黃燕青++林玉葉

[摘要]目的 分析酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）和化學(xué)發(fā)光法（CLIA）對(duì)血清中HIV-1抗體、HIV-2抗體、HCV抗體的檢測(cè)意義。方法 選取2016年3月～2017年6月我院收集的血液標(biāo)本1188份，分別采用ELISA法和CLIA法對(duì)標(biāo)本進(jìn)行HIV-1抗體、HIV-2抗體、HCV抗體進(jìn)行檢測(cè)，以Western Blot檢測(cè)結(jié)果作為HIV-1抗體、HIV-2抗體檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)，以PCR檢測(cè)結(jié)果作為HCV抗體檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)。比較兩種方法的診斷效果。結(jié)果 在檢測(cè)HIV-1抗體、HIV-2抗體時(shí)，CLIA法與金標(biāo)準(zhǔn)Western blot的Kappa值為0.923，高于ELISA法與金標(biāo)準(zhǔn)Western blot的0.768。CLIA法的Youden指數(shù)為0.999，高于ELISA的0.832。在檢測(cè)HCV抗體時(shí)，CLIA法與金標(biāo)準(zhǔn)PCR的Kappa值為0.898，高于ELISA法與金標(biāo)準(zhǔn)PCR的0.831。CLIA法的Youden指數(shù)為0.905，高于ELISA的0.831。結(jié)論 CLIA法檢測(cè)血清HIV-1、HIV-2、HCV時(shí)具有靈敏度、特異度較高，與金標(biāo)準(zhǔn)高度一致的特點(diǎn)，值得臨床推廣。

[關(guān)鍵詞]酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法；化學(xué)發(fā)光法；人類免疫缺陷病毒；丙型肝炎病毒

[中圖分類號(hào)] R512.91 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2018）1（c）-0135-04

Application value analysis of ELISA and Chemiluminescence in detection of serum HIV-1，HIV-2 and HCV antibodies

HUANG Yan-qing LIN Yu-ye

Clinical Laboratory，People′s Hospital of Lancheng District of Jieyang City in Guangdong Province，Jieyang 522000，China

[Abstract]Objective To analyse the significance of ELISA and CLIA value on serum HIV-1 antibody，HIV-2 antibody，HCV antibody detection.Methods 1188 blood samples collected in our hospital from March 2016 to June 2017 were selected.HIV-1 antibody，HIV-2 antibody and HCV antibody were detected by ELISA and CLIA respectively.Western blot test results as HIV-1 antibody，HIV-2 antibody test gold standard，PCR test results as HCV antibody test gold standard，the diagnostic effects of both methods were compared.Results In the detection of HIV-1 antibody，HIV-2 antibody，the Kappa of CLIA method with Western blot was 0.923，which was higher than that of the ELISA method （0.768）.The Youden index of CLIA was 0.999，which was higher than that of the ELISA （0.832）.In the detection of HCV antibody，the Kappa of CLIA method with Western blot was 0.898，which was higher than that of the ELISA method （0.831）.The Youden index of CLIA was 0.905，which was higher than that of the ELISA （0.831）.Conclusion In the detection of HIV-1，HIV-2，HCV，the sensitivity，specificity of CLIA is higher，and more consistent with the gold standard，which is worthy of clinical promotion.

[Key words]Enzyme linked immunosorbent assay；Chemiluminescence immunoassay；Human immunodeficiency virus；Hepatitis C virus

艾滋?。╝cquired immune deficiency syndrome，AIDS）和病毒性肝炎（viral hepatitis，VH）均是我國乙類傳染?。╟ategory B infectious disease，CBID）。AIDS是由人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）引起，目前已經(jīng)證實(shí)HIV病毒分為2型，HIV-1型和HIV-2型[1]。丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）是病毒性肝炎的一種，可引起丙型肝炎，是導(dǎo)致急慢性肝炎、肝硬化和肝細(xì)胞癌的主要原因之一[2]。目前的研究結(jié)果顯示，HIV-1、HIV-2、HCV的感染率在近幾年出現(xiàn)明顯增長的趨勢(shì)，如何快速、有效地檢測(cè)HIV-1、HIV-2、HCV的感染，成為相關(guān)學(xué)者的研究熱點(diǎn)[3]?；诖耍狙芯客ㄟ^分別對(duì)1188例血液樣本進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）和化學(xué)發(fā)光法（chemiluminescence immunoassay，CLIA）檢測(cè)，分析ELISA法和CLIA法在檢測(cè)HIV-1、HIV-2、HCV中的意義，為今后的臨床檢驗(yàn)提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。endprint

1資料與方法

1.1一般資料

選取2016年3月～2017年6月份我院體檢中心收集的血液樣本1188分，其中男性血液樣本672份，女性血液樣本516份，樣本來源人群年齡為（36.72±7.22）歲。

1.2儀器及試劑

主要儀器：全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀為Hamilton FAME-2420（瑞士哈美頓）；全自動(dòng)蛋白印跡儀為Tecan（瑞士，帝肯）；全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀為sysmex HISCL-5000（日本，希森美康）。主要試劑：人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒（珠海，麗珠）；丙肝抗體檢查試劑盒（上海，科華）；HIV-1+2抗體免疫印跡試劑（新加坡，MP生物醫(yī)學(xué)亞太有限公司，HIVBLOT 2.2）；丙型肝炎病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒（RCR-熒光探針法）（中山大學(xué)，達(dá)安基因股份有限公司）。人類免疫缺陷病毒抗原抗體檢測(cè)試劑盒化學(xué)發(fā)光法（日本，希森美康）；丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒化學(xué)發(fā)光（日本，希森美康）。以上所有試劑均在有效期內(nèi)使用，并嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。

1.3檢查方法

所有樣本均由電腦生成編號(hào)，采集的血清樣本按一次使用量分裝，避免反復(fù)低溫冷凍。取樣后均放在-20℃冰箱中凍存，檢測(cè)前取出。所有檢測(cè)均由接受過專業(yè)培訓(xùn)的技師完成，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作及《全國艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》（2015年修訂版）[4]、《丙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》（2011年）[5]要求，進(jìn)行初篩、復(fù)檢及確證。以Western blot檢測(cè)結(jié)果作為HIV-1、HIV-2抗體檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)，以PCR檢測(cè)結(jié)果作為HCV抗體檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，靈敏度（真陽性率）=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%；特異度（真陰性率）=真陰性/（真陰性+假陽性）×100%；準(zhǔn)確度（符合率）=（真陽性+真陰性）/總數(shù)×100%；漏診率（假陰性率）=假陰性/（真陽性+假陰性）×100%；誤診率（假陽性率）=假陽性/（假陽性+真陰性）×100%；陽性預(yù)測(cè)值=真陽性/（真陽性+假陽性）×100%；陰性預(yù)測(cè)值=真陰性/（真陰性+假陰性）×100%。一致性分析采用Kappa檢驗(yàn)，以Kappa≥0.75記為一致性極高，0.75>Kappa≥0.40記為一致性較高，Kappa<0.40記為一致性較差。以Youden指數(shù)表示檢測(cè)真實(shí)性，Youden指數(shù)越大說明篩查實(shí)驗(yàn)的效果越好，真實(shí)性越大。

2結(jié)果

2.1 ELISA法、CLIA法檢測(cè)HIV-1、HIV-2結(jié)果分析

1188份血液標(biāo)本中，有6份（0.51%）樣本經(jīng)Western blot檢查后診斷為HIV感染，有5份（0.42%）樣本經(jīng)ELISA法檢查后診斷HIV感染，有6份（0.51%）樣本經(jīng)CLIA法檢查后診斷為HIV感染（表1）。

2.2 ELISA法、CLIA法檢測(cè)HCV結(jié)果分析

1188份血液標(biāo)本中，有56份（4.71%）樣本經(jīng)PCR檢查后診斷為HCV感染，有47份（3.96%）樣本經(jīng)ELISA法檢查后診斷HCV感染，有51份（4.29%）樣本經(jīng)CLIA法檢查后診斷為HCV感染（表2）。

2.3 ELISA法、CLIA法檢測(cè)HIV-1、HIV-2效能的比較

CLIA法與金標(biāo)準(zhǔn)Western blot的Kappa值為0.923，高于ELISA法與金標(biāo)準(zhǔn)Western blot的0.768。CLIA法的Youden指數(shù)為0.999，高于ELISA的0.832（表3）。

2.4 ELISA法、CLIA法檢測(cè)HCV效能的比較

CLIA法與金標(biāo)準(zhǔn)PCR的Kappa值為0.898，高于ELISA法與金標(biāo)準(zhǔn)PCR的0.831。CLIA法的Youden指數(shù)為0.905，高于ELISA的0.831（表4）。

3討論

盡管Western blot和PCR在HIV-1、HIV-2、HCV的診斷中具有較好的診斷靈敏度、特異度和準(zhǔn)確性，是目前診斷HIV-1、HIV-2、HCV的金標(biāo)準(zhǔn)[9-11]，但是由于該項(xiàng)檢查費(fèi)用昂貴，加之操作繁瑣，臨床應(yīng)用受到限制[12-14]。ELISA法是基于抗原或抗體與某種特異酶相結(jié)合形成酶標(biāo)抗原或酶標(biāo)抗體，這種物質(zhì)不僅可以保留抗體原有的免疫活性，還具有酶的生物活性，具有較高的測(cè)量精度[15-17]。CLIA法是發(fā)光免疫技術(shù)的一種，將發(fā)光系統(tǒng)與免疫反應(yīng)相結(jié)合，以檢測(cè)抗原或抗體的方法，臨床上應(yīng)用同樣也比較廣泛[16-17]。以臨床工作實(shí)踐角度來看，ELISA法的不足之處在于未進(jìn)行全自動(dòng)化操作，為手工操作，比較費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且重復(fù)性較差，同時(shí)，使用的試劑為定性試劑，不能作為定量試劑使用；而CLIA法較ELISA法操作更簡便，更節(jié)省時(shí)間，同時(shí)具有較強(qiáng)的重復(fù)性，并且為定量測(cè)定。

本研究通過分析CLIA法和ELISA法在HIV-1、HIV-2、HCV的診斷結(jié)果和效能，結(jié)果顯示，兩種方法在診斷HIV-1、HIV-2、HCV時(shí)均具有與金標(biāo)準(zhǔn)極高的一致性（Kappa值均>0.75），但CLIA法更優(yōu)于ELISA法（0.923 vs. 0.768；0.898 vs. 0.831）。CLIA法的Youden指數(shù)高于ELISA法，這一結(jié)果提示，應(yīng)用CLIA法進(jìn)行篩查實(shí)驗(yàn)的效果更好，真實(shí)性更大，張巧安[18]在其研究中也得出了類似結(jié)論。在檢測(cè)HIV-1、HIV-2時(shí)，CLIA法的檢測(cè)靈敏度為100.00%，檢測(cè)特異度為99.92%，高于ELISA法，同時(shí)誤診率和漏診率均低于ELISA法，這與陸韜宏等[19]的研究結(jié)果相類似。在檢測(cè)HCV時(shí)，CLIA法檢測(cè)靈敏度為91.07%，檢測(cè)特異度為99.47%，高于ELISA法，這一結(jié)果高于李微等[20]的研究報(bào)道。endprint

本研究對(duì)比CLIA法和ELISA法在HIV-1、HIV-2、HCV的診斷效能，結(jié)果提示，臨床工作中，在進(jìn)行HIV-1、HIV-2、HCV檢測(cè)時(shí)，CLIA法的檢測(cè)靈敏度、特異度、與金標(biāo)準(zhǔn)的Kappa值及Youden指數(shù)均高于ELISA法，因此，在臨床檢測(cè)HIV-1、HIV-2、HCV時(shí)，應(yīng)首先考慮應(yīng)用CLIA法，必要時(shí)需兩種方法結(jié)合使用，以最大程度降低誤診率和漏診率。

綜上所述，CLIA法檢測(cè)血清HIV-1、HIV-2、HCV具有靈敏度、特異度較高，與金標(biāo)準(zhǔn)高度一致的特點(diǎn)，值得臨床推廣。

[參考文獻(xiàn)]

[1]李敬云.提高對(duì)HIV-1急性感染和HIV-2診斷能力的檢測(cè)策略[J].中國艾滋病性病，2016，22（2）：138-141.

[2]Foster GR，Irving WL，Cheung MCM，et al.Impact of direct acting antiviral therapy in patients with chronic hepatitis C and decompensated cirrhosis[J].J Hepatol，2016，64（6）：1224-1231.

[3]Müller MM，F(xiàn)raile MIG，Hourfar MK，et al.Evaluation of two，commercial，multi-dye，nucleic acid amplification technology tests，for HBV/HCV/HIV-1/HIV-2 and B19V/HAV，for screening blood and plasma for further manufacture[J].Vox Sang，2013，104（1）：19-29.

[4]中國疾病預(yù)防控制中心.全國艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2015年修訂版）[J].中國病毒病雜志，2016，6（6）：401-427.

[5]李育芬，楚承霞，楊穎.HCV檢測(cè)方法研究進(jìn)展及其臨床意義[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2013，23（5）：1342-1344.

[6]石建新.3種乙型肝炎表面抗原ELISA診斷試劑的比較和評(píng)價(jià)[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2016，37（4）：554-555.

[7]姚芳，范一宏，曹倩，等.血清學(xué)標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)用于診斷克羅恩病的相關(guān)研究[J].中華消化雜志，2014，34（6）：384-387.

[8]許光銀，喬彩霞，王志玉.多項(xiàng)生物學(xué)標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)在重癥患者合并急性腎損傷早期診斷中的價(jià)值[J].中華腎臟病雜志，2014，30（3）：166-171.

[9]沈芳，陳戴紅，黃琴，等.人類免疫缺陷病毒/丙型肝炎病毒混合感染者免疫細(xì)胞和肝生化指標(biāo)的分析[J].微生物與感染，2007，2（1）：13-15.

[10]姜大娥.探討ELISA和化學(xué)發(fā)光法對(duì)血清中HIV-1/HIV-2抗體，梅毒抗體和丙肝抗體的檢測(cè)[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2012，22（3）：543-544.

[11]Ellegard R，Crisci E，Burgener A，et al.Complement opsonization of HIV-1 results in decreased antiviral and inflammatory responses in immature dendritic cells via CR3[J].J Immunol，2014，193（9）：4590-4601.

[12]Greenwald JL，Burstein GR，Pincus J，et al.A rapid review of rapid HIV antibody tests[J].Curr Infect Dis Rep，2006，8（2）：125-131.

[12]孫燕鳴，孫偉東，盧紅艷，等.北京市2005-2012年男男性行為者同伴推動(dòng)抽樣法HIV監(jiān)測(cè)分析[J].中華流行病學(xué)雜志，2016，37（10）：1383-1391.

[13]Nikolaeva IA，Mahboudi F，Chevalier A，et al.Evaluation of a eew anti-HIV1/2 ELISA-HIV 1/2 REC diagnostic kit based on E.coli derived soluble recombinant proteins：experience of an international study[J].Iran J Basic Med Sci，2015，28（1）：37-42.

[14]Swaminathan G，Pascual D，Rival G，et al.Hepatitis C virus core protein enhances HIV-1 replication in human macro phages through TLR2，JNK，and MEK1/2-dependent upregulation of TNF-α and IL-6[J].FEBS Letters，2014，588（18）：3501-3510.

[15]Molina JM，Capitant C，Spire B，et al.On-demand preexposure prophylaxis in men at high risk for HIV-1 infection[J].New Engl J Med，2015，373（23）：2237-2246.

[16]Malm K，Kragsbjerg E，Andersson S.Performance of liaison XL automated immunoassay platform for blood-borne infection screening on hepatitis B，hepatitis C，HIV 1/2，HTLV 1/2 and Treponema pallidum serological markers[J].Transfusion Med，2015，25（2）：101-105.

[17]Krawczyk A，Hintze C，Ackermann J，et al.Clinical performance of the novel DiaSorin LIAISONRXL murex：HBsAg Quant，HCV-Ab，HIV-Ab/Ag assays[J].J Clin Virol，2014， 59（1）：44-49.

[18]張巧安.ELISA法和化學(xué)發(fā)光法對(duì)血清中HIV-1、HIV-2抗體，梅毒抗體和丙肝抗體的檢測(cè)意義[J].廣東微量元素科學(xué)，2016，23（5）：17-19.

[19]陸韜宏，周國平，張晰.集中化檢測(cè)后上海地區(qū)血液核酸篩查數(shù)據(jù)的回顧性分析[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2016，18（3）：276-280.

[20]李微，溫馨娜，鄭慧麗.齊齊哈爾市無償獻(xiàn)血者血液 HBV，HCV，HIV 酶免檢測(cè)聯(lián)合核酸檢測(cè)結(jié)果分析[J].中國繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育，2016，8（21）：35-36.

（收稿日期：2017-11-29 本文編輯：祁海文）endprint