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(1.重慶市畜牧科學(xué)院，重慶 400015；2.重慶市山羊工程技術(shù)研究中心，重慶 榮昌 402460)

同期發(fā)情技術(shù)是家畜胚胎移植技術(shù)中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，受體山羊同情發(fā)情處理后移植優(yōu)良胚胎,不僅可使妊娠同期化、分娩同期化、出欄同期化，節(jié)省人力物力，而且可以充分發(fā)揮優(yōu)良母畜的繁殖潛力。酉州烏羊是國家級畜禽遺傳資源，具有烏皮特征，肉質(zhì)鮮美，目前該資源種群數(shù)量極少，已瀕臨滅絕[1]，因此急需開展有效的保護(hù)，以挽救這一珍稀資源。本試驗(yàn)采用T型孕酮陰道栓(CIDR)+孕馬血清促性腺激素(PMSG)法的方法對重慶本地山羊同期發(fā)情處理并進(jìn)行胚胎移植，探討受體羊同期發(fā)情和胚胎移植效果，為挽救酉州烏羊這一瀕危資源提供一些配套技術(shù)和科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn)

試驗(yàn)于2016年9月開始在重慶市酉州烏羊資源保護(hù)場進(jìn)行。

1.2 受體羊的選擇和飼養(yǎng)管理

選擇膘情中等、健康的2～5歲的經(jīng)產(chǎn)重慶本地山羊90只作為受體羊。在試驗(yàn)前一個(gè)月集中進(jìn)行體內(nèi)外驅(qū)蟲和常規(guī)免疫。受體羊采用舍飼方式，根據(jù)營養(yǎng)需要配制日糧進(jìn)行早晚補(bǔ)飼，按每只0.2～0.3 kg/d。

1.3 藥品

CIDR：含孕酮0.3g/個(gè)，Pharmacia&Upjohn Pty Limited(New Zealand)生產(chǎn)；PMSG：Intervet Australia Pty Limited生產(chǎn)。

1.4 受體羊的同期發(fā)情處理

受體母羊埋植孕酮CIDR硅膠栓并肌注Vade合劑 3 mL，埋栓的第18天撤栓并肌注PMSG250U和Vade合劑3 mL。撤栓后24～36 h內(nèi)發(fā)情，采用CIDR(陰道放置)+PMSG(肌肉注射)方法，在受體羊發(fā)情周期的任意一天陰道埋置CIDR，第18天撤栓，撤栓時(shí)肌注PMSG 200 IU。發(fā)情受體羊依時(shí)間差記好耳號并用油漆作相應(yīng)標(biāo)記待用。

1.5 受體羊發(fā)情鑒定

從撤栓后24 h開始，用試情公羊法進(jìn)行母羊發(fā)情鑒定，有發(fā)情征兆并接受試情公羊爬跨的鑒定為發(fā)情羊。每天早晚分別試情1次，持續(xù)2 d，48 h內(nèi)發(fā)情者為同期發(fā)情處理有效。發(fā)情受體羊依時(shí)間差記好耳號、發(fā)情開始時(shí)間和持續(xù)時(shí)間。并用油漆作相應(yīng)標(biāo)記待用。

1.6 受體羊紅體觀察及胚胎移植

發(fā)情的受體母羊空腹24 h，經(jīng)麻醉處理后保定于手術(shù)架，進(jìn)行創(chuàng)口刮毛和消毒處理，采用輸卵管移植法進(jìn)行受體羊胚胎移植，采用手術(shù)方法將受體羊腹腔打開，找出子宮、卵巢，觀察兩側(cè)卵巢上的紅體(排卵點(diǎn))狀況，淘汰卵巢上無紅體或紅體發(fā)育不良的受體羊。將吸有胚胎的移卵針通過受體羊輸卵管傘口插入輸卵管約3 cm處，然后注入胚胎，輕輕按摩以防倒流。

1.7 檢胚及胚胎質(zhì)量鑒定

用口吸管在顯微鏡下從培養(yǎng)皿中找出胚胎，按胚胎形態(tài)、透明帶完整性、內(nèi)細(xì)胞團(tuán)結(jié)構(gòu)等對胚胎質(zhì)量進(jìn)行鑒定后，把胚胎裝入專用移植槍內(nèi)，每次2～4枚胚胎，等待移植。

1.8 創(chuàng)口縫合

用絲線對手術(shù)羊只進(jìn)行創(chuàng)口縫合，分2層進(jìn)行，內(nèi)層為腹膜層，采用連續(xù)縫合，外層采用結(jié)節(jié)縫合法。

1.9 妊娠檢查

對受體羊胚胎移植后35～40 d，確診是否懷孕，胚胎移植后140 d開始做好產(chǎn)羔準(zhǔn)備。

2 結(jié)果

2.1 受體羊同期發(fā)情效果

觀察和統(tǒng)計(jì)受體羊情況，結(jié)果表明，48 h內(nèi)發(fā)情的羊有74只，同期發(fā)情率82.22%，胚胎移植時(shí)，用腹腔鏡觀察卵巢上紅體(排卵點(diǎn))情況發(fā)現(xiàn)，有效發(fā)情率是76.67%,見表1。

表1 受體羊同期發(fā)情情況 只、%

注:同期發(fā)情率=發(fā)情羊數(shù)/處理羊數(shù); 有效發(fā)情率=有紅體(排卵點(diǎn))羊數(shù)/處理羊數(shù)

2.2 胚胎移植效果

以酉州烏羊胚胎作為供體進(jìn)行胚胎移植，共移植受體69只，妊娠43只，妊娠率為62.32%，共產(chǎn)下55只羔羊,見表2。

注:妊娠率=妊娠數(shù)/移植受體羊數(shù)

3 討論

在自然條件下，重慶本地山羊全年都可發(fā)情,但母羊發(fā)情主要集中在春季和秋季，其他季節(jié)相對較少。同期發(fā)情是采用藥物和激素有計(jì)劃地對母羊的發(fā)情周期進(jìn)行同期化處理，從而達(dá)到人為地控制母羊群在短時(shí)間內(nèi)集中發(fā)情[2]。前期作者團(tuán)隊(duì)在春冬兩季對山羊進(jìn)行同期發(fā)情處理,研究結(jié)果說明季節(jié)對山羊同期發(fā)情和胚胎植移效果有一定的影響，但對已發(fā)情的羊只形成功能黃體比率影響不明顯，春冬兩季處理羊的有效發(fā)情率分別為81.08%和60.00%[3]；此次利用受體母羊得到有效發(fā)情率76.67%，說明采用T型孕酮陰道栓(CIDR)+孕馬血清促性腺激素(PMSG)法的方法對本地山羊在進(jìn)行同期發(fā)情處理是穩(wěn)定可行的。

胚胎移植技術(shù)可充分發(fā)揮優(yōu)良母畜的繁殖潛力，應(yīng)用MOET技術(shù)，可加大選擇強(qiáng)度，提高選擇準(zhǔn)確，縮短世代間隔。據(jù)酉陽縣畜牧獸醫(yī)局調(diào)查，酉州烏羊目前存欄量僅10 000余頭，若不及時(shí)采取有效手段進(jìn)行保護(hù)和開發(fā)，將面臨滅絕的風(fēng)險(xiǎn)[4]。作者團(tuán)隊(duì)自2010年以來多次利用激素對酉州烏羊進(jìn)行超數(shù)排卵[5]，得到了較理想的效果，為挽救酉州烏羊這一瀕危資源，擴(kuò)繁酉州烏羊優(yōu)良種群數(shù)量貢獻(xiàn)了應(yīng)有的力量。

[1] 張璐璐,尹權(quán)為.酉州烏羊資源現(xiàn)狀與發(fā)展前景[C].中國羊業(yè)進(jìn)展論文集,2012:23-26.

[2] 權(quán)凱，魏紅芳.羊同期發(fā)情技術(shù)研究進(jìn)展[J]中國草食動物科學(xué)，2015，35(1)：54-55.

[3] 陳靜,黃勇富,周鵬,等.春冬兩季受體山羊同期發(fā)情和胚胎移植效果研究[J]西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)2016，38(7)：36-39.

[4] 夏元友，彭春江，鄭義．酉州烏羊品種特性及生產(chǎn)性能初探．畜禽業(yè)，2005(7)：44-45.

[5] 高立芳，黃勇富，任航行，等.酉州烏羊不同季節(jié)超數(shù)排卵的試驗(yàn)研究[J].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，38(7)：52-55.

周鵬，高級畜牧師，主要從事動物生產(chǎn)方面的研究。