邢　鑫，張自森，郭彥偉，王利娟，張紅巧，鄭曉珂，張　劍，王亞楠

鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科 鄭州 450052

胃癌患者早期癥狀和體征不明顯，早期檢出率比較低，大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時已是中晚期。胃癌的早期診斷和治療對延長胃癌患者的生存時間和提高其治愈率具有重要意義[1]。胃鏡和鋇餐檢查難以在體檢人群中廣泛推廣，因此腫瘤標(biāo)志物在胃癌早期診斷中具有重要意義[2-3]。目前腫瘤標(biāo)志物可用于胃癌的診斷和病情監(jiān)測，但特異性和準(zhǔn)確性仍不能令人滿意。尋找靈敏度和特異性比較高的胃癌腫瘤標(biāo)志物成為目前研究的熱點(diǎn)。癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)是一種廣譜腫瘤標(biāo)志物，在胃腸癌、乳腺癌、肺癌及其他惡性腫瘤患者的血清中均有升高，因此不能作為診斷某種惡性腫瘤的特異性指標(biāo)，但在腫瘤的良惡性鑒別診斷、病情監(jiān)測、療效評價等方面仍有重要臨床價值。骨橋蛋白(osteopontin,OPN)是具有多種功能的分泌型蛋白，在惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移、新生血管生成和凋亡抑制方面發(fā)揮一定作用，有可能成為胃癌的診斷、治療和預(yù)后監(jiān)測的新指標(biāo)[4-6]。細(xì)胞角蛋白18(cytokeratin18,CK18)是細(xì)胞角蛋白家族中的一種，是胃上皮性細(xì)胞惡變的標(biāo)志之一[7-8]。本研究通過測定胃癌患者血清中OPN、CEA和CK18的表達(dá)情況，探討3者單獨(dú)及聯(lián)合檢測對胃癌的診斷和病情監(jiān)測的應(yīng)用價值。

1　對象與方法

1.1研究對象選擇2015年1月至2016年12月鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科收治的胃癌患者(80例)作為胃癌組，體檢中心健康體檢的健康者(80例)作為對照組，胃癌組患者年齡46～77(62.4±11.2)歲，男59例，女21例；對照組年齡45～75(61.8±10.4)歲，男52例，女28例，2組年齡、性別比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，有可比性。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有其他系統(tǒng)惡性腫瘤者，患有嚴(yán)重心肝腎等重要臟器疾病者，曾接受過手術(shù)或者放化療治療者，患有胃部其他疾病者，資料不完整者，拒絕參與試驗者。納入標(biāo)準(zhǔn)：胃癌組經(jīng)病理證實為胃癌患者，對照組各項體檢指標(biāo)均正常。研究對象均資料完整，簽署知情同意書。

1.2主要觀察指標(biāo)和檢測方法檢測兩組血清OPN、CEA和CK18含量，血清OPN、CEA和CK18診斷胃癌的靈敏度、特異度及ROC曲線下面積，血清OPN、CEA和CK18含量及其與胃癌患者病理特征的關(guān)系。健康體檢者體檢當(dāng)天清晨空腹抽血，胃癌患者入院后第2天清晨空腹抽血。均抽取外周靜脈血4 mL，離心后分離血清保存?zhèn)溆谩Ｑ錙PN含量采用ELISA法測定，血清CEA含量采用電化學(xué)發(fā)光法測定，血清CK18含量采用化學(xué)發(fā)光法測定。OPN、CEA及CK18鑒別胃惡性腫瘤的臨床檢驗診斷界點(diǎn)分別為：40 μg/L、4.3 μg/L和5.0 U/L。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 20.0進(jìn)行分析，繪制ROC曲線，計算各指標(biāo)診斷胃癌的靈敏度、特異度和ROC曲線下面積，應(yīng)用t檢驗比較兩組血清OPN、CEA和CK18含量的差異，應(yīng)用t檢驗和單因素方差分析比較不同病理特征胃癌患者血清OPN、CEA和CK18水平的差異，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2　結(jié)果

2.1兩組血清OPN、CEA和CK18含量比較見表1。

表1　兩組血清OPN、CEA和CK18含量比較

2.2血清OPN、CEA和CK18診斷胃癌的靈敏度、特異度及ROC曲線下面積比較見表2。由表2可知,兩兩聯(lián)合指標(biāo)診斷胃癌的ROC曲線下面積大于單獨(dú)指標(biāo)，三者聯(lián)合診斷胃癌的ROC曲線下面積最大。隨著聯(lián)合指標(biāo)的增多，診斷胃癌的靈敏度升高。

表2　血清OPN、CEA和CK18診斷胃癌的靈敏度、特異度及ROC曲線下面積比較

2.3血清OPN、CEA和CK18含量與胃癌病理特征的關(guān)系見表3。

表3　血清OPN、CEA和CK18含量和胃癌病理特征的關(guān)系

由表3可知，血清OPN、CEA和CK18含量與胃癌的臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，其中Ⅲ+Ⅳ期胃癌患者血清OPN、CEA和CK18含量明顯高于Ⅰ+Ⅱ期胃癌患者(P<0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者血清OPN、CEA和CK18含量高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者(P<0.05)。表明血清OPN、CEA和CK18含量與胃癌的嚴(yán)重程度和轉(zhuǎn)移有關(guān)。

3　討論

胃癌的發(fā)展一般經(jīng)歷5個階段：正常胃黏膜階段、淺表性胃炎階段、萎縮性胃炎階段、不典型增生階段和胃癌階段，在發(fā)展到胃癌階段后相當(dāng)長的一段時間內(nèi)胃癌的轉(zhuǎn)移速度比較慢，呈局限性發(fā)展。因此，胃癌的早期診斷和治療對延長胃癌患者的生存時間和提高治愈率具有非常重要的意義[9]。血清腫瘤標(biāo)志物的檢查方法簡單快捷，容易被患者接受，成為胃癌早期診斷的常用方法[10]。診斷胃癌比較常用的腫瘤標(biāo)志物有CEA、CA19-9、CA72-4等[11-13]。但是，這些廣譜腫瘤標(biāo)志物不能作為診斷胃癌的特異性指標(biāo)，探索和尋找診斷胃癌靈敏度高、特異性強(qiáng)的腫瘤標(biāo)記物是胃癌研究的熱點(diǎn)問題。

CEA是1965年由Gold和Freedman首先從結(jié)腸癌和胚胎組織中提取的一種腫瘤相關(guān)抗原，由存在于內(nèi)胚層的細(xì)胞分化而來的癌癥細(xì)胞表面抗原，是細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)蛋白，其在多種惡性腫瘤的血清中均有升高。OPN是一種蛋白質(zhì)，從骨基質(zhì)中分離，廣泛分布于多種組織和細(xì)胞中，OPN含有的RGD能夠抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞黏附和遷移，OPN還參與免疫調(diào)節(jié)、新生血管生成和鈣代謝等。OPN和惡性腫瘤的關(guān)系也比較密切，與惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和預(yù)后有關(guān)[14-15]：OPN水平下調(diào)，腫瘤細(xì)胞的凋亡增加、侵襲力下降；OPN水平越高，患者的預(yù)后越差。OPN在胃癌、肝癌、肺癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤中表達(dá)量明顯增加，在有轉(zhuǎn)移的患者中表達(dá)升高，抑制OPN的表達(dá)能夠抑制惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移[16-17]。CK18 在胃 癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌等惡性腫瘤中作用的研究越來越多[18]。CK18主要反映上皮細(xì)胞的裂解和凋亡情況。化療藥導(dǎo)致的腫瘤細(xì)胞死亡主要由凋亡介導(dǎo)，因此檢測與凋亡相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物CK18可能反映化療藥物的有效率，其有望成為更有臨床價值的胃癌相關(guān)血清學(xué)標(biāo)志物[19]。

本研究通過對胃癌患者血清中OPN、CEA及CK18的表達(dá)情況進(jìn)行測定，探討三者聯(lián)合檢測在胃癌診斷中的意義。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：胃癌組患者血清OPN、CEA和CK18含量均高于對照組。Ⅲ+Ⅳ期胃癌患者血清OPN、CEA和CK18含量高于Ⅰ+Ⅱ期胃癌患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者血清OPN、CEA和CK18含量高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者。ROC曲線下面積可以定量反應(yīng)診斷方法的準(zhǔn)確性，ROC曲線下面積越大診斷準(zhǔn)確性越高。本研究發(fā)現(xiàn)OPN對胃癌的診斷準(zhǔn)確性較CEA和CK18高，可以作為胃癌檢測的指標(biāo)，OPN和其他指標(biāo)兩兩聯(lián)合的診斷準(zhǔn)確度高于單獨(dú)OPN的診斷準(zhǔn)確度，OPN和其他指標(biāo)三聯(lián)合的診斷準(zhǔn)確度高于兩兩聯(lián)合，表明OPN和其他指標(biāo)聯(lián)合能夠提高胃癌的診斷準(zhǔn)確度。

OPN與CEA、CK18均可作為胃癌診斷、治療及預(yù)后判定的相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物，但機(jī)制不同。OPN在惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移、新生血管生成和凋亡抑制方面發(fā)揮一定作用，CK18與上皮細(xì)胞惡變增殖、細(xì)胞降解死亡緊密相關(guān)，而 CEA的升高則與其編碼基因在細(xì)胞癌變時失去抑制作用有關(guān)，三者的聯(lián)合檢測可能起到一定的互補(bǔ)作用，具體的相關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。多腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測有利于提高對胃癌診斷和病情監(jiān)測的敏感性，有重要的臨床價值。

[1] JIA S,CAI J.Update on biomarkers in development of anti-angiogenic drugs in gastric cancer[J].Anticancer Res,2016,36(3):1111

[2] DEGIULI M, DE MANZONI G, DI LEO A,et al.Gastric cancer:current status of lymph node dissection[J].World J Gastroenterol,2016,22(10):2875

[3] KUCERA R,SMID D,TOPOLCAN O,et al.Searching for new biomarkers and the use of multivariate analysis in gastric cancer diagnostics[J].Anticancer Res,2016,36(4):1967

[4] 趙治國,周明鍇,秦勝利,等.胃癌組織中骨橋蛋白與尿激酶型纖溶酶原激活物的表達(dá)[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2007,42(5): 906

[5] CHEN T,SUN L,HE C,et al.Serum OPN expression for identification of gastric cancer and atrophic gastritis and its influencing factors[J].PLoS One,2014,9(12):e114005

[6] DI BARTOLOMEO M,PIETRANTONIO F,PELLEGRINE-LLI A,et al.Osteopontin, E-cadherin, and beta-catenin expression as prognostic biomarkers in patients with radically resected gastric cancer[J].Gastric Cancer,2016,19(2):412

[7] 楊士軍,陸衛(wèi)平,鮑艷梅,等.血清CK18及CA72-4水平在胃癌診治中的臨床價值[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2012,33(13):1593

[8] 裴鋒,朱毅.細(xì)胞角蛋白18片段檢測在胃癌診斷中的臨床意義[J].腫瘤防治研究,2012,39(4):439

[9] TANI T, SONODA H, TANI M. Sentinel lymph node navigation surgery for gastric cancer:does it really benefit the patient? [J].World J Gastroenterol,2016,22(10):2894

[10]ZHOU YC,ZHAO HJ,SHEN LZ.Preoperative serum CEA and CA19-9 in gastric cancer:a single tertiary hospital study of 1 075 cases[J].Asian Pac J Cancer Prev,2015,16(7):2685

[11]張志棟,李勇,檀碧波,等.胃癌患者癌組織膜聯(lián)蛋白A2的表達(dá)與血清膜聯(lián)蛋白A2及癌胚抗原水平測定[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2016,51(1):76

[12]LEE EC,YANG JY,LEE KG,et al.The value of postoperative serum carcinoembryonic antigen and carbohydrate antigen 19-9 levels for the early detection of gastric cancer recurrence after curative resection[J].J Gastric Cancer,2014,14(4):221

[13]TIAN SB,YU JC,KANG WM,et al.Combined detection of CEA,CA19-9,CA242 and CA50 in the diagnosis and prognosis of resectable gastric cancer[J].Asian Pac J Cancer Prev,2014,15(15):6295

[14]QIU Y,HU Y,ZHANG ZY,et al.Genetic association of osteopontin (OPN) and its receptor CD44 genes with susceptibility to Chinese gastric cancer patients[J].J Cancer Res Clin Oncol,2014,140(12):2143

[15]LIU J,LIU Q,WAN Y,et al.Osteopontin promotes the progression of gastric cancer through the NF-κB pathway regulated by the MAPK and PI3K[J].Int J Oncol,2014,45(1):282

[16]CAO DX,LI ZJ,JIANG XO,et al.Osteopontin as potential biomarker and therapeutic target in gastric and liver cancers[J].World J Gastroenterol,2012,18(30),3923

[17]LIU H,LI P,LI B,et al.RKIP inhibits gastric cancer cell survival and invasion by regulating the expression of HMGA2 and OPN[J].Tumour Biol,2014,35(12):11949

[18]OYAMA K,FUSHIDA S,KINOSHITA J,et al.Serum cytokeratin 18 as a biomarker for gastric cancer[J].Clin Exp Med,2013,13(4):289

[19] 鄧薇，張小田，高靜,等.人再生基因蛋白Ⅳ和細(xì)胞角蛋白18在胃癌患者血清中的表達(dá)及臨床意義[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2012,37(12):1142