陶 陶，高 嵩

(中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院，遼寧 沈陽 110000)

宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)作為臨床上一類發(fā)病率較高的婦科惡性腫瘤，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢，且逐漸呈現(xiàn)出低齡化，對患者的生活質(zhì)量造成了較大的影響。目前，臨床上較為常用的CIN的方法較差，即需要采取積極有效的方法進(jìn)行解決[1]。由于CIN存在著自然逆轉(zhuǎn)、持續(xù)不變或者進(jìn)展成為宮頸癌的三個(gè)階段，而其中CIN及宮頸癌的免疫狀況則是將細(xì)胞免疫耐受作為主體，外周Treg/Th17細(xì)胞參與并維持著免疫平衡方面的作用，當(dāng)這免疫平衡方面失去原有的平衡之后，則會(huì)導(dǎo)致患者的自身免疫性疾病以及腫瘤開始發(fā)生發(fā)展[2]。Treg能夠通過分泌出白細(xì)胞介素10(interleukin-10，IL-10)及轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)等多種細(xì)胞因子，Th17能夠分泌IL-17，IL-6則在Th17 細(xì)胞的分化形成過程中起著積極的促進(jìn)作用，中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院針對收治的CIN患者展開研究與分析，針對其外周Treg/Th17細(xì)胞的表達(dá)水平進(jìn)行探討，結(jié)果報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院自2015年4年至2017年4月收治的30例CIN患者作為CIN組以及35例宮頸癌患者作為宮頸癌組，均經(jīng)過病理實(shí)驗(yàn)檢查后證實(shí)，術(shù)前均未接受常規(guī)放療及化療治療，同時(shí)也未服用過其他類型的藥物。另選擇同時(shí)收治的32例健康女性作為對照組，CIN組年齡在35～60歲，平均年齡為(47.1±3.9)歲，宮頸癌組年齡在33～62歲，平均年齡為(46.9±3.2)歲，對照組年齡在34～61歲，平均年齡為(46.3±3.5)歲，三組一般資料無明顯差異，具有可比性(P>0.05)。

1.2方法

采用流式細(xì)胞術(shù)對三組人員外周血單個(gè)核細(xì)胞中Th17細(xì)胞及Treg細(xì)胞的表達(dá)情況進(jìn)行檢測，另采用酶聯(lián)免疫吸附法對外周Treg/Th17細(xì)胞相關(guān)因子IL-23、IL-10、IL-17、IL-6及TGF-β的濃度進(jìn)行測量。Th17細(xì)胞的檢測方法為：將外周血單個(gè)核細(xì)胞提取出來后，進(jìn)行RPMI1640培養(yǎng)，接種在24孔培養(yǎng)板后，向其中加入PMA刺激劑、離子霉素、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)劑等[3]。放置在37℃、5%的CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)4h后，向其中加入FIFT-CD4抗體，給予避光孵育30min，行PBS洗滌2次，加入至固定液室內(nèi)給予避光孵育30min，接著洗滌2次，最后向其中加入PE-IL-17抗體，并進(jìn)行同型對照，于室溫條件下避光30min，使用破膜劑后上機(jī)檢測[4]。Treg細(xì)胞檢測方法為：取300μL的外周血，向其中加入8mL的紅細(xì)胞裂解液，共裂解12min后，給予離心處理，共離心5min，將上層清液去除后，加入2mL磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered solution，PBS)沖洗液，搖均勻后，離心處理，1 500r/min，離心5min后，去除掉上層清液，搖勻后完成加入抗體、固定、破膜、封閉劑、孵育等一系列過程中，上機(jī)檢測[5]。外周Treg/Th17細(xì)胞相關(guān)因子的測量方法為：取得外周血標(biāo)本2mL后，肝素抗凝處理，放置在離心機(jī)中，給予離心處理，離心速度為2 500r/min，共離心15min，后將上層清液放置在80℃的冰箱中保存[6]。采用酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)法對血漿中IL-23、IL-10、IL-17、IL-6及TGF-β的濃度進(jìn)行測量，測量的步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1 Treg與Th17細(xì)胞在CIN及宮頸癌患者外周血中的表達(dá)水平

CIN組與宮頸癌組分別與對照組相比CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞水平較高、CD4+IL-17+/CD4+T細(xì)胞表達(dá)水平較低，宮頸癌組與CIN組相比CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞水平較高、CD4+IL-17+/CD4+T細(xì)胞表達(dá)水平較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

Table 1 Expression levels of Treg and Th17 cells in peripheral blood in CIN and cervical cancer patients(%,±S)

注：t1(P1)為對照組與CIN組相比.t2(P2) 為對照組與宮頸癌組相比.t3(P3)為CIN組與宮頸癌組相比。

2.2外周Treg/Th17細(xì)胞相關(guān)因子在CIN及宮頸癌患者外周血中的表達(dá)水平

CIN組與宮頸癌組分別與對照組相比IL-10、TGF-β水平較高，IL-17、IL-23及IL-6水平較低，宮頸癌組與CIN組相比IL-10、TGF-β水平較高，IL-17、IL-23及IL-6水平較低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，見表2。

表2 外周Treg/Th17細(xì)胞相關(guān)因子在CIN及宮頸癌患者外周血中的表達(dá)水平

注：t1(P1)：對照組與CIN組相比；t2(P2)：對照組與宮頸癌組相比；t3(P3)：CIN組與宮頸癌組相比。

3討論

3.1 CIN及宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞免疫功能的關(guān)系

據(jù)調(diào)查資料顯示，腫瘤的發(fā)生發(fā)展與人體的免疫功能具有密切的相關(guān)性，其中T淋巴細(xì)胞的存在在其中起到了重要的作用，而Treg細(xì)胞作為一類具有較強(qiáng)免疫抑制特性的T淋巴細(xì)胞亞群，能夠在外周免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮重要的作用，并具有一定的臨床意義。有研究報(bào)道指出，CIN及宮頸癌的發(fā)病機(jī)制通常可受到機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答情況影響，能夠表現(xiàn)出免疫耐受的情況，當(dāng)CD4+T細(xì)胞中出現(xiàn)Th1/Th2平衡向Th2方向偏離時(shí)，則會(huì)導(dǎo)致NK細(xì)胞中所存在的抑制性受體與殺傷性受體發(fā)生明顯的平衡失調(diào)的情況[7]?？偨Y(jié)引起上述平衡失調(diào)的機(jī)制則在于Treg的調(diào)控作用，Treg的調(diào)控作用在于能夠?qū)γ庖吣褪苓M(jìn)行有效的誘導(dǎo)，并可促進(jìn)機(jī)體免疫應(yīng)答能力的明顯降低，同時(shí)促進(jìn)增加炎癥反應(yīng)，并顯著提高機(jī)體的防御反應(yīng)等，一旦此種調(diào)節(jié)作用被打破，則易導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生與進(jìn)一步的發(fā)展[8]。

3.2 CIN及宮頸癌患者外周Treg/Th17細(xì)胞的表達(dá)及意義

Treg發(fā)揮其作用主要是通過分泌細(xì)胞因子中IL-10及TGF-β所完成實(shí)現(xiàn)，通過對NK細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞及NKT等細(xì)胞進(jìn)行有效的調(diào)節(jié)與觸控，從而使得機(jī)體免疫應(yīng)答水平明顯降低[9]。而Th17細(xì)胞則通過產(chǎn)生大量的IL-6、IL-17等因子，促進(jìn)機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)明顯上調(diào)，并對初始T細(xì)胞分化成為Treg的過程進(jìn)行有效的促進(jìn)與誘導(dǎo)，導(dǎo)致Treg/Th17的平衡發(fā)生偏離[10]。而當(dāng)Treg/Th17的平衡發(fā)生偏離時(shí)則會(huì)引起CIN的進(jìn)展甚至導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生與惡化[11]。本次研究結(jié)果顯示，CIN組與宮頸癌組分別與對照組相比CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞水平較高，CD4+IL-17+/CD4+T細(xì)胞表達(dá)水平較低，宮頸癌組與CIN組相比CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T細(xì)胞水平較高,CD4+IL-17+/CD4+T細(xì)胞表達(dá)水平較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CIN組與宮頸癌組分別與對照組相比IL-10、TGF-β水平較高,IL-17、IL-23及IL-6水平較低，宮頸癌組與CIN組相比IL-10、TGF-β水平較高，IL-17、IL-23及IL-6水平較低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。結(jié)果提示，當(dāng)CIN向著宮頸癌的方向進(jìn)展時(shí)，Treg相關(guān)細(xì)胞因子的濃度會(huì)逐漸升高，而Th17相關(guān)因子的濃度則會(huì)逐漸降低，進(jìn)一步確定了宮頸病變及宮頸癌中Treg/Th17失衡的情況，原因是當(dāng)這種情況失衡后，腫瘤生長的炎性反應(yīng)則會(huì)逐漸減弱，這就對腫瘤生長提供了有利的環(huán)境。

綜上所述，隨著CIN向著宮頸癌方向的發(fā)展，Treg/Th17的平衡開始偏離，這就可能導(dǎo)致了CIN的進(jìn)展以及宮頸癌的發(fā)生發(fā)展，可能與二者參與了腫瘤免疫內(nèi)環(huán)境的調(diào)節(jié)相關(guān)。由于本次研究樣本量較少，收集到的數(shù)據(jù)可能存在一定的差異，可通過進(jìn)一步分析以獲得精確的結(jié)論。

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