趙柳蘭，代 敏，楊 淞，吳應(yīng)斌，湯巨平，楊世勇，杜宗君

(1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，成都 611130；2.四川省似鲇高原鰍省級(jí)原種場(chǎng)，四川峨眉山 614224)

似鲇高原鰍 (Triplophysasiluroides)屬鯉形目(Cypriniformes)鰍科(Cobitidate)條鰍亞科(Nemachilinae)高原鰍屬(Triplophysa)，是中國(guó)特有的冷水性魚類，能夠適應(yīng)于青藏高原特殊的高寒環(huán)境，為鰍科中最大的一種，主要分布于四川、甘肅、青海的黃河干支流及附屬湖泊[1]。似鲇高原鰍肉質(zhì)鮮美，具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值，由于環(huán)境變化、分布的局限性及生長(zhǎng)慢等原因，幾乎瀕臨滅絕。似鲇高原鰍對(duì)高原環(huán)境有著極強(qiáng)的適應(yīng)性，而如今卻很難養(yǎng)殖，這與其免疫適應(yīng)性的機(jī)制密切相關(guān)。到目前為止，似鲇高原鰍的研究較少，如遺傳多樣性[1]、呼吸耗氧[2]及苗種培育[3]等方面的初步研究，而免疫學(xué)方面僅見皮膚和鰓粘膜免疫結(jié)構(gòu)[4]及部分細(xì)菌性病原的分離[5]，其他方面幾近空白。血細(xì)胞是細(xì)胞免疫的基礎(chǔ)，承擔(dān)著免疫應(yīng)答的重要機(jī)能，并且能夠隨外界環(huán)境因素的影響而發(fā)生變化，反映機(jī)體的健康和所處環(huán)境狀況，也能夠?yàn)槠浼膊》乐翁峁┲匾罁?jù)[5,6]。本研究通過對(duì)似鲇高原鰍的外周血細(xì)胞、中腎、肝臟和脾臟的血細(xì)胞發(fā)生進(jìn)行研究，以期為揭示似鲇高原鰍免疫適應(yīng)性原因及今后該種類的合理保護(hù)和養(yǎng)殖開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)用魚

似鲇高原鰍源自眉山似鲇高原鰍原種場(chǎng)，充氧后運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，暫養(yǎng)于水族箱內(nèi)，24 h不間斷充氧，水溫13 ℃左右，選取體色正常、反應(yīng)靈敏的10尾個(gè)體(雌雄比1∶1)進(jìn)行取樣，平均體重為(93.12±12.73)g，平均體長(zhǎng)為(22.08±1.91)cm。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

采血制作血涂片和取中腎、肝臟、脾臟組織制作印片并染色。

1.2.1 制片

血涂片的制備：用MS-222將魚體麻醉，注射器尾靜脈采血，制作血涂片。用生理鹽水將血液稀釋200倍后，在Neubauer計(jì)數(shù)板上完成血細(xì)胞計(jì)數(shù)。每尾魚制作15張血涂片，室溫晾干。

組織印片的制備：解剖似鲇高原鰍，取出中腎、肝臟及脾臟組織，生理鹽水沖洗并用吸水紙吸干，橫切，制取印片。每尾魚每種組織制作15張印片，室溫晾干。

1.2.2 細(xì)胞形態(tài)觀察與計(jì)數(shù)

制作好的血涂片和組織印片用新配的2.5%戊二醛固定，Wright’s染色，中性樹膠封片，在Olympus100倍鏡下觀察并拍照。每張涂片和印片隨機(jī)選取10個(gè)視野，進(jìn)行血細(xì)胞分類、計(jì)數(shù)。各種細(xì)胞均選取30個(gè)，用Image-Pro Plus 6.0軟件進(jìn)行細(xì)胞和細(xì)胞核大小(長(zhǎng)徑×短徑)測(cè)定，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean ± SD)表示。

每張組織印片上隨機(jī)取10個(gè)視野，對(duì)其中的各類細(xì)胞都分為原始型、幼稚型及成熟型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，各類細(xì)胞均統(tǒng)計(jì)，總計(jì)5 000個(gè)，分別計(jì)算其所占的百分比，并測(cè)量印片上細(xì)胞的大小，不同類型細(xì)胞分別測(cè)量200個(gè)，用Image-Pro Plus 6.0軟件分析，其細(xì)胞大小用平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差(Mean ± SD)表示。

1.2.3 細(xì)胞化學(xué)特性的觀察

血涂片的化學(xué)染色參照Shigdar等[6]的方法。

過碘酸雪夫染色(periodic-acid schiff，PAS)主要著染糖原，陰性對(duì)照采用唾液淀粉酶消化處理，陽性反應(yīng)多糖部分被染成紅色。

蘇丹黑B(sudan black B，SBB)主要著染脂肪，陰性對(duì)照用丙酮處理，陽性反應(yīng)有黑斑出現(xiàn)，表示有脂類物質(zhì)存在。

1.2.4 細(xì)胞類型及發(fā)育階段的判定

細(xì)胞形態(tài)、類型和發(fā)育階段的判定參照Fijan[7]的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 似鲇高原鰍血細(xì)胞的比例及大小

在外周血涂片中可見成熟的紅細(xì)胞、粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞及血栓細(xì)胞，少見晚幼紅細(xì)胞，偶見無法辨別的細(xì)胞(約占白細(xì)胞中的比例為0.21%)；外周血細(xì)胞研究發(fā)現(xiàn)似鲇高原鰍總血細(xì)胞數(shù)(THC)為1.39×1012個(gè)/L，紅細(xì)胞占97.56%，白細(xì)胞占2.44%。外周血中各種白細(xì)胞細(xì)胞比例血栓細(xì)胞為最大，為52.86%，三種粒細(xì)胞中嗜中性粒細(xì)胞數(shù)量最多占30.25%，具體見表1。而在肝臟、中腎和脾臟中可見不同發(fā)生階段的紅細(xì)胞系、粒細(xì)胞系、淋巴細(xì)胞系和單核細(xì)胞系。在以上組織中，紅細(xì)胞系在脾臟中所占比例最大，粒細(xì)胞在中腎中所占比例最大，其次是脾臟，肝臟中未見原始型血細(xì)胞，具體見表1。似鲇高原鰍外周血及組織中血細(xì)胞大小見表2。

2.2 似鲇高原鰍血細(xì)胞的形態(tài)特征

2.2.1 紅細(xì)胞系各階段細(xì)胞形態(tài)特征

原紅細(xì)胞(proerythroblast，PEB)：圓形或橢圓形，偶有鈍的偽足，細(xì)胞質(zhì)較少且不均勻，被染成深藍(lán)色。胞核為圓形，占細(xì)胞絕大部分，中位，偶有偏位，周圍有一圈淺染環(huán)帶區(qū)，深紫紅色的染色質(zhì)呈網(wǎng)狀，核仁為藍(lán)色，但邊界不明顯，較平坦或有凹陷感。(圖版Ⅱ-1)

表1 似鲇高原鰍外周血及組織中各種血細(xì)胞的比例Tab.1 Percentage of various blood cells in the peripheral blood and tissues of T.siluroides

注：外周血一欄中血細(xì)胞均為成熟的血細(xì)胞，且嗜中性、嗜堿性 、嗜酸性粒細(xì)胞，單核細(xì)胞，淋巴細(xì)胞比例為占白細(xì)胞中的比例

表2 似鲇高原鰍外周血及組織中血細(xì)胞及其核的大小(平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差)Tab.2 Cell and nucleus sizes of various haematopoietic cells in the peripheral blood and tissues in T.siluroides(Mean ± SD) /μm

續(xù)表2

早幼紅細(xì)胞(basophilic erythrocyte，BEB)：胞體和胞核均稍小于原紅細(xì)胞，胞質(zhì)為藍(lán)色或灰藍(lán)色。胞核為圓形，仍占細(xì)胞絕大部分，中位或稍偏，淺染的環(huán)帶區(qū)依舊存在，紫紅色染色質(zhì)逐漸聚集，形成更粗糙的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，核仁小且逐漸消失。(圖版Ⅱ-2)

晚幼紅細(xì)胞(orthochromic erythroblast，OEB)：圓形，胞質(zhì)由灰藍(lán)色逐漸變?yōu)榻埸S色或磚紅色。胞核為圓形，此時(shí)縮小，稍偏一側(cè)，染色質(zhì)固縮成塊狀，間隙模糊不清。(圖版Ⅱ-3)

紅細(xì)胞(erythrocyte，E)：成熟的紅細(xì)胞為橢圓形或長(zhǎng)橢圓形，表面光滑，胞質(zhì)為磚紅色。胞核多為橢圓形偶有圓形，中位，濃密的染色質(zhì)染成深紫紅色，無核仁，偶爾可見正處于分裂狀態(tài)的紅細(xì)胞。(圖版Ⅰ-1～3；圖版Ⅱ-4～8)

2.2.2 粒細(xì)胞系各階段細(xì)胞形態(tài)特征

原粒細(xì)胞(granuloblast，GB)：圓形或橢圓形，與原紅細(xì)胞相似，常有鈍的偽足，胞質(zhì)少且不含顆粒，染成藍(lán)色。胞核圓形或橢圓形，位置居中或稍偏，細(xì)沙狀的染色質(zhì)分布均勻，核仁外凸，邊界明顯。(圖版Ⅱ-9)

粒細(xì)胞的發(fā)育階段可分為早幼、中幼、晚幼、成熟粒細(xì)胞(圖版Ⅱ-10～19)，具體如下：

早幼粒細(xì)胞(young netrophilic progranulocyte，YPG)：圓形或橢圓形，胞質(zhì)稍多，淡藍(lán)色，有淺紫紅色的嗜天青顆粒出現(xiàn)，由早期至晚期逐漸增多，顆粒大小不一。胞核為圓形或橢圓形，偏位，核質(zhì)比大于二分之一，染色質(zhì)逐漸由細(xì)沙狀變?yōu)榇稚盃?，核仁不清晰?圖版Ⅱ-10)

中幼粒細(xì)胞(progranulocyte，PG)：圓形或橢圓形，淺藍(lán)色的胞質(zhì)更為豐富，胞質(zhì)中的特殊顆粒因化學(xué)性質(zhì)不同而呈現(xiàn)不同的顏色，被染成淺粉色的是嗜中性中幼粒細(xì)胞(neutrophilic progranulocyte，NPG)(圖版Ⅱ-11)，覆蓋著深藍(lán)色顆粒的是嗜堿性中幼粒細(xì)胞(basophilic progranulocyte，BPG)(圖版Ⅱ-14)，染成紅色的是嗜酸性中幼粒細(xì)胞(eosinoopilc progranulocyte，EPG)(圖版Ⅱ-17)。胞核為橢圓形，偏位，核質(zhì)比約為二分之一，核仁完全消失。

圖版Ⅰ 似鲇高原鰍外周血細(xì)胞Plate Ⅰ Peripheral blood cells of T.siluroides

1.E.成熟紅細(xì)胞；2.DE.正在分裂的紅細(xì)胞；3.OEB.晚幼紅細(xì)胞；4.NG.嗜中性粒細(xì)胞；5.BG.嗜堿性粒細(xì)胞；6.EG.嗜酸性粒細(xì)胞；7.M.單核細(xì)胞；8.LL.大淋巴細(xì)胞；9.SL.小淋巴細(xì)胞；10.TH.血栓細(xì)胞；11.TH.聚集成群的血栓細(xì)胞；12.A.未知細(xì)胞；標(biāo)尺 = 10 μm。

晚幼粒細(xì)胞(metagranulocyte，MG)：圓形或橢圓形，胞質(zhì)豐富，淺藍(lán)色，依據(jù)特殊顆粒的顏色可分為嗜中性晚幼粒細(xì)胞(圖版Ⅱ-12)、嗜堿性晚幼粒細(xì)胞(圖版Ⅱ-15)和嗜酸性晚幼粒細(xì)胞(圖版Ⅱ-18)。胞核固縮成橢圓形、腎形或馬蹄形等不規(guī)則形狀，位置偏于細(xì)胞一側(cè)，染色質(zhì)聚集成塊狀。

嗜中性粒細(xì)胞(neutrophilic granulocyte，NG)：細(xì)胞呈圓形，胞質(zhì)內(nèi)充滿細(xì)小的無色中性顆粒。胞核形態(tài)多樣，為不規(guī)則的圓形、桿狀或分葉狀，偏于細(xì)胞一側(cè)。(圖版Ⅰ-4；圖版Ⅱ-13)

嗜堿性粒細(xì)胞(basophilic granulocyte，BG)：細(xì)胞多為圓形，胞質(zhì)呈淺藍(lán)色，有大小不一的嗜堿性顆粒。胞核為扁橢圓形、桿狀或分葉狀，偏位，染色質(zhì)致密。(圖版Ⅰ-5；圖Ⅱ-16)

嗜酸性粒細(xì)胞(eosinoopilc granulocyte，EG)：細(xì)胞呈圓形或橢圓形，胞質(zhì)為淡橘紅色，有細(xì)小的橘紅色顆粒。胞核形態(tài)多樣，有腎形、長(zhǎng)橢圓形和分葉形，常偏于細(xì)胞一側(cè)。(圖版Ⅰ-6；圖版Ⅱ-19)

2.2.3 單核細(xì)胞系各階段細(xì)胞形態(tài)特征

原單核細(xì)胞(monoblast，MB)：圓形或不規(guī)則形，體積是三系白細(xì)胞中最大的，胞質(zhì)灰藍(lán)色或淺藍(lán)色，不發(fā)亮呈網(wǎng)狀，常有偽鈍足，偶有空泡出現(xiàn)。胞核形狀多樣，常扭曲、折疊成不規(guī)則形狀，分布有不均勻的紫紅色纖細(xì)染色質(zhì)，核仁清晰。(圖版Ⅱ-20)

幼單核細(xì)胞(promonocyte，PM)：圓形或橢圓形，體積稍小于原單核細(xì)胞，胞質(zhì)增多，為灰藍(lán)色，常出現(xiàn)偽足或副漿，網(wǎng)狀，少有空泡，出現(xiàn)少量細(xì)小的紫紅色的嗜天青顆粒。胞核形狀不規(guī)則，常扭曲、折疊或分葉，染色質(zhì)開始聚集成網(wǎng)狀，但仍較纖細(xì)，核仁不明顯。(圖版Ⅱ-21)

單核細(xì)胞(Monocyte，M)：細(xì)胞呈圓形，體積稍小，胞質(zhì)為灰藍(lán)色，多有空泡和細(xì)小顆粒。細(xì)胞核不規(guī)則，折疊、扭曲或分葉，可呈馬蹄形或大腸狀，核質(zhì)比較大，染色質(zhì)凝集呈粗網(wǎng)狀。(圖版Ⅰ-7；圖版Ⅱ-22)

2.2.4淋巴細(xì)胞系各階段細(xì)胞形態(tài)特征

原淋巴細(xì)胞(lymphoblast，LB)：圓形，表面不光滑，有偽足伸出，胞質(zhì)很少，為深藍(lán)色，近核處有一淺染的環(huán)帶區(qū)，核周界明顯。胞核形狀多樣，有圓形或腎形，幾乎占據(jù)整個(gè)細(xì)胞，居中或略偏一旁，染色質(zhì)是三系細(xì)胞中最粗糙的，呈粗網(wǎng)狀，核仁清晰 ，有凹陷感。(圖版Ⅱ-23)

幼淋巴細(xì)胞(prolymphocyte，PL)：圓形或橢圓形，有偽足，胞質(zhì)稍多，深藍(lán)色，有嗜天青顆粒出現(xiàn)。胞核為圓形或偶有凹陷，染色質(zhì)粗糙且緊密，染成紫紅色，核仁逐漸消失。(圖版Ⅱ-24)

淋巴細(xì)胞(lymphocyte，L)：細(xì)胞呈圓形，胞體表面凹凸不平，胞質(zhì)為淡藍(lán)色，有少許嗜天青顆粒。核多不規(guī)則，幾乎占據(jù)整個(gè)細(xì)胞，染色致密。(圖版Ⅰ-8，9；圖版Ⅱ-25)

2.2.5 血栓細(xì)胞

血栓細(xì)胞(Thrombocyte，TH)：細(xì)胞呈橢圓形、紡錘形或不規(guī)則形，個(gè)體較小，細(xì)胞核大，有時(shí)幾乎看不到胞質(zhì)，像一個(gè)裸露的細(xì)胞核，通常聚集成群。(圖版Ⅰ-10，11；圖版Ⅱ-26)

2.3 似鲇高原鰍血細(xì)胞的化學(xué)特征

對(duì)似鲇高原鰍外周血細(xì)胞和組織進(jìn)行化學(xué)染色，結(jié)果見圖版Ⅲ。結(jié)果表明過碘酸雪夫(PAS)染色顯示，紅細(xì)胞均為陰性；所有白細(xì)胞的胞質(zhì)均染成紅色，為陽性。但不同種類的白細(xì)胞著色程度有所區(qū)別，淋巴細(xì)胞和血栓細(xì)胞都呈深紅色，呈強(qiáng)烈陽性；單核細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞次之；嗜酸性粒細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞著色較淺，呈弱陽性。蘇丹黑B(SBB)染色結(jié)果顯示嗜中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞呈棕黑色，顯陽性，但顏色的深淺根據(jù)細(xì)胞的成熟度逐漸增加。紅細(xì)胞和血栓細(xì)胞均呈陰性。(圖版Ⅲ)

3 討論

3.1 血細(xì)胞發(fā)生場(chǎng)所

對(duì)于血細(xì)胞發(fā)生場(chǎng)所的研究，不同的魚類結(jié)果有所差異。如長(zhǎng)鰭裸頰鯛(Lethrinuserythropterus)[8]、暗紋東方鲀(Takifuguobscurus)[9]和美國(guó)紅魚(Sciaenopsocellatus)[10]血細(xì)胞的主要發(fā)生場(chǎng)所在頭腎和中腎；而齊口裂腹魚(Schizothoraxprenanti)[11]、日本黃姑魚(Nibeajaponica)[12]、軍曹魚(Rachycentroncanadum)[13]等大多數(shù)魚類血細(xì)胞發(fā)生的主要場(chǎng)所除頭腎和中腎外還有脾臟。金麗[14]通過對(duì)長(zhǎng)吻鮠(Leioeasislongirostris)肝臟組織印片的研究，沒有觀察到原始型血細(xì)胞，認(rèn)為其可能不是造血器官；長(zhǎng)鰭裸頰鯛[8]和泥鰍(Misgurnusanguillicaudatus)[15]的情況與之相似。由此可見，大多數(shù)魚類血細(xì)胞發(fā)生場(chǎng)所主要由頭腎、中腎和脾臟組成。本研究發(fā)現(xiàn)成年似鲇高原鰍腎臟是粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的主要發(fā)生場(chǎng)所，脾臟中可見較多的原始單核細(xì)胞，肝臟中未見原始型血細(xì)胞，可能不是成年似鲇高原鰍的造血器官。岳興建[16]認(rèn)為硬骨魚類頭腎和腎臟的形態(tài)類型多樣，本課題組經(jīng)過大量的解剖實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)成年似鲇高原鰍頭腎幾乎未見，至于頭腎是否為其主要的造血器官還有待進(jìn)一步研究。

3.2 血細(xì)胞發(fā)育的規(guī)律

血細(xì)胞的發(fā)育規(guī)律通?？煞譃樵?、幼稚和成熟三個(gè)階段。

似鲇高原鰍紅細(xì)胞的發(fā)育過程從原紅細(xì)胞經(jīng)幼紅細(xì)胞再到成熟紅細(xì)胞，胞體形態(tài)由圓形變?yōu)闄E圓形，體積先由大變小，再由小變大，胞質(zhì)由少變多，顏色由深藍(lán)逐漸變淺，直至粉紅色，胞核由大到小，染色質(zhì)逐漸固縮成塊。完成功能后的紅細(xì)胞直接分裂，產(chǎn)生兩個(gè)衰老的紅細(xì)胞或一個(gè)衰老的紅細(xì)胞和一個(gè)紅細(xì)胞胞質(zhì)小體，這與日本黃姑魚[12]、長(zhǎng)吻鮠[14]和大彈涂魚[17]等研究類似。

似鲇高原鰍粒細(xì)胞的發(fā)育可分為原始粒細(xì)胞、早幼粒細(xì)胞、中幼粒細(xì)胞、晚幼粒細(xì)胞和成熟粒細(xì)胞五個(gè)階段，除原始和早幼階段，又根據(jù)胞質(zhì)內(nèi)的特殊顆粒將之分為中性、酸性和堿性[18]。粒細(xì)胞的發(fā)育過程中，胞體由大變小，胞核由圓形變?yōu)闄E圓形、腎形、桿狀或分葉型，核質(zhì)比由大逐漸變小，這與日本黃姑魚[12]、長(zhǎng)吻鮠[14]和大彈涂魚(Boleophthalmuspectinirostris)[17]的變化過程相同。不同魚類的三種粒細(xì)胞存在情況是有差異的，如長(zhǎng)吻鮠[14]、泥鰍[15]血細(xì)胞中未見嗜堿性粒細(xì)胞，軍曹魚[13]未見嗜酸性粒細(xì)胞，齊口裂腹魚[11,19]外周血中兩者均未見到。本研究發(fā)現(xiàn)似鲇高原鰍存在三種粒細(xì)胞，大量嗜中性粒細(xì)胞和少量的各階段的嗜堿性和嗜酸性粒細(xì)胞，這與日本黃姑魚[12]一致。嗜中性粒細(xì)胞是最常見的粒細(xì)胞[20]，具趨化、吞噬作用及活躍的運(yùn)動(dòng)能力[6]，似鲇高原鰍外周血細(xì)胞中嗜中性粒細(xì)胞所占比率高達(dá)30.25%，這對(duì)似鲇高原鰍的免疫抗病能力具有重要作用。

3.3 其他細(xì)胞

在本研究中還發(fā)現(xiàn)了3個(gè)核的細(xì)胞(圖版Ⅱ-27)和疑似吞噬細(xì)胞的細(xì)胞(圖版Ⅱ-28)，與王鳳計(jì)發(fā)現(xiàn)的人類白血病[21]中的幼稚淋巴細(xì)胞和吞噬細(xì)胞的形態(tài)一致，編者認(rèn)為是由淋巴造血組織增生引起的。而目前研究比較多的是紅細(xì)胞的核分裂及變形現(xiàn)象，認(rèn)為是這種核的表面積增大，有利于核孔的物質(zhì)核信息交流，或者是一種程序性衰老的現(xiàn)象[22]，似鲇高原鰍此類細(xì)胞的出現(xiàn)是否暗示著也具有淋巴細(xì)胞快速增生的能力或者是某種細(xì)胞衰老有待進(jìn)一步研究。而在外周血的研究中偶見無法辨別的細(xì)胞，這種細(xì)胞比紅細(xì)胞體積更大，細(xì)胞核染色質(zhì)較疏松，但是數(shù)量極少，與金麗[14]描述的形態(tài)多樣的核影細(xì)胞類似，并且在齊口裂腹魚[11]、斑點(diǎn)叉尾鮰(Ictaluruspunctatus)[7]等魚中也出現(xiàn)類似細(xì)胞，推測(cè)可能與人為因素(如采血的方法、涂片的速度及抗凝劑有無等)或?qū)嶒?yàn)魚個(gè)體生理狀況不同有關(guān)[7,14]。

3.4 似鲇高原鰍外周血細(xì)胞與發(fā)生血細(xì)胞大小的比較及分析

本研究發(fā)現(xiàn)似鲇高原鰍外周血中的成熟的嗜中性粒細(xì)胞體積明顯比組織中的小，類似現(xiàn)象在日本黃姑魚[12]的嗜中性粒細(xì)胞，長(zhǎng)鰭裸頰鯛[8]的血栓細(xì)胞上也有所體現(xiàn)。一般認(rèn)為血細(xì)胞在造血器官或組織中產(chǎn)生，發(fā)育成熟或接近成熟時(shí)才釋放到血液中。而同一類成熟的血細(xì)胞造血組織和外周血中的體積出現(xiàn)差異，本作者猜測(cè)可能與其具體的成熟程度相關(guān)，然而魚類血細(xì)胞發(fā)育詳細(xì)階段的研究仍然未見。

本研究還對(duì)似鲇高原鰍的雌雄個(gè)體間血細(xì)胞形態(tài)及血液指標(biāo)做了比較，沒有差異故沒有列出。最近對(duì)斗魚(Bettasplendens)雌雄血細(xì)胞的研究也發(fā)現(xiàn)，不同性別魚的血細(xì)胞形態(tài)及血液指標(biāo)差異不顯著[23]，在齊口裂腹魚[19]、長(zhǎng)薄鰍(Leptobotiaelongata)[24]等魚中也存在這樣的現(xiàn)象。

3.5似鲇高原鰍與部分魚類外周血細(xì)胞化學(xué)染色的比較及分析

通過對(duì)似鲇高原鰍、貝氏高原鰍(T.bleekeri)[25]、長(zhǎng)薄鰍[24]、黃石爬鮡(Euchiloglaniskishinouyei)[26]和齊口裂腹魚[19]血細(xì)胞的化學(xué)染色情況對(duì)比分析。在似鲇高原鰍外周血中，所有種類的白細(xì)胞PAS染色均呈陽性，即均含糖類物質(zhì)。這與同屬于冷水魚類的黃石爬鮡[26]的報(bào)道一致。隨著細(xì)胞發(fā)育程度的加深，胞體顏色也逐漸加深，體現(xiàn)了似鲇高原鰍體內(nèi)糖原的累積過程。通過SBB染色顯示，除粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞呈陽性，其余細(xì)胞均為陰性。與同屬冷水性魚類的黃石爬鮡和齊口裂腹魚都有相似之處，但與同屬鰍科的貝氏高原鰍、長(zhǎng)薄鰍不同。由此可以得出不同魚類血細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的有無與其生活的環(huán)境有密切關(guān)系。

圖版Ⅱ 似鲇高原鰍組織中血細(xì)胞Plate Ⅱ Blood cells in tissues of T.siluroides

1.PEB.原紅細(xì)胞；2.BEB.早幼紅細(xì)胞；3.POE.中幼紅細(xì)胞；4.OEB.晚幼紅細(xì)胞；5.E.紅細(xì)胞；6.E.衰老的紅細(xì)胞；7.E.溶解的紅細(xì)胞；8.DE.分裂的紅細(xì)胞；9.GB.原粒細(xì)胞；10.YPG.早幼粒細(xì)胞；11.NPG.嗜中性中幼粒細(xì)胞；12.NMG.嗜中性晚幼粒細(xì)胞；13.NG.嗜中性粒細(xì)胞；14.BPG.嗜堿性中幼粒細(xì)胞；15.BMG.嗜堿性晚幼粒細(xì)胞；16.BG.嗜堿性粒細(xì)胞；17.EPG.嗜酸性中幼粒細(xì)胞；18.EMG.嗜酸性晚幼粒細(xì)胞；19.EG.嗜酸性粒細(xì)胞；20.MB.原單核細(xì)胞；21.PM.幼單核細(xì)胞；22.M.單核細(xì)胞；23.LB.原淋巴細(xì)胞；24.PL.幼淋巴細(xì)胞；25.L.淋巴細(xì)胞；26.TH.血栓細(xì)胞；27，28.A.B.未知細(xì)胞；標(biāo)尺 = 10 μm

圖版Ⅲ 似鲇高原鰍外周血和組織的 PAS 及 SBB 染色Plate Ⅲ Peripheral blood and tissue of blood cells imprint as revealed by PAS and SBB staining in T.siluroides1～13.PAS 染色；14～22.SBB 染色.1～5；15～17外周血涂片；6～14；18～22組織印片1,8，14,20.G.粒細(xì)胞；2,11，15,21.M.單核細(xì)胞；3,12，16，22.L.淋巴細(xì)胞；4,13.TH.血栓細(xì)胞；5,17.YPG.早幼粒細(xì)胞；6，18，PG.中幼粒細(xì)胞；7,19.MG.晚幼粒細(xì)胞；9.MB.原單核細(xì)胞；10.PM.幼單核細(xì)胞；標(biāo)尺=10 μm

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