鞏紀(jì)丹

摘 要： 目的 對羥基喜樹堿的凍干工藝進(jìn)行研究，探討包被材料對其溶出度、藥動和藥效的影響。方法 以環(huán)糊精作為包被材料，使用凍干機(jī)凍成粉針，HPLC法測定藥物含量，使用大鼠做藥動研究，腫瘤細(xì)胞做體外藥效研究。結(jié)果 使用環(huán)糊精包被后使羥基喜樹堿在水中的溶解度提高了120倍，主藥經(jīng)5min完全溶出，經(jīng)過包被凍干提高了主藥的生物利用度，藥效明顯提高。結(jié)論 環(huán)糊精能提高羥基喜樹堿在水中的溶解度，凍干粉針溶出快，生物利用度高，藥效增強(qiáng)。

關(guān)鍵詞： 羥基喜樹堿；環(huán)糊精；凍干；工藝研究

喜樹堿是從中國特有的植物—喜樹中提取的一種生物堿，羥基喜樹堿是喜樹堿的天然衍生物，具有廣譜抗腫瘤活性，在肺癌、直腸癌、乳腺癌等各種臨床癌癥上都表現(xiàn)出抗腫瘤活性[1-3]。羥基喜樹堿在水中溶解度低，穩(wěn)定性差，易分解，限制了其臨床應(yīng)用。為了提高該藥的臨床應(yīng)用，本研究以臨床上有廣泛應(yīng)用，且具有水中溶解度高、安全穩(wěn)定、耐堿、光和熱等良好性質(zhì)的環(huán)糊精為包被材料，開發(fā)了一種羥基喜樹堿凍干粉針的制備方法，并對其溶出度、生物利用度、藥效和藥動進(jìn)行了研究。

1材料與方法

1.1 材料

羥基喜樹堿（CAS編號：19685-09-7，純度：99.5%以上，供應(yīng)商：四川南部誠信科技有限公司）。

環(huán)糊精（CAS編號：7585-39-9，純度：99%以上，供應(yīng)商：山東匯益科技有限公司）。

DMEM/F12培養(yǎng)基（貨號：D9785-lkg，供應(yīng)商：sigma公司）

高效液相色譜儀（型號：Ultimate 3000 SD HPLC，Thermo Fisher scientific）

凍干機(jī)（型號：VS-801FDP，無錫沃信儀器制造有限公司）

大鼠（性別：雄性，體重：180±20g，上海實(shí)驗(yàn)動物中心）

細(xì)胞（American type culture collection）

1.2 方法

1.2.1 包被物的制備

精確稱量10g環(huán)糊精，轉(zhuǎn)移至100ml燒杯內(nèi)，加入20ml pH值為5.0的PBS緩沖液溶解，加入過量的羥基喜樹堿，避光攪拌2～3h，加熱45℃促進(jìn)包被，過濾后加入賦形物，按照常規(guī)凍干工藝凍干成粉末，備用。

1.2.2 溶出

調(diào)整溶出儀轉(zhuǎn)速70rpm，溫度37℃，將1mg原料藥和等量的包被物加入至800ml溶出介質(zhì)中，定時取樣，HPLC法測定藥品含量。

1.2.3 藥動實(shí)驗(yàn)

大鼠眼球取血，12000rpm離心3min，分離血漿，加入預(yù)冷的乙腈甲醇混合物，12000rpm離心3min，取上清，HPLC法測羥基喜樹堿含量。

1.2.4 藥效學(xué)研究

腫瘤細(xì)胞經(jīng)貼壁傳代培養(yǎng)后，胰酶消化，按照5～6×103接種96孔板，靜置過夜培養(yǎng)，加入不同濃度的藥物繼續(xù)培養(yǎng)，在不同時間段分別加入MTT，培養(yǎng)5h，每孔加入適量DMSO，酶標(biāo)儀震蕩5min，490nm測定吸光度，計算IC50。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

使用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS16.0對藥動數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，行t檢驗(yàn)，以p<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 包被工藝

經(jīng)過單因素考察，最終確定包被溫度45℃，攪拌時間2h，溶液pH值為4.8，配制成的內(nèi)酯型水溶液在水中的溶解度為0.492mg/ml，比原料藥在水中溶解度提高近120倍。

2.2 溶出度

經(jīng)環(huán)糊精包被后，在介質(zhì)的經(jīng)5min完全溶出，而原料藥經(jīng)1和溶出度僅達(dá)到90%溶出。

2.3 藥動學(xué)研究

藥物回收率介于98.22～113.54%，日內(nèi)和日間精密度均小于5%。通過對藥代動力學(xué)參數(shù)研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)糊精包被的羥基喜樹堿的半衰期、藥時曲線下面積均顯著優(yōu)于對照的原料藥，說明環(huán)糊精包被能提升主藥的生物利用度。

2.4 腫瘤細(xì)胞藥效學(xué)研究

經(jīng)細(xì)胞毒性研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)環(huán)糊精包被的羥基喜樹堿的IC50值顯著低于羥基喜樹堿溶液的樹脂。

3 討論

羥基喜樹堿具有廣譜抗腫瘤活性，但由于水中溶解度低，限制了其臨床研究，如何提高其水中溶解度，一直是臨床研究的重點(diǎn)。郭宏紅[4]將羥基喜樹堿用聚電解質(zhì)鐵和硫酸葡聚糖包裹成微膠囊，起到緩釋作用，提升了體內(nèi)的半衰期和生物利用度。使用優(yōu)化的堿溶梯度酸聯(lián)合高壓均質(zhì)技術(shù)制備納米晶[5-9]，體外研究表明能顯著抑制腫瘤細(xì)胞的活性，體內(nèi)研究表明，顯著提高血漿半衰期，且與市售注射劑相比，抑瘤效果更好。在本研究中，以環(huán)糊精為包被劑，研究制備工藝，經(jīng)溶出試驗(yàn)可見，在水中的溶解度提高了120倍，主藥經(jīng)5min完全溶出，經(jīng)過包被凍干提高了主藥的生物利用度，藥效明顯提高。本研究結(jié)果與郭宏紅和楊曉鳳的研究結(jié)果基本一致。

本研究通過對羥基喜樹堿小試包被工藝、溶出度、體內(nèi)和體外研究，初步獲得了較為理想的效果，為進(jìn)一步的工藝放大提供了借鑒。

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