朱永毅，李瀟蒙，石 強(qiáng)

（1.貴州省黔南民族職業(yè)技術(shù)學(xué)院,貴州都勻 558000；2.貴州省長順縣農(nóng)村工作局,貴州長順 550700）

目前，肉雞集約化生產(chǎn)面臨各種疾病、感染、應(yīng)激和管理壓力的挑戰(zhàn)，這些都是制約肉雞產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要因素。隨著中國畜牧業(yè)發(fā)展和飼料資源短缺，人們對(duì)食品安全的重視，國家法規(guī)對(duì)抗生素濫用的嚴(yán)格限制，急需尋求新的飼料資源或功能性食品添加劑。銀杏葉富含黃酮、生物堿、多糖、氨基酸和維生素等物質(zhì)，具有多種生物學(xué)功能，其在中國產(chǎn)量大，分布廣，成本低廉，是作為畜禽飼料添加劑選材的很好原料（張瑩，2009）。利用發(fā)酵法處理中草藥是提高其利用價(jià)值的有效手段，中草藥經(jīng)微生物發(fā)酵處理后，不僅原始生物活性得到保留，同時(shí)其活性成分還得到提高（Lin和Chiang，2008）。然而關(guān)于發(fā)酵銀杏葉對(duì)優(yōu)質(zhì)黃羽肉雞的研究報(bào)道并不多，本試驗(yàn)以發(fā)酵銀杏葉粉為材料，考察其對(duì)1～42 d黃羽肉仔雞生長性能、血清生化指標(biāo)及抗氧化性能的影響，為開發(fā)家禽新的飼料資源提供思路。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料 生物發(fā)酵銀杏葉粉購自南京林通生物技術(shù)有限公司，該產(chǎn)品主要以銀杏葉為基質(zhì)，通過接種復(fù)合菌種（谷草芽孢桿菌、酵母菌和黑曲霉）發(fā)酵而成。銀杏葉和發(fā)酵銀杏葉粉主要營養(yǎng)指標(biāo)見表1。

表1　銀杏葉與發(fā)酵銀杏葉主要營養(yǎng)水平 %

1.2試驗(yàn)日糧設(shè)計(jì)與分組 選取健康、體重一致（46.62±1.35）的1 d雌性嶺南黃羽肉仔雞960只，按單因素完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)分為4個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)40只。試驗(yàn)日糧參照NRC（1994）肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)和《中國雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)2004》配制，對(duì)照組飼喂以玉米-豆粕為主的基礎(chǔ)日糧，處理1、處理2和處理3組飼喂在基礎(chǔ)日糧中添加0.2%、0.4%和0.8%的發(fā)酵銀杏葉粉，所加發(fā)酵銀杏葉粉在日糧中所占比例在該日糧玉米添加量中等量扣除?；A(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表2。

表2　基礎(chǔ)日糧組成和營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3飼養(yǎng)管理 肉雞采用分層籠養(yǎng)，1～21 d和22～42 d兩階段飼喂的方法。試驗(yàn)全期雞只自由采食、飲水，環(huán)境條件保持一致，雞舍第一周溫度控制在33～35 ℃，之后每周將溫度降低2 ℃，直至溫度控制在22 ℃。雞只免疫按照商品肉雞常規(guī)免疫程序進(jìn)行。試驗(yàn)期42 d。

1.4測(cè)定指標(biāo)與方法

1.4.1發(fā)酵前后銀杏葉主要營養(yǎng)指標(biāo)的測(cè)定

粗蛋白質(zhì)含量的測(cè)定按照GB6433-86中的方法進(jìn)行測(cè)定；類黃酮含量的測(cè)定參考Verzelloni等（2007）使用的氯化鋁比色法；多糖的測(cè)定使用苯酚-硫酸法（Dubois，1956）；樣品經(jīng)過6 mol/L HCl 水解后，采用全自動(dòng)氨基酸分析儀（日立，L-8500，日本）進(jìn)行測(cè)定。

1.4.2生產(chǎn)性能指標(biāo) 每日清晨觀察雞群的精神、采食、糞便狀況和雞只死淘數(shù)，每周按重復(fù)記錄采食量，分別在22 d和43 d清晨對(duì)試驗(yàn)雞只進(jìn)行稱重，計(jì)算1～21 d和22～42 d各重復(fù)雞只末重、平均日采食量、平均日增重、料重比。

1.4.3血清生化指標(biāo)的測(cè)定 試驗(yàn)雞只在43 d清晨飼喂前（42 d晚供水禁食），各重復(fù)隨機(jī)選取8只雞，翅下靜脈采血，3000 r/min離心15 min制備血清，分裝于Eppendorf管，-80 ℃保存待測(cè)。血清尿酸（Uric Acid，UA）、總膽固醇（Total Cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglyceride，TG）、白蛋白（Albumin，ALB）、總蛋白（Total Protein，TP）含 量、谷 草 轉(zhuǎn) 氨 酶（Glutamic Oxaloacetic Transaminase，GOT）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Glutamic Pyruvic Transaminase，GPT）采用試劑盒法測(cè)定，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.4.4血清抗氧化指標(biāo)的測(cè)定 血清總抗氧化能力（Total Anti-Oxidation Competence，T-AOC）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione Peroxidase，GSH-Px）活性及丙二醛（Malonaldehyde，MDA）含量均采用試劑盒法測(cè)定，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.5數(shù)據(jù)計(jì)算與統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS18.0單因子方差分析進(jìn)行分析，各組均值采用Tukey氏多重比較進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)，以P＜0.05作為差異顯著的標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2　結(jié)果與分析

2.1發(fā)酵處理對(duì)銀杏葉營養(yǎng)成分的影響 由表1可知，銀杏葉發(fā)酵后類黃酮、多糖和粗蛋白質(zhì)含量分別提高28.3%、52.5%和57.07%。通過發(fā)酵處理銀杏葉后，幾種必需氨基酸的含量也不同程度提高，其中蛋氨酸、蘇氨酸、精氨酸含量較發(fā)酵前分別提高125%、15.3%和42.04%。

2.2發(fā)酵銀杏葉對(duì)1～42 d黃羽肉仔雞生產(chǎn)性能的影響 日糧添加發(fā)酵銀杏葉對(duì)1～21 d平均日增重、平均日采食量和料重比均無顯著影響（P＞0.05）（表3）。與對(duì)照組相比，日糧添加0.2%、0.4%和0.8%發(fā)酵銀杏葉對(duì)42 d黃羽肉仔雞末重影響顯著（P＜0.05）。由表3可知，日糧添加0.4%發(fā)酵銀杏葉對(duì)22～42 d和1～42 d黃羽肉仔雞平均日增重影響顯著（P＜0.05），分別較對(duì)照組提高1.47%和1.58%。與其他各組相比，0.2%發(fā)酵銀杏葉組黃羽肉仔雞全期平均日采食量顯著提高（P＜0.05）。日糧添加0.4%發(fā)酵銀杏葉顯著降低了22～42 d和1～42 d黃羽肉仔雞料重比（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，日糧添加發(fā)酵銀杏葉顯著降低了黃羽肉仔雞全期死淘率（P＜ 0.05）。

表3　發(fā)酵銀杏葉對(duì)黃羽肉雞生長性能的影響

2.3 發(fā)酵銀杏葉對(duì)1～42 d黃羽肉仔雞血清生化指標(biāo)的影響 由表4可知，隨著日糧發(fā)酵銀杏葉添加水平的升高，血清白蛋白含量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，其中0.4%發(fā)酵銀杏葉組血清白蛋白含量較對(duì)照組和0.8%發(fā)酵銀杏葉組分別提高了3.22%（P＜0.05）和2.23%（P＜0.05）。血清尿酸和甘油三酯含量隨日糧發(fā)酵銀杏葉添加水平升高而降低，其中0.4%發(fā)酵銀杏葉組血清尿酸和甘油三酯含量較對(duì)照組分別降低了2.13%（P＜0.05）和3.56%（P＜0.05）。日糧添加發(fā)酵銀杏葉對(duì)肉雞血清GOT水平無顯著影響（P＞0.05），但與對(duì)照組相比，0.2%和0.4%發(fā)酵銀杏葉組顯著降低了肉雞血清GPT水平（P＜0.05）。

2.4發(fā)酵銀杏葉對(duì)1～42 d黃羽肉仔雞抗氧化性能的影響 由表5可知，血清SOD和GSH-Px的活力隨日糧發(fā)酵銀杏葉添加水平的升高而降低，其中0.4%發(fā)酵銀杏葉組血清SOD和GSHPx活力較對(duì)照組和0.8%發(fā)酵銀杏葉組分別提高3.48%（P＜0.05）、2.60%（P＜0.05）和0.48%（P＜0.05）、0.44%（P＜0.05）。日糧添加0.4%發(fā)酵銀杏血清MDA含量顯著降低（P＜0.05），其中較對(duì)照組降低7.91%（P＜0.05）。

表4　發(fā)酵銀杏葉對(duì)黃羽肉雞血清生化指標(biāo)的影響

表5　發(fā)酵銀杏葉對(duì)黃羽肉雞抗氧化性能的影響

3　討論

3.1發(fā)酵處理對(duì)銀杏葉營養(yǎng)成分的影響 銀杏葉是世界上較為普遍的植物，在中國具有一定的規(guī)?；?。發(fā)酵處理是開發(fā)飼料資源的有效方法，中草藥、樹葉等通過微生物發(fā)酵可以提高維生素、酶、生長因子的含量（Ng等，2011）。本試驗(yàn)利用發(fā)酵處理的銀杏葉飼喂1～42 d黃羽肉仔雞，評(píng)估其作為家禽飼料資源的可行性。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，銀杏葉經(jīng)過發(fā)酵處理后，其類黃酮、多糖、粗蛋白質(zhì)、蛋氨酸、蘇氨酸和精氨酸含量均高于未發(fā)酵處理銀杏葉，這與Hong等（2004）通過發(fā)酵處理豆粕的研究結(jié)果類似。

3.2發(fā)酵銀杏葉對(duì)肉雞生長性能的影響 本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧添加0.4%發(fā)酵銀杏葉可以顯著提高肉雞生長后期及全期日增重，同時(shí)降低料重比和死淘率。陳強(qiáng)和梁軍生（2012）研究表明，添加0.5%銀杏葉提取物顯著降低肉仔雞料重比，這與銀杏葉提取物中含多種活性成分可以促進(jìn)肉仔雞生長和蛋白質(zhì)合成有關(guān)。銀杏葉含有較多的類黃酮化合物（0.53%），本試驗(yàn)通過發(fā)酵處理銀杏葉后，類黃酮含量提高28.3%。黃酮的作用機(jī)理主要是通過調(diào)控下丘腦-垂體-靶器官軸，促進(jìn)機(jī)體生長激素的分泌，進(jìn)而促進(jìn)動(dòng)物生長（趙茹茜等，2002）。Cao等（2012）利用黑曲霉發(fā)酵的銀杏葉飼喂1～42 d黃羽肉仔雞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)日糧中添加0.35%和0.7%的發(fā)酵銀杏葉可以顯著降低22～42 d和1～42 d肉雞的料重比，這與本試驗(yàn)日糧添加0.4%發(fā)酵銀杏葉結(jié)果一致。有研究報(bào)道，日糧添加發(fā)酵銀杏葉可以提高肉雞腸道消化酶的含量，同時(shí)改善空腸絨毛高度和隱窩深度（Yu等，2015）。腸道黏膜及消化酶可以反映胃腸道的健康狀態(tài)，應(yīng)激導(dǎo)致腸道黏膜迅速變化，毒素更容易到達(dá)黏膜表面，使絨毛變短和隱窩變深，最終降低營養(yǎng)物質(zhì)的吸收（Xu等，2002）。本試驗(yàn)添加發(fā)酵銀杏葉能提高肉雞的生長性能可能與銀杏葉中的生物活性成分（類黃酮）能提高腸道消化酶水平及改善絨毛結(jié)構(gòu)有關(guān)。但上述相關(guān)報(bào)道的適宜添加量與本試驗(yàn)存在一定差異，可能與銀杏葉發(fā)酵方法、肉雞品種等不同有關(guān)。

3.3發(fā)酵銀杏葉對(duì)肉雞血清生化指標(biāo)的影響

機(jī)體蛋白質(zhì)的周轉(zhuǎn)由蛋白質(zhì)合成與分解代謝共同決定，血清白蛋白和總蛋白含量是反映機(jī)體蛋白質(zhì)合成能力的兩個(gè)重要指標(biāo)（Stanley等，2002）。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，日糧添加發(fā)酵銀杏葉對(duì)1～42 d黃羽肉仔雞血清總蛋白含量并無顯著影響，但0.4%發(fā)酵銀杏葉組可以顯著提高血清白蛋白質(zhì)水平和降低血清尿酸水平，這與陳強(qiáng)和梁軍生（2012）研究結(jié)果相似。Zarrouki等（2010）研究表明，類黃酮能抑制機(jī)體脂肪沉積，然而多數(shù)關(guān)于類黃酮對(duì)脂肪代謝的報(bào)道主要集中在哺乳動(dòng)物上。本試驗(yàn)利用發(fā)酵處理銀杏葉飼喂肉雞，發(fā)現(xiàn)血清甘油三酯水平顯著降低，這與Jiang等（2007）利用發(fā)酵人參飼喂蛋雞的結(jié)果一致。Cao等（2012）利用黑曲霉發(fā)酵銀杏葉飼喂AA肉雞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加發(fā)酵銀杏葉可以顯著降低肉雞腹脂和血清甘油三酯的含量，這可能與發(fā)酵銀杏葉中類黃酮上調(diào)肝臟脂肪酸β-氧化相關(guān)基因表達(dá)，同時(shí)下調(diào)脂肪酸合成相關(guān)基因表達(dá)有關(guān)（Aoki等，2007），本試驗(yàn)結(jié)果一定程度上可以為類黃酮在家禽脂肪代謝上的研究提供理論數(shù)據(jù)。谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶是參與蛋白質(zhì)和氨基酸代謝的兩種重要轉(zhuǎn)氨酶。本研究結(jié)果顯示，發(fā)酵銀杏葉對(duì)肉雞血清谷草轉(zhuǎn)氨酶水平無顯著影響，但顯著降低肉雞血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平，這可能與銀杏葉中生物活性物質(zhì)類黃酮改善肝臟代謝功能有關(guān)，具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

3.4發(fā)酵銀杏葉對(duì)肉雞抗氧化性能的影響

T-AOC是反映機(jī)體綜合抗氧化能力的重要指標(biāo)，SOD在平衡機(jī)體氧化和抗氧化能力上也具有重要作用（Lewis等，1995）。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，發(fā)酵銀杏葉對(duì)血清T-AOC活力影響并不顯著，但在日糧添加0.2%和0.4%發(fā)酵銀杏葉可以顯著提高1～42 d黃羽肉仔雞血清SOD和GSH-Px的活力，這與王國慶等（2007）利用銀杏葉提取物對(duì)兔抗氧化損傷作用的研究結(jié)果一致。機(jī)體不飽和脂肪酸被自由基攻擊發(fā)生氧化作用形成的脂質(zhì)過氧化物，是造成機(jī)體損傷的主要原因（Faustman和Cassens，1990）。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)日糧中添加0.4%發(fā)酵銀杏葉可顯著降低1～42 d黃羽肉仔雞血清MDA含量，這與Cao等（2012）、陳強(qiáng)和梁軍生（2012）在肉雞上的研究結(jié)果一致。本研究添加發(fā)酵銀杏葉提高黃羽肉仔雞血清SOD和GSH-Px的活力，同時(shí)降低血清MDA的含量，這可能與發(fā)酵后銀杏葉多糖和類黃酮含量升高有關(guān)，因?yàn)槎嗵呛皖慄S酮可以調(diào)控細(xì)胞自由基與抗氧化水平之間的平衡（Miyake等，2005）。

4　結(jié)論

日糧中添加發(fā)酵銀杏葉可以提高1～42 d黃羽肉仔雞的日增重和降低料重比，綜合考慮肉雞生產(chǎn)性能和抗氧化性能，玉米-豆粕型日糧中發(fā)酵銀杏葉的適宜添加水平為0.4%。

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