唐曉敏，程軒軒，張春榮，梅凌峰，楊全*

(1.廣東藥科大學(xué) 中藥學(xué)院，廣州 510006；2.國(guó)家中醫(yī)藥管理局 嶺南藥材生產(chǎn)與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)研究室，廣州 510006；3.國(guó)家中藥材產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系 廣州綜合試驗(yàn)站，廣州 510006；4.廣東省南藥規(guī)范化種植與綜合開(kāi)發(fā)工程技術(shù)研究中心，廣州 510006)

廣金錢(qián)草Desmodiumstyracifolium(Osbeck)Merr.為豆科山螞蝗屬(Desmodium)植物，以干燥地上部分入藥，具有利濕退黃、利尿通淋的功效，主要用于治療黃疸尿赤、熱淋、石淋、小便澀痛、水腫尿少等癥[1]。隨著廣金錢(qián)草的廣泛應(yīng)用，其年消耗量越來(lái)越大，野生資源不能滿足人們醫(yī)療保健的需要和制藥企業(yè)對(duì)中藥材原料的需求。開(kāi)展人工種植，是緩和市場(chǎng)供求矛盾行之有效的方法，而進(jìn)行優(yōu)良種質(zhì)篩選是獲得優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)藥材的有效途徑。但廣金錢(qián)草以種子繁殖，栽培過(guò)程中發(fā)現(xiàn)群體中存在豐富的變異，這些變異類(lèi)型在化學(xué)成分及產(chǎn)量方面是否存在差異未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以栽培條件一致的當(dāng)年生廣金錢(qián)草為研究對(duì)象，測(cè)定分析不同變異類(lèi)型的產(chǎn)量及總黃酮、多糖、夏佛塔苷含量。揭示不同變異類(lèi)型與廣金錢(qián)草產(chǎn)量、質(zhì)量的關(guān)系，篩選優(yōu)良變異類(lèi)型，為廣金錢(qián)草品種選育奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 變異類(lèi)型的篩選及樣品處理

選擇栽培廣東藥藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)當(dāng)年生廣金錢(qián)草，由廣東藥科大學(xué)楊全教授鑒定為廣金錢(qián)草D.styracifolium。課題組經(jīng)過(guò)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，廣金錢(qián)草在植株形態(tài)上存在明顯差異，本文在田間調(diào)查的基礎(chǔ)上，將廣金錢(qián)草歸類(lèi)為4種變異類(lèi)型(表1)，不同變異類(lèi)型莖表皮顏色、莖表皮毛的狀態(tài)上存在差異。本研究對(duì)每個(gè)變異類(lèi)型選取30株，采收地上部分，曬干、切段、打粉為藥材分析樣品。

表1 廣金錢(qián)草不同變異類(lèi)型形態(tài)特征

1.2 檢測(cè)項(xiàng)目

1.2.1 總黃酮含量測(cè)定 參考程軒軒等[2]的響應(yīng)面法提取測(cè)定總黃酮含量，蘆丁作為對(duì)照品，在510 nm處測(cè)定吸光度值，以溶液濃度X(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程Y=0.0147X+0.0156(r=0.999)，線性范圍4.426～53.112 μg·mL-1。

1.2.2 多糖含量測(cè)定 參考程軒軒等[3]的響應(yīng)面法提取測(cè)定多糖含量，葡萄糖作為對(duì)照品，在490 nm處測(cè)吸光度值，以溶液濃度X(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)，吸光度Y為坐標(biāo)，得線性回歸方程Y=53.243X+0.003 9(r=1)，線性范圍3.000～15.000 μg·mL-1。

1.2.3 夏佛塔苷含量測(cè)定 參考2015版《中華人民共和國(guó)藥典》(以下簡(jiǎn)稱(chēng)《中國(guó)藥典》)的夏佛塔苷測(cè)定HPLC條件及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：流動(dòng)相為甲醇-水(32：68)；流速0.8 mL·min-1；柱溫：35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：272 nm；進(jìn)樣量：5 μL。以夏佛塔苷進(jìn)樣量X(μL)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=2 171.2X-5 623.2(r=0.999 9)。線性范圍75.4～980.2 ng。

2 結(jié)果與分析

2.1 廣金錢(qián)草不同變異類(lèi)型農(nóng)藝性狀及產(chǎn)量分析

通過(guò)表2可以看出，不同變異類(lèi)型廣金錢(qián)草在株高、地徑、分枝數(shù)沒(méi)有顯著差異，株高的變異范圍在68.80～77.03 cm，地徑變異范圍在7.56～7.74 mm，分枝數(shù)變異范圍在6.64～8.70條。而單株產(chǎn)量變化較大，在60.24～70.69 g，含量最高的是紫紅莖柔毛近貼生型，是綠莖柔毛直立型的1.17倍(P<0.05)。

表2 廣金錢(qián)草不同變異類(lèi)型農(nóng)藝性狀及產(chǎn)量分析

注：表中小寫(xiě)字母表示P值0.05水平差異顯著。

2.2 廣金錢(qián)草不同變異類(lèi)型化學(xué)成份含量比較

分別對(duì)4種廣金錢(qián)草變異類(lèi)型中葉、莖及混合樣品的總黃酮、多糖、夏佛塔苷含量進(jìn)行了測(cè)定(表3)，方差分析結(jié)果表明，不同變異類(lèi)型之間，存在一定的差異。其中，以總黃酮含量差別最大，葉、莖、莖葉混合樣品均達(dá)到了顯著水平，混合樣品相差1.43倍(P<0.05)。多糖含量和夏佛塔苷含量未表現(xiàn)出顯著差異。通過(guò)對(duì)莖、葉含量的分析表明，廣金錢(qián)草總黃酮和夏佛塔苷含量以葉片含量最高，多糖含量以莖含量最高。

表3 廣金錢(qián)草不同變異類(lèi)型藥材化學(xué)成份含量比較 mg·g-1

注：表中小寫(xiě)字母表示P值0.05水平差異顯著。

2.3 廣金錢(qián)草不同變異類(lèi)型單株化學(xué)成份含量比較

廣金錢(qián)草不同變異類(lèi)型的單株藥材中總黃酮、夏佛塔苷含量差異顯著(表4)，兩種化學(xué)成份含量變化趨勢(shì)相同，紫紅莖柔毛貼生型含量最高，綠莖柔毛直立型含量最低，總黃酮含量最高是最低的1.56倍(P<0.05)，夏佛塔苷含量最高是最低的1.37倍(P<0.05)。

表4 廣金錢(qián)草不同變異類(lèi)型單株化學(xué)成份含量比較 mg

注：表中小寫(xiě)字母表示0.05水平差異顯著。

3 討論

3.1 廣金錢(qián)草變異類(lèi)型與藥材產(chǎn)量

栽培廣金錢(qián)草主要依靠種子繁殖，存在豐富的變異分化，本文以人工栽培廣金錢(qián)草群體中篩選的4個(gè)變異明顯的個(gè)體為實(shí)驗(yàn)材料開(kāi)展了研究。結(jié)果表明，不同變異類(lèi)型廣金錢(qián)草藥材單株產(chǎn)量存在顯著差異，表現(xiàn)為紫紅莖柔毛近貼生型>紅莖柔毛直立型>翠綠莖柔毛直立型>綠莖柔毛直立型。說(shuō)明廣金錢(qián)草表型變異影響了產(chǎn)量的積累，為品種選育提供了新材料。

3.2 廣金錢(qián)草變異類(lèi)型與藥材質(zhì)量

夏佛塔苷是2015版《中國(guó)藥典》廣金錢(qián)草的主要活性成分，總黃酮、多糖是重要的有效成分，具有多種藥理作用[4-5]，三者含量的高低可以作為評(píng)判廣金錢(qián)草藥材質(zhì)量?jī)?yōu)劣的指標(biāo)之一。研究結(jié)果表明，總黃酮和夏佛塔苷含量在不同變異類(lèi)型間存在一定差異，均表現(xiàn)為紫紅莖柔毛近貼生型、紅莖柔毛直立型、翠綠莖柔毛直立型顯著高于綠莖柔毛直立型，說(shuō)明這三種類(lèi)型可以作為優(yōu)良變異類(lèi)型定向培育高夏佛塔苷、高總黃酮廣金錢(qián)草栽培品種。

廣金錢(qián)草優(yōu)良品種選育工作較為滯后，生產(chǎn)上沒(méi)有真正意義的良種，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為廣金錢(qián)草選擇育種提供參考。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：44-45.

[2] 程軒軒，郭楚楚，周鳳燕，等.響應(yīng)面法優(yōu)化廣金錢(qián)草中總黃酮的酶法提取工藝[J].華西藥學(xué)雜志，2015，30(1)：70-73.

[3] 程軒軒，郭楚楚，鄒鳳汝，等.響應(yīng)面法優(yōu)化廣金錢(qián)草多糖的酶法提取工藝[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2014，31(5)：544-549.

[4] 盧兗偉.廣金錢(qián)草及土大黃有效成分研究與應(yīng)用.博士后研究工作報(bào)告.中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，2003.

[5] 林瑤，黃鎖義，劉春媚，等.廣金錢(qián)草多糖抗氧化活性研究[J].中南藥學(xué)，2016，14(2)：130-133.