孫永艷

當前在大宗淡水魚類在養(yǎng)殖中，以草魚為主的大宗淡水魚類在養(yǎng)殖方式上發(fā)生較大轉變，這種集約化的發(fā)展，使得池塘中產(chǎn)生大量殘餌和動物排泄物，這些代謝廢物在微生物的作用下分解成有機物、氨氮、硝酸鹽氮、亞硝酸鹽氮等氮化合物，養(yǎng)殖水體中氮化合物含量過高時對魚類生長和水生餌料生物產(chǎn)生很強的毒害作用。亞硝酸鹽還是強烈的致癌物質(zhì)，如何降解這些物質(zhì)，是水產(chǎn)科技工作者一直所關注的研究課題。

本試驗對國家大宗淡水魚類產(chǎn)業(yè)技術體系，蘭州綜合試驗站金山漁業(yè)科技示范點生物濾池中的微生物群落進行定性定量分析，并對其中的異養(yǎng)硝化菌的異養(yǎng)硝化性能進行測定，以期篩選出能高效去除養(yǎng)殖水體中氨氮和亞硝酸鹽的菌株，為養(yǎng)殖中的水處理服務。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料

本試驗異養(yǎng)硝化菌株的分離源為甘肅省靖遠縣北灣鎮(zhèn)金山漁業(yè)科技示范點生物濾池中的濾料。水樣取自U型生物濾池的五個不同位點，其中B1是進水口，B5為出水口，B3為U型管的拐角處，B2取自B1和B3中間，B4取自B3和B5中間。菌株來源于U型生物濾池的毛刷中，五個位點的濾料分別與水樣的五個位點一一對應，將取回來的水樣和菌株在冰箱里保存以備測定。

1.2 方法

本試驗首先需要測定所采集水樣的各項理化指標。然后再進行微生物試驗，將所取得的濾料接種在普通培養(yǎng)基、異養(yǎng)培養(yǎng)基和異養(yǎng)硝化培養(yǎng)基中，將培養(yǎng)得到的菌株計數(shù)，對微生物群落進行定量分析。將分離篩選出的異養(yǎng)硝化菌株進行革蘭氏染色，鑒定其陰陽性，通過形態(tài)觀察，全自動細菌鑒定儀鑒定菌株的種類進行微生物群落的定性分析，并測定分離菌的異養(yǎng)硝化性能，檢測其氨氮去除率。

2 結果與分析

2.1 生物濾池中海水理化指標

結果表明各位點總氮的含量在6.32±0.10 mg/L到6.46±0.08 mg/L之間，整體變化穩(wěn)定。從B1到B5，氨態(tài)氮的濃度變化較明顯，從進水口到出水口呈遞減的趨勢，降解率為67.03%。亞硝態(tài)氮的含量在U型池的底部為最低值。有效磷的含量為0.19±0.005 mg/L基本保持不變。數(shù)據(jù)顯示此生物濾池的有效磷在0.1～0.2 mg/L之間，所以有效磷含量是最佳值。溶解氧的含量在進水口和出水口處明顯高于其他三處。有機碳的含量在進水口為21.59±0.13mg/L出水口為26.43±0.17mg/L，呈遞增的趨勢，在進水口的含量明顯低于其他各位點。

2.2 微生物定量分析

經(jīng)過對B1，B2，B3，B4， B5，五個不同位點的濾料進行富集培養(yǎng)和硝化細菌的MPN法計數(shù)得出數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)表明，每一位點的細菌總數(shù)都大于異養(yǎng)菌和硝化菌的總數(shù)；并且每一位點異養(yǎng)菌的總數(shù)都大于硝化細菌的總數(shù)。細菌的總數(shù)在出水口處明顯高于其他四處，而異養(yǎng)細菌的總數(shù)也是在出水口處明顯高于其他四處，原因可能是在進水口處有水流的沖擊，造成細菌數(shù)量不穩(wěn)定。

2.3 微生物定性分析

通過分離純化和菌種的鑒定， 從所采濾料中分離得到11株菌， 通過革蘭氏染色、生理生化鑒定，鑒定菌株的種類。包括銅綠假單胞菌，海藻希瓦氏菌，嗜水氣單胞菌，河流弧菌，少動鞘氨醇氣單胞菌，粘質(zhì)沙雷氏菌，腐敗希瓦氏菌，西宮皮球菌，克氏庫克菌，荷養(yǎng)顆粒鏈菌，玫瑰庫克菌。

2.4 異養(yǎng)硝化效率

以菌種名為橫坐標，氨氮去除率為縱坐標，繪制各菌株的氨氮去除率，結果如圖1：

圖1 異養(yǎng)硝化細菌的氨氮去除率

由圖1可知，本試驗篩選的11株異養(yǎng)硝化細菌均具有異養(yǎng)硝化能力，且氨氮降解率在27.3%和82.8%之間。其中yy1的氨氮降解率最低為27.3%，而yy24 菌株的氨氮降解率最高，可達到82.8%，所以yy24可以做為進一步研究的受試菌。

3 結論

3.1 對甘肅省靖遠縣北灣鎮(zhèn)金山漁業(yè)科技示范點生物濾池中采得的樣品，采用傳統(tǒng)的生物技術，通過稀釋涂布平板和平板劃線法，分離純化從中共篩選出脫氮效果較好的11株異養(yǎng)硝化菌株。

3.2 對分離出來的菌株進行革蘭氏染色和顯微形態(tài)觀察，鑒定其陰陽性，并鑒定菌株的種類。包括銅綠假單胞菌，海藻希瓦氏菌，嗜水氣單胞菌，河流弧菌，少動鞘氨醇氣單胞菌，粘質(zhì)沙雷氏菌，腐敗希瓦氏菌，西宮皮球菌，克氏庫克菌，荷養(yǎng)顆粒鏈菌，玫瑰庫克菌。

3.3 將分離出的微生物菌株涂布于異養(yǎng)培養(yǎng)基中初步測定其異養(yǎng)硝化能力，然后測定分離出菌株的氨氮去除性能，鑒定其異養(yǎng)硝化能力，最終篩選得到一株脫氮性能較高的菌株西宮皮球菌，其氨氮去除率可以達到82.80%。

（作者單位：730600甘肅省白銀市靖遠縣畜牧獸醫(yī)局）