李連進(jìn) 佟建洲 孫文棟 張向前

為了對(duì)膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中PI3K/AKT通路的作用進(jìn)行探討，進(jìn)而將新的靶點(diǎn)提供給臨床治療腦膠質(zhì)瘤的工作，本研究探討了人腦膠質(zhì)瘤中PI3K/AKT通路蛋白在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

選取我院2014年5月至2016年5月收治的腦膠質(zhì)瘤患者84例，將其人腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本用手術(shù)切除下來(lái)，所有標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)為膠質(zhì)瘤標(biāo)本，均用10%甲醛固定，石蠟包埋切為4 μm厚的片，所有患者均知情同意。依據(jù)病理分級(jí)將這些患者分為低惡性組(Ⅰ～Ⅱ級(jí)，n=42)和高惡性組(Ⅲ～Ⅳ級(jí)，n=42)。低惡性組患者中男性25例，女性17例，平均(45.2±10.4)歲；腫瘤類型：6例毛細(xì)胞性性細(xì)胞瘤，16例纖維型星形細(xì)胞瘤，8例原漿型星形細(xì)胞瘤，6例少突膠質(zhì)瘤，6例少突星形細(xì)胞瘤；病理分級(jí)：6例Ⅰ級(jí)，36例Ⅱ級(jí)。高惡性組患者中男性23例，女性19例，平均(46.1±10.1)歲；腫瘤類型：7例毛細(xì)胞性性細(xì)胞瘤，15例纖維型星形細(xì)胞瘤，9例原漿型星形細(xì)胞瘤，6例少突膠質(zhì)瘤，5例少突星形細(xì)胞瘤；病理分級(jí)：8例Ⅲ級(jí)，34例Ⅳ級(jí)。將這些患者作為腦膠質(zhì)瘤組，另選取我院同期采集的40例正常腦組織作為正常對(duì)照組。3組標(biāo)本的一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 方法

購(gòu)買Cell Signaling Technology公司生產(chǎn)的工作濃度為1∶100的兔抗人濃縮型多克隆抗體PI3K，Bioworld Technology公司生產(chǎn)的工作濃度為1∶100的兔抗人濃縮型多克隆抗體AKT，上?；蚩萍加邢薰旧a(chǎn)的即用型EnVision及鼠抗人單克隆抗體PTEN即用型試劑盒，北京中山金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的DAB顯色試劑盒。連續(xù)切石蠟標(biāo)本為3張切片，厚度為4 μm，運(yùn)用免疫組化Envision二步法對(duì)其進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，嚴(yán)格依據(jù)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行相關(guān)操作。

1.3 結(jié)果判斷

免疫組化光鏡分析：PI3K、AKT、PTEN蛋白主要在胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)。由2名病理醫(yī)師閱片并評(píng)分，在此過(guò)程中分別運(yùn)用雙盲法和雙評(píng)分半定量法。光鏡下對(duì)8個(gè)高倍視野進(jìn)行隨機(jī)觀察，將4個(gè)高倍視野中染色陽(yáng)性百分率記錄下來(lái)，積分標(biāo)準(zhǔn)為靶細(xì)胞陽(yáng)性率0、1%～10%、11%～50%、51%～80%、>80%分別評(píng)定為0分、1分、2分、3分、4分。依據(jù)切片中細(xì)胞顯色染色深淺情況為顯色度積分，細(xì)胞無(wú)淺色、淺棕黃色、棕黃色、棕褐色分別評(píng)定為0分、1分、2分、3分，最后將兩項(xiàng)分相乘，分為陰性組(-)、弱陽(yáng)性組(+)、陽(yáng)性組(++)、強(qiáng)陽(yáng)性組(+++)4組，分別評(píng)定為0分、1～2分、3～4分、>4分[1]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

在計(jì)算機(jī)中輸入實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包SPSS 19.0 for Windows，用χ2檢驗(yàn)?zāi)z質(zhì)瘤不同病理分級(jí)與正常腦組織中PI3K、AKT、PTEN蛋白的表達(dá)，用Pearson卡方、Fisher精確概率法檢驗(yàn)理論值，用Spearman等級(jí)相關(guān)分析對(duì)PI3K、AKT、PTEN蛋白表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 膠質(zhì)瘤不同病理分級(jí)與正常腦組織中PI3K、AKT、PTEN蛋白表達(dá)比較

腦膠質(zhì)瘤組PI3K、AKT陽(yáng)性率均顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)，PTEN陽(yáng)性率顯著低于正常對(duì)照組(P<0.05)。高惡性組PI3K、AKT陽(yáng)性率均顯著高于低惡性組(P<0.05)，PTEN陽(yáng)性率顯著低于低惡性組(P<0.05)。高惡性組、低惡性組PI3K、AKT陽(yáng)性率均顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)，PTEN陽(yáng)性率顯著低于正常對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 膠質(zhì)瘤不同病理分級(jí)與正常腦組織中PI3K、AKT、PTEN蛋白表達(dá)比較(例，%)

注：#為與低惡性組比較，P<0.05；*為與正常對(duì)照組比較，P<0.05。

2.2 人腦膠質(zhì)瘤中PI3K、AKT、PTEN蛋白表達(dá)之間的相關(guān)性

84例人腦膠質(zhì)瘤組織中，66例PI3K、AKT蛋白共同陽(yáng)性表達(dá)，10例共同陰性表達(dá)。人腦膠質(zhì)瘤中PI3K、AKT與PTEN蛋白表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(γ=-4.56,P<0.05)，而PI3K與AKT呈顯著的正相關(guān)關(guān)系(γ=3.36,P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 人腦膠質(zhì)瘤中PI3K、AKT、PTEN蛋白表達(dá)之間的相關(guān)性/例

3 討論

腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病是多因素多基因作用的結(jié)果，從本質(zhì)上來(lái)說(shuō)，細(xì)胞增殖、分化、凋亡均會(huì)在各種致癌物誘發(fā)細(xì)胞癌變的過(guò)程中失控，而細(xì)胞的信道轉(zhuǎn)導(dǎo)對(duì)這些過(guò)程起到了決定性作用[2]。很多相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明[3-4]，在人腦惡性膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，PI3K/AKT信號(hào)通路可能發(fā)揮著極為重要的作用。PI3K/AKT信號(hào)通路一方面對(duì)細(xì)胞的增殖、凋亡造成直接而深刻的影響，另一方面也對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)、對(duì)化療的反應(yīng)造成直接而深刻的影響，針對(duì)此信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的抑制劑也將顯著的化療增敏作用顯示了出來(lái)，其在細(xì)胞內(nèi)將對(duì)凋亡進(jìn)行抑制、為增殖提供良好的前提條件的關(guān)鍵作用充分發(fā)揮出來(lái)的途徑為對(duì)下游多種效應(yīng)分子的活化狀態(tài)進(jìn)行影響[5]。相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明[6-8]，白血病、結(jié)腸癌等一些腫瘤細(xì)胞耐藥性受到PI3K/AKT途徑的直接而深刻的影響。在白血病等腫瘤的化療過(guò)程中，常規(guī)化療藥物和針對(duì)該途徑的抑制劑的協(xié)同作用已經(jīng)將促進(jìn)化療效率顯著提升、耐藥顯著降低的作用顯示了出來(lái)[9]。但是目前，還很少有相關(guān)醫(yī)學(xué)研究報(bào)道腦膠質(zhì)瘤組織中該信號(hào)傳導(dǎo)通路的表達(dá)[10]。

本研究結(jié)果表明，腦膠質(zhì)瘤組PI3K、AKT陽(yáng)性率均顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)，PTEN陽(yáng)性率顯著低于正常對(duì)照組(P<0.05)，其中高惡性組PI3K、AKT陽(yáng)性率均顯著高于低惡性組(P<0.05)，PTEN陽(yáng)性率顯著低于低惡性組(P<0.05)，高惡性組、低惡性組PI3K、AKT陽(yáng)性率均顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)，PTEN陽(yáng)性率顯著低于正常對(duì)照組(P<0.05)，和上述相關(guān)醫(yī)學(xué)研究結(jié)果一致。本研究結(jié)果還表明，84例人腦膠質(zhì)瘤組織中，66例PI3K、AKT蛋白共同陽(yáng)性表達(dá)，10例共同陰性表達(dá)。人腦膠質(zhì)瘤中PI3K、AKT與PTEN蛋白表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(P<0.05)，而PI3K與AKT呈顯著的正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)，說(shuō)明在膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，PI3K、AKT與PTEN可能相互拮抗，PTEN表達(dá)缺失可能受到AKT表達(dá)過(guò)度的直接而深刻的影響，三者可能共同為膠質(zhì)瘤的惡性進(jìn)展提供了良好的前提條件。同時(shí)，在膠質(zhì)瘤的治療中，在PTEN失活的情況下，PI3K、AKT可稱為2個(gè)靶點(diǎn)。

總之，人腦膠質(zhì)瘤中PI3K/AKT通路蛋白在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)提升，與膠質(zhì)瘤病理分級(jí)呈顯著的正相關(guān)關(guān)系，值得臨床充分重視。

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