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1.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建 福州 350122 2.福建省中醫(yī)藥研究院，福建 福州 350003

咳嗽是一種臨床常見病癥，中醫(yī)認(rèn)為是因邪犯肺系，肺失宣肅，肺氣上逆所致。隨著自然和社會環(huán)境的變化，咳嗽發(fā)病率逐漸上升，隨著近年來對咳嗽的病因病機(jī)及治療方法認(rèn)識上不斷深入，目前更重視環(huán)境因素及鼻、咽喉疾病所致咳嗽[1]。針對干燥環(huán)境及咽喉疾病所致咳嗽，課題組經(jīng)過民間調(diào)查及臨床實(shí)踐，總結(jié)以烏梅、青果(橄欖)為君，稻香陳為臣，粳米為佐、茶葉為使組成的青梅復(fù)方。方中烏梅、青果、稻香陳三者作為君臣藥配伍，傳統(tǒng)方劑中比較少見，其針對干燥環(huán)境及咽喉疾病所致燥熱咳嗽、咽喉疼痛等具有一定療效，但相關(guān)的藥理藥效學(xué)研究數(shù)據(jù)卻不足，故本實(shí)驗(yàn)采用氨水引咳法、小鼠酚紅排泌法建立小鼠咳嗽、致痰模型，觀察青梅復(fù)方口服液的鎮(zhèn)咳祛痰作用，對青梅復(fù)方口服液的藥效學(xué)進(jìn)行探討，為其臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)性依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 動物 昆明種小鼠，清潔級，雄性，20～24 g，購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限公司。實(shí)驗(yàn)前將小鼠置20～25 ℃SPF級動物實(shí)驗(yàn)室(許可證號，SCXK(閩)2014-0005)中飼養(yǎng)1周，標(biāo)準(zhǔn)飼料，無菌飲用水。

1.2 藥物 青梅復(fù)方口服液本實(shí)驗(yàn)室自制，采用水提醇沉法制備，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，選取提取時(shí)間、料液比值、提取次數(shù)為考察因素，以總黃酮含量和浸膏得率為評價(jià)指標(biāo)，釆用正交試驗(yàn)法優(yōu)選水提工藝，得最佳水提工藝為：料液比值1∶10，加熱提取3次，提取時(shí)間90 min。在此基礎(chǔ)上進(jìn)行醇沉工藝的優(yōu)選。以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，選取醇沉濃度、醇沉?xí)r間、藥液濃度為考察因素，以總黃酮含量和浸膏得率為評價(jià)指標(biāo)，釆用正交試驗(yàn)法優(yōu)選醇沉工藝。得最佳醇沉工藝為：藥液濃度0.35 g/mL，醇沉濃度60%，醇沉?xí)r間12 h。以此制成口服液濃度為1.167 g/mL。藥材：烏梅(批號：20150406，福建省永泰縣永豐果子廠) ，青果(批號：20151022，福建青橄欖銷售有限公司)，粳米(批號：20150921，江蘇淮安禾香源米廠)，茶葉(批號：20150616，福建省安溪縣升美茶業(yè)有限公司)，稻香陳(批號：20130713，福建尤溪仙錦藥業(yè)有限公司)。給藥樣品由實(shí)驗(yàn)室自制，如圖1所示。

1.3 試劑 氨水(批號 2016-0824，石家莊市試劑廠)；酚紅(批號 160708，北京試劑化工廠)。

1.4 儀器 721型分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠)；BSW-2A 貝爾思超聲霧化儀(鞍山貝爾思科技有限公司)。

2 方法

2.1 鎮(zhèn)咳作用(氨水引咳法)[2-4]取雄性昆明小鼠50只放入密閉玻璃器皿內(nèi)，濃氨水定量恒壓噴霧，10 s后立即取出，誘導(dǎo)咳嗽(小鼠咳嗽表現(xiàn)為腹肌收縮，同時(shí)張大嘴，有時(shí)有咳聲)，記錄小鼠接受噴霧開始到出現(xiàn)咳嗽的潛伏期以及2 min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。噴霧后2 min內(nèi)不咳嗽者舍棄。合格小鼠3 d后按干預(yù)方式不同隨機(jī)分為5組，每組10只：空白組、陽性對照組(氯化銨0.4 g/kg)、青梅復(fù)方口服液高濃度組20 mL/kg、中濃度組10 mL/kg、低濃度組5 mL/kg，空白組灌胃等體積生理鹽水。連續(xù)灌胃給藥7 d，末次給藥1 h后，按上述濃氨水噴霧法記錄并比較各組小鼠的咳嗽潛伏期，以及2 min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。

2.2 祛痰作用[4]取小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只。分別為空白組、陽性對照組(氯化銨0.4 g/kg)、青梅復(fù)方口服液高濃度組20 mL/kg、中濃度組10 mL/kg、低濃度組5 mL/kg，空白組灌胃等體積生理鹽水。各組連續(xù)灌胃7 d，末次給藥30 min后，腹腔注射0.5%酚紅生理鹽水0.5 mL每只，30 min后，處死小鼠，剝離氣管周圍組織，剪下自甲狀軟骨下至氣管分支處的一段氣管；放入盛有2 mL生理鹽水的試管中振蕩30 min，丟棄氣管，每份標(biāo)本液中加1 N氫氧化鈉溶液0.1 ml，于546 nm分光光度計(jì)測吸光度。根據(jù)酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線，折算出酚紅含量(mg/L)。

2.3 酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取酚紅，用5%的NaHCO3溶液溶解并定容，最后得1000 μg·mL-1濃度的酚紅母液，用NaHCO3溶液分別稀釋成濃度為：10、5、3、1、0.8、0.6、0.4、0.2 μg/mL。于分光光度計(jì)546 nm處測吸光度。以吸光度值為Y軸，以酚紅濃度(μg/mL)為X軸，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程。

3 結(jié)果

3.1 鎮(zhèn)咳作用 與空白組比較，各給藥組小鼠的咳嗽潛伏期均顯著延長(P﹤0.05或P﹤0.01)，咳嗽次數(shù)亦顯著減少(P﹤0.05)；與氯化銨陽性對照組比較，口服液高濃度組咳嗽潛伏期顯著延長(P﹤0.01)，咳嗽次數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，口服液中濃度組和低濃度組咳嗽潛伏期和咳嗽次數(shù)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，且以口服液中濃度組作用與氯化銨陽性對照組較為接近，低濃度組則相對優(yōu)于氯化銨陽性對照組。見表1。

注：與空白對照組比較，*P﹤0.05，△P﹤0.01；與陽性對照組比較，#P﹤0.01。

3.2 祛痰作用 按照酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線圖：y=0.0545x+ 0.049(R2=0.9971)計(jì)，與空白組比較，各給藥組小鼠的氣管酚紅排泌量均顯著增加(P﹤0.05或P﹤0.01)；與氯化銨陽性對照組比較，口服液三種濃度組小鼠的氣管酚紅排泌量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，且口服液中濃度組作用與氯化銨陽性對照組較為接近。見表2。

組別劑量g/kg酚紅排泌量/mg/L實(shí)驗(yàn)前體重/g試驗(yàn)后體重/g空白組等體積生理鹽水0.958±0.34122.86±1.00733.37±1.395陽性對照組0.401.678±0.579△22.73±0.96633.55±1.348口服液高濃度組23.341.545±0.673*22.94±0.75233.05±1.394口服液中濃度組11.671.602±0.773*22.27±0.98432.49±1.699口服液低濃度組5.841.431±0.592*22.74±1.03032.52±1.940

注：與空白對照組比較,*P﹤0.05，△P﹤0.01。

4 討論

青梅復(fù)方為食藥兩用藥材組成，烏梅、橄欖、稻香陳均具有獨(dú)特的藥理功效和很好的營養(yǎng)保健作用。研究表明[5-9]，烏梅中含有黃酮類、揮發(fā)性成分、糖類、氨基酸類多種成分，這些化合物大多有抗菌、消炎、抗疲勞、鎮(zhèn)咳等作用，可治療慢性咽炎；橄欖對咽炎亦有抗炎鎮(zhèn)痛作用。本方以烏梅為君藥，《神農(nóng)本草經(jīng)》謂梅實(shí)“主下氣，除熱……”；《本草綱目》認(rèn)為烏梅具有“斂肺澀腸……涌痰，殺蟲”等功效，可治食痰頑痰；王好古謂烏梅能收肺氣，治燥嗽；《醫(yī)宗必讀》也稱其“定嗽定渴”、“清音祛痰涎”，具有斂肺而不斂痰、生津而不滋膩的特點(diǎn)，善于止咳化痰，又可生津止渴[10]，故能用治燥熱咳嗽。青果氣微，果肉味澀，久嚼微甜，既是佳果又為良藥，素來被稱為“肺胃之果”[11-12]，具清熱解毒、利咽、生津等功效，常用于咽喉腫痛、咳嗽痰黏、煩熱口渴、魚鱉中毒，與烏梅配伍既能清熱利咽，又能祛痰生津而止咳，故共為君藥。稻香陳為陳皮經(jīng)過炮制加工后的涼果類食品，具有理氣健脾、燥濕化痰功效，能輔助君藥增強(qiáng)化痰功效而為臣藥。粳米在方中起到益胃生津作用，又能佐制青果之寒涼而顧護(hù)脾胃，為佐藥。茶葉：《中華本草》謂其“性涼味苦甘，能清頭目、除煩渴、消食、化痰、利尿、解毒。”《本草經(jīng)疏》言其“太陰為清肅之臟，喜涼而惡熱，熱則生痰而津液竭”，茶葉甘寒入心、肺而除熱，則津液生，痰熱解，本方少量用之為使。全方配伍共奏止咳化痰，生津利咽，醒脾益胃解渴之功。

氨水引咳法主要是使用氨水噴霧刺激小鼠呼吸道感受器，使其反射地引起咳嗽；而能抑制咳嗽中樞或降低呼吸道感受器敏感性的藥物均可發(fā)揮鎮(zhèn)咳作用。實(shí)驗(yàn)表明，青梅復(fù)方口服液高中低溶度組均能延長咳嗽潛伏期，時(shí)間均比氯化銨陽性對照組長；咳嗽次數(shù)與空白組對比均明顯減少，說明本口服液具有較好的鎮(zhèn)咳作用，有較好的預(yù)防咳嗽功能；青梅復(fù)方口服液高中低溶度組均能明顯增加小鼠氣管酚紅排泌量，說明本口服液亦有良好的祛痰作用。兩組實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明口服液鎮(zhèn)咳祛痰作用均與氯化銨陽性對照組相仿，口服液低濃度組鎮(zhèn)咳作用甚至優(yōu)于氯化銨。由此可見，青梅復(fù)方口服液鎮(zhèn)咳祛痰的作用不是隨著藥物濃度的增加而加強(qiáng)，何種濃度及用量才能取得最佳效果有待進(jìn)一步研究。同時(shí)也提示在使用該口服液鎮(zhèn)咳祛痰時(shí)并非劑量越大越好，而是要合理用藥。

本實(shí)驗(yàn)從藥效學(xué)角度證實(shí)青梅復(fù)方口服液確有鎮(zhèn)咳祛痰作用，為臨床應(yīng)用及開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)支持。

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