰辨認(rèn)PLT形態(tài)。在該法應(yīng)用過程中值得注意的是：（1）稀釋液配成后需經(jīng)有效過濾方可應(yīng)用，避免造成細(xì)菌與微粒感染。（2）保持吸管與試管干凈清潔，以防交叉污染。（3）采血時注意針刺稍深，快速完成操作，以免PLT聚集，引起PLT假性降低。（4）檢測應(yīng)在標(biāo)本采集1h之內(nèi)完成，防止擱置時間過長對檢測結(jié)果造成影響。（5）充入計數(shù)池后，靜置10～ 15min左右，保持適當(dāng)?shù)墓饩€，注意區(qū)別灰塵、雜志及折光性PLT。另本研究發(fā)現(xiàn)，PLT假性減少10例，雖發(fā)生率較低，但易對臨床診斷造成明顯影響，如誤診，進(jìn)而貽誤病情、造成患者經(jīng)濟(jì)損傷，引發(fā)醫(yī)療糾紛。PLT假性減少10例血液標(biāo)本中，經(jīng)手工顯微鏡下計數(shù)證實PLT均處于正常范圍，而出現(xiàn)假性的原因多由EDTA-K2抗凝劑引起PLT聚集成堆所致[12-13]。PLT計數(shù)波動是臨床工作中常見的問題之一，亦是困擾檢驗醫(yī)師進(jìn)行臨床診斷的重要難題?？紤]其原因為：（1）人為因素，臨床護(hù)理人員等醫(yī)務(wù)人員在標(biāo)本采集時存在操作不規(guī)范現(xiàn)象，未充分混勻抗凝劑與標(biāo)本；或采血過程不暢，造成標(biāo)本凝集，進(jìn)而出現(xiàn)PLT計數(shù)假性降低情況。（2）儀器因素，多數(shù)實驗室應(yīng)用的全自動血液分析儀為電阻抗原理，在同一通道上測量紅細(xì)胞與PLT，導(dǎo)致無法將PLT衛(wèi)星現(xiàn)象、PLT凝集、體外溶血、冷球蛋白對PLT計數(shù)造成的影響排除[14-15]。因此，操作人員在發(fā)現(xiàn)PLT減少或異常報警時，應(yīng)高度懷疑是否存在PLT凝集現(xiàn)象，并采用顯微鏡計數(shù)法進(jìn)行復(fù)核，同時應(yīng)聯(lián)合血涂片染色檢查，以最大限度減少誤診事件的發(fā)生。顯微鏡檢能夠準(zhǔn)確觀察PLT形態(tài)及分布情況，判斷血涂片中PLT數(shù)量，結(jié)合顯微鏡計數(shù)結(jié)果可獲得更加客觀、準(zhǔn)確的PLT計數(shù)結(jié)果，從而為臨床診斷與治療提供科學(xué)合理的依據(jù)。

綜上所述，顯微鏡計數(shù)法復(fù)核血細(xì)胞分析儀計數(shù)PLT的臨床應(yīng)用價值顯著，能夠較好的彌補(bǔ)儀器法的缺陷，有助于早期發(fā)現(xiàn)PLT假性減少，做出準(zhǔn)確診斷，減少誤診，為臨床掌握患者病情進(jìn)展，制定合適的治療方案提供合理參考，從而有助于改善疾病的防治工作，構(gòu)建和諧的醫(yī)患關(guān)系。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 孫育.血液分析儀計數(shù)血小板假性異常及其影響因素分析 [J].醫(yī)學(xué)綜述，2013，19（4）：762-764.

[2] 魏靜，冷姍姍.Sysmex不同型號血細(xì)胞分析儀檢測結(jié)果的比對分析和偏倚評估[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2016，13（10）：1399-1401.

[3] 陳偉，涂慧英，李月.3種血小板計數(shù)方法的比較研究[J].重慶醫(yī)學(xué)，2015（26）：3677-3679.

[4] 胡莉，韋永瓊.不同型號血細(xì)胞分析儀檢測結(jié)果的比對分析 [J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2016，37（12）：1687-1688.

[5] 關(guān)向前，陳發(fā)珍.EDTA依賴性血小板聚集及其對血小板計數(shù)的影響[J].臨床輸血與檢驗，2015，17（3）：239-242.

[6] 張穩(wěn)燕，周開礦，陳穎，等.外周血血涂片估測血小板的方法研究 [J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2016，13（22）：3242-3244.

[7] 王丹，潘莉娟，歐國平，等 .SysmexXT1800i血細(xì)胞分析儀血小板計數(shù)準(zhǔn)確性的研究[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2015，12（19）：2842-2844.

[8] 李彬，王川.不同血小板計數(shù)方法結(jié)果比較及臨床應(yīng)用[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2016，22（16）：1877-1879，1883.

[9] 崔俊林，曹娟.乙二胺四乙酸依賴性假性血小板減少的分析[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2016，37（1）：105-106.

[10] 金芳，龍建成，張春霞.Sysmex XN20 A1全自動血細(xì)胞分析儀性能評價[J].中國醫(yī)學(xué)裝備，2016，13（8）：31-34.

[11] 崔曉陽，馮春顏，朱彩云，等.血液分析儀新型熒光血小板計數(shù)法的基本性能評價[J].中國醫(yī)學(xué)裝備，2016，13（1）：70-74.

[12] 王培昌，鄭宇佳，高世超.血細(xì)胞分析儀未檢出血小板分布寬度的原因分析及該類標(biāo)本血小板計數(shù)準(zhǔn)確性評價 [J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2016，（1）：117-120.

[13] 劉非，梁綺華，姜志勇，等.血小板分布異常原因分析及對血小板計數(shù)的影響[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2014，35（6）：726-728.

[14] 李惠卿，賴馨，蔡潔丹，等.血細(xì)胞分析儀計數(shù)血小板假性減少原因分析及對策探討[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志，2014，14（9）：764-767.

[15] 許文艷，涂云貴，杜巧麗.血小板假性減少的原因分析與對策 [J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2016，37（8）：1157，1161.