劉 丹，金良友，馮曉靈，李小山，張永慧△

(1.重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校 404120；2.重慶市抗腫瘤天然藥物工程技術(shù)研究中心 404120；3.重慶三峽學(xué)院 404120)

柚皮苷屬二氫黃酮類化合物,主要存在于蕓香科植物葡萄柚、橘、橙的果皮和果肉中,也是中草藥骨碎補、枳實枳殼、橘紅的主要有效成分。有研究表明，柚皮苷具有抗癌[1]、抗炎和保護心臟的藥理作用[2-3]。但關(guān)于柚皮苷對心肌缺血-再灌注損傷(MI/R)大鼠血流動力學(xué)的影響，報道較少。本實驗建立大鼠MI/R模型，觀察柚皮苷對MI/R大鼠血流動力學(xué)的影響，以探討其治療缺血性心血管病的作用機制。

1 材料與方法

1.1材料 BL-420S生物機能實驗系統(tǒng)、HX-300S呼吸機(成都泰盟科技有限公司)。柚皮苷(美國Sigma公司)純度大于或等于95%(HPLC法制得)；肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)測定試劑盒(南京建成生物工程研究所)。清潔級雄性SD大鼠50只，體質(zhì)量250～280 g[(陸軍軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院動物中心，合格證號：SCXK(渝)2007-0005]。

1.2方法

1.2.1動物分組 將大鼠分為柚皮苷10 mg/kg組、20 mg/kg組、40 mg/kg組、MI/R組、假手術(shù)組，每組10例。(1)柚皮苷10、20和40 mg/kg組分別灌胃，每天1次，共7次，末次灌胃后60 min行冠狀動脈左前降支結(jié)扎30 min，再灌注60 min；(2)MI/R組給予柚皮苷各劑量組等容量的生理鹽水灌胃，其他處理同上；(3)假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎，其他處理同上。

1.2.2模型制作 大鼠MI/R實驗?zāi)Ｐ蚚4]:取雄性SD大鼠,以烏拉坦(1 g/kg)腹腔注射。描記肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖。氣管插管，自左側(cè)第1～3肋開胸，采用人工呼吸機正壓呼吸。暴露大鼠心臟后，拉緊結(jié)扎線，使硅膠管壓迫冠狀動脈左前降支而致閉塞30 min，而后切斷結(jié)扎線再灌注120 min。冠狀動脈斷流及再通成功與否以心電圖肢體導(dǎo)聯(lián)的ST段抬高及恢復(fù)作為標準。符合上述標準的大鼠進入后面的實驗操作。

1.2.3血流動力學(xué)監(jiān)測 結(jié)扎大鼠冠狀動脈左前降支制備I/R模型，同時給予不同劑量的柚皮苷(10、20、40 mg/kg)，7 d后測定心電圖，采用BL-420S生物機能實驗系統(tǒng)監(jiān)測缺血前、缺血30 min及再灌注不同時間點的左室舒張末期內(nèi)壓(LVEDP)、左室收縮內(nèi)壓(LVSP)、左室內(nèi)壓最大上升/下降速率(±dp/dtmax)變化。

1.2.4CK、LDH活性測定 于實驗結(jié)束后立即于左頸總動脈取血5.0 mL，采用化學(xué)比色法測定血清CK和LDH活性。操作步驟按南京建成生物工程研究所試劑盒說明書進行。

2 結(jié) 果

2.1柚皮苷對MI/R大鼠血流動力學(xué)LVEDP和LVSP的影響 與假手術(shù)組相比，MI/R組大鼠的LVEDP升高(P<0.05)、LVSP降低(P<0.05)；與MI/R組相比，柚皮苷20/40 mg/kg組LVEDP降低(P<0.05)、LVSP升高(P<0.05)。見表1。

2.2柚皮苷對MI/R血流動力學(xué)+dp/dtmax和-dp/dtmax的影響 與假手術(shù)組相比，MI/R組大鼠+dp/dtmax、-dp/dtmax降低(P<0.05)。與MI/R組相比，柚皮苷中、高劑量組+dp/dtmax、-dp/dtmax升高(P<0.05)。見表2。

表1 柚皮苷對MI/R大鼠LVEDP和LVSP的影響

#：P<0.05，與假手術(shù)組比較；*：P<0.05，與MI/R 組比較

續(xù)表1 柚皮苷對MI/R大鼠LVEDP和LVSP的影響

#：P<0.05，與假手術(shù)組比較；*：P<0.05，與MI/R 組比較

表2 柚皮苷對MI/R大鼠+dp/dtmax和-dp/dtmax的影響

續(xù)表2 柚皮苷對MI/R大鼠+dp/dtmax和-dp/dtmax的影響

#：P<0.05，與假手術(shù)組比較；*：P<0.05，與MI/R組比較

續(xù)表2 柚皮苷對MI/R大鼠+dp/dtmax和-dp/dtmax的影響

#：P<0.05，與假手術(shù)組比較；*：P<0.05，與MI/R組比較

2.3各組大鼠血清中CK和LDH活性的變化 與假手術(shù)組相比，MI/R組大鼠血清中CK和LDH活性升高(P<0.05)；與MI/R組相比，柚皮苷3個不同劑量組血清中CK和LDH活性降低(P<0.05)。見表3。

表3 柚皮苷對MI/R大鼠CK和LDH活性的影響

#：P<0.05，與假手術(shù)組比較；*：P<0.05，與MI/R 組比較

3 討 論

自1977年HEARSE首次提出MI/R概念以來，已逐漸引起醫(yī)學(xué)界的重視。所謂I/R是指細胞因缺血發(fā)生可逆性、可存活性的損傷，在恢復(fù)血流時這種損傷反而加重，并引起細胞死亡或進一步功能障礙。MI/RI表現(xiàn)為再灌注心律失常[5]、心肌頓抑、心肌組織超微結(jié)構(gòu)[6]及血流動力學(xué)改變[7]等。目前多數(shù)抗心肌缺血藥物產(chǎn)生心肌保護作用的機制之一是不同程度地改善血流動力學(xué)參數(shù),柚皮苷對心肌缺血再灌心臟的保護作用可能與其改善心功能低下時血流動力學(xué)的變化有關(guān)。

監(jiān)測血流動力學(xué)常用指標有LVEDP、LVSP、±dp/dtmax。LVEDP代表左室前負荷，也可以間接反映左室功能，左心室舒張功能不全或回心血量增加時LVEDP可升高，反之左室收縮加強或回心血量減少則LVEDP降低。LVSP是反映左室壓力常用指標。+dp/dtmax是反映心肌收縮性能常用指標，對各種變力性干預(yù)十分敏感，但在一定程度上受心率和前后負荷的影響，并與其呈正相關(guān)。-dp/dtmax反映左室的舒張功能，是心肌缺血早期心室舒張功能改變的敏感指標。若-dp/dtmax降低則表示左室舒張功能異常。心肌缺血期及再灌注期，上述各項心功能指標均表現(xiàn)出異常:LVSP、左室內(nèi)壓±dp/dtmax呈現(xiàn)進行性下降，LVEDP不斷升高[8]。

結(jié)果顯示，給予柚皮苷后可以減輕缺血后LVSP、±dp/dtmax的降低幅度；同時可以對抗LVEDP的升高。有研究表明，柚皮苷可通過清除自由基，增強抗氧化活性對缺氧/復(fù)氧損傷的H9c2細胞具有保護作用[9]。柚皮苷能保護心肌細胞對抗阿霉素誘導(dǎo)的心肌細胞損傷，降低GRP78的表達及ROS的產(chǎn)生，保護作用可能與其抗氧化應(yīng)激及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)[10]。柚皮苷通過清除自由基、增強抗氧化活性對腦、下肢缺血/再灌注損傷有保護作用[11-12]。柚皮苷對缺血再灌注心臟血流動力學(xué)改善的機制可能與其上述活性有關(guān)。

綜上所述，柚皮苷能改善缺血心肌的血流動力學(xué)，其結(jié)果為缺血性心臟病治療提供了實驗依據(jù)，值得進一步研究。

[1]CHEN R，QI Q L，WANG M T，et al.Therapeutic potential of naringin:an overview[J].Pharm Biol，2016,54(12):3203-3210.

[2]LIANGJ,WANGC,PENGJ,etal.Naringinregulatescholesterolhomeostasisandinhibits

inflammation via modulating NF-κB and ERK signaling pathways in vitro[J].Pharmazie，2016,71(2):101-108.

[3]CHEN J,GUO R,YAN H,et al.Naringin inhibits ROS activated MAPK pathway in high glucose induced injuries in H9c2 cardiac cells[J].Basic Clin Pharmacol Toxicol，2014,114(4):293-304.

[4]劉丹，孫品蘭，楊建平.柚皮甙對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用[J].中國老年學(xué)雜志，2013，33(24)：6217-6219.

[5]GHIASI R,MOHAMMADI M,MAJIDINIA M,et al.The effects of mebudipine on myocardial arrhythmia induced by ischemia-reperfusion injury in isolated rat heart[J].Cell Mol Biol (Noisy-le-grand)， 2016,62(13):15-20.

[6]MENG G,WANG J,XIAO Y,et al.GYY4137 protects against myocardial ischemia and reperfusion injury by attenuating oxidative stress and apoptosis in rats[J].J Biomed Res,2015,29(3):203-213.

[7]周燕瓊，石剛剛，高分飛，等.碘化N-正丁基氟哌啶醇對大鼠心肌缺血再灌注損傷血流動力學(xué)的影響[J].中國藥理學(xué)通報，2004，20(4)：449-452.

[8]韓勇，郭立榮，孔德營，等.20-HETE在心肌缺血再灌注損傷中的作用及機制研究[J].重慶醫(yī)學(xué)，2015,44(32)：4465-4468.

[9]CHEN R C,SUN G B,WANG J，et al.Naringin protects against anoxia/reoxygenation induced apoptosis in H9c2 cells via the Nrf2 signaling pathway[J].Food Funct,2015,6(4):1331-1344.

[10]簡春燕，郭潤民，劉丹銘，等.柚皮苷保護H9c2心肌細胞對抗阿霉素誘導(dǎo)的心肌毒性[J].中國藥理學(xué)通報，2014，30(2)：238-243.

[11]GAUR V，AGGARWAL A，KUMAR A．Protective effect of naringin against isehemic reperfusion cerebral injury：possible neurobehavioral，biochemical and cellular alterations in rat brain[J]．Eur J Pharmacol，2009，616(1/3)：147-154．

[12]GURSUL C,EKINCI AKDEMIR F N,et al．Protective effect of Naringin on experimental hindlimb ischemia/reperfusion injury in rats[J]．J Enzyme Inhib Med Chem,2016,31(1):56-61.